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构建和鉴定PTEN基因的shRNA重组腺病毒表达载体
被引量：
3
1
作者
韦永琼
曾照芳
陈力学
《南方医科大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2009年第12期2414-2417,2420,共5页
目的构建PTEN特异性shRNA重组腺病毒表达载体,为应用基因沉默技术进行缺血性脑损伤的基因治疗奠定基础。方法将前期构建的PTENshRNA特异性真核表达载体pGenesil-1-shRNA的表达启动子U6连同shRNA亚克隆至穿梭质粒pAdTrack,酶切及DNA测序...
目的构建PTEN特异性shRNA重组腺病毒表达载体,为应用基因沉默技术进行缺血性脑损伤的基因治疗奠定基础。方法将前期构建的PTENshRNA特异性真核表达载体pGenesil-1-shRNA的表达启动子U6连同shRNA亚克隆至穿梭质粒pAdTrack,酶切及DNA测序鉴定后,将含PTEN基因的重组穿梭质粒pAdTrack-U6-shRNA经PmeI线性化后转化入pAdEasy-1感受态细菌。pAd-U6-shRNA质粒经PacI线性化后转染293细胞,包装重组腺病毒Ad-U6-shRNA,并进行PCR鉴定、病毒滴度测定及Westernblotting检测受感染海马神经元细胞内PTEN蛋白的表达。结果证实pAdTrack-U6-shRNA及pAd-U6-shRNA质粒构建正确,收获病毒后PCR及DNA测序结果证明Ad-U6-shRNA包被成功,受腺病毒感染海马神经元细胞内PTEN蛋白表达明显降低。结论成功构建了PTEN基因的shRNA重组腺病毒载体Ad-U6-shRNA,为应用基因沉默技术研究PTEN对缺血性脑损伤后的神经保护作用奠定了基础。
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关键词
PTEN基因
RNA干扰
腺病毒
表达载体
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职称材料
题名
构建和鉴定PTEN基因的shRNA重组腺病毒表达载体
被引量：
3
1
作者
韦永琼
曾照芳
陈力学
机构
重庆医科大学医学检验系/临床检验诊断学教育部重点实验室
重庆医科大学
第一附属医院
重庆
市神经病
学
重点
实验室
出处
《南方医科大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2009年第12期2414-2417,2420,共5页
基金
重庆市自然科学基金(2007BB5287)
文摘
目的构建PTEN特异性shRNA重组腺病毒表达载体,为应用基因沉默技术进行缺血性脑损伤的基因治疗奠定基础。方法将前期构建的PTENshRNA特异性真核表达载体pGenesil-1-shRNA的表达启动子U6连同shRNA亚克隆至穿梭质粒pAdTrack,酶切及DNA测序鉴定后,将含PTEN基因的重组穿梭质粒pAdTrack-U6-shRNA经PmeI线性化后转化入pAdEasy-1感受态细菌。pAd-U6-shRNA质粒经PacI线性化后转染293细胞,包装重组腺病毒Ad-U6-shRNA,并进行PCR鉴定、病毒滴度测定及Westernblotting检测受感染海马神经元细胞内PTEN蛋白的表达。结果证实pAdTrack-U6-shRNA及pAd-U6-shRNA质粒构建正确,收获病毒后PCR及DNA测序结果证明Ad-U6-shRNA包被成功,受腺病毒感染海马神经元细胞内PTEN蛋白表达明显降低。结论成功构建了PTEN基因的shRNA重组腺病毒载体Ad-U6-shRNA,为应用基因沉默技术研究PTEN对缺血性脑损伤后的神经保护作用奠定了基础。
关键词
PTEN基因
RNA干扰
腺病毒
表达载体
Keywords
PTEN
RNA interference
adenovirus
expression vector
分类号
R346 [医药卫生—基础医学]
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题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
构建和鉴定PTEN基因的shRNA重组腺病毒表达载体
韦永琼
曾照芳
陈力学
《南方医科大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2009
3
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