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肿瘤特异的sea基因真核表达质粒的构建及在肺癌细胞中的功能研究 被引量：1
1
作者 朱大冕 陈全 +1 位作者 李奕璇 朱道银 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第5期109-112,121,共5页
构建Survivin启动子调控的葡萄球菌肠毒素A(SEA)的真核表达质粒,检测其在人肺腺癌A549细胞中的特异性表达以及表达产物的超抗原活性。以PCR法扩增sea基因,以含有Survivin启动子为调控序列的pGL-S-RED质粒为基础,构建pGL-S-SEA真核表达... 构建Survivin启动子调控的葡萄球菌肠毒素A(SEA)的真核表达质粒,检测其在人肺腺癌A549细胞中的特异性表达以及表达产物的超抗原活性。以PCR法扩增sea基因,以含有Survivin启动子为调控序列的pGL-S-RED质粒为基础,构建pGL-S-SEA真核表达质粒。用脂质体转染A549细胞,以RT-PCR法检测sea基因表达水平。制备健康献血者PBMC,用pGL-S-SEA质粒转染A549细胞的上清液和细胞裂解液进行PBMC刺激试验,以MTT法检测其促细胞增殖效应。结果显示,成功构建Survivin启动子调控的真核表达质粒pGL-S-SEA。重组质粒在A549细胞中启动了sea基因的表达,其转录强度为内参(GADPH基因)的65.96%,在对照MRC-5细胞中无明显表达。该质粒转化A549细胞的裂解液具有促进人PBMC增殖活性、上清液无明显促PBMC增殖作用,裂解液组、上清液组和PHA阳性对照组的刺激指数分别为1.29、0.95和1.58。结论成功构建pGL-S-SEA质粒,其在A549细胞的表达产物具有诱导人PBMC增殖的超抗原活性,为下一步将其作为基因疫苗治疗肺癌奠定了基础。 展开更多
关键词 葡萄球菌肠毒素A 肺癌 基因治疗
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乳腺癌B7-H4异常表达及与肿瘤内CD8^+T细胞浸润IFN-γ分泌的相关性研究 被引量：3
2
作者 黄文炼 徐曼 +2 位作者 王婷婷 耿卫朴 陈瑜 《中国肿瘤临床》 CAS CSCD 北大核心 2012年第15期1096-1099,1103,共5页
目的:探讨B7同源体4(B7 homolog 4,B7-H4)在人乳腺癌组织的表达及其与肿瘤内CD4^+T、CD8^+T细胞的数量和IFN-γ细胞因子分泌的关系。方法:应用S-P免疫纽织化学染色检测B7-H4在乳腺癌、癌旁组织和乳腺良性病变组织中的表达;间接免疫荧光... 目的:探讨B7同源体4(B7 homolog 4,B7-H4)在人乳腺癌组织的表达及其与肿瘤内CD4^+T、CD8^+T细胞的数量和IFN-γ细胞因子分泌的关系。方法:应用S-P免疫纽织化学染色检测B7-H4在乳腺癌、癌旁组织和乳腺良性病变组织中的表达;间接免疫荧光双标染色分析乳腺癌组织内浸润的CD4^+T、CD8^+T细胞数量及TGF-β1和IFN-γ分泌情况。结果:B7-H4在乳腺癌、乳腺良性病变和癌旁组织的阳性表达率分别为75.0%、37.5%和25.0%,三组间存在显著性差异(均P<0.01);B7-H4阳性乳腺癌组织内浸润的CD8^+T细胞及IFN-γ分泌细胞数量明显低于B7-H4阴性的乳腺癌组织(P<0.05),但B7-H4的表达与乳腺癌组织内浸润的CD4^+T细胞及TGF-β1分泌细胞数量无关。结论:B7-H4在乳腺癌中表达明显上调,并与抑制CD8^+T细胞浸润和分泌IFN-γ有关。B7-H4在下调乳腺癌抗肿瘤细胞免疫中具有一定作用。 展开更多
关键词 B7-H4 乳腺癌 T淋巴细胞 TGF-β1 IFN-Γ
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lncRNA ENST 933在乳腺癌中的作用及其机制研究
3
作者 邓钰梅 陈俊霞 《陆军军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第14期1676-1694,共19页
目的探讨长链非编码RNA ENST00000579933(简称lncRNA ENST 933)对乳腺癌(breast cancer,BC)发展的调控机制。方法通过实时荧光定量聚合酶链反应(real-time fluorescent quantitative polymerase chain reaction,RT-qPCR)检测lncRNA ENST... 目的探讨长链非编码RNA ENST00000579933(简称lncRNA ENST 933)对乳腺癌(breast cancer,BC)发展的调控机制。方法通过实时荧光定量聚合酶链反应(real-time fluorescent quantitative polymerase chain reaction,RT-qPCR)检测lncRNA ENST 933在BC组织和BC细胞系(MCF-7、MDA-MB-231、MDA-MB-453)中的表达;运用细胞计数试剂盒-8(cell counting kit-8,CCK-8)、克隆形成、EdU、Transwell、流式细胞仪、蛋白质印迹法(Western blot)、体内移植瘤实验检测lncRNA ENST 933和miR-588在BC细胞增殖、迁移、侵袭与周期中的作用;采用双荧光素酶报告基因、RNA免疫共沉淀实验、RT-qPCR、Western blot和挽救实验来评估lncRNA ENST 933、miR-588、真核起始因子6(eukaryotic initiation factor 6,EIF6)之间的互相作用。结果lncRNA ENST 933在BC组织和BC细胞系中表达均显著上调(P<0.05),过表达lncRNA ENST 933能够提升BC细胞增殖、迁移与侵袭能力,促进移植瘤生长,而敲低lncRNA ENST 933表达后BC的发展受到抑制,并导致细胞周期阻滞(P<0.05)。miR-588在BC组织中表达明显下调,过表达miR-588可抑制BC细胞的增殖、迁移与侵袭(P<0.05)。挽救实验结果表明lncRNA ENST 933可通过与miR-588进行竞争性结合,从而促进靶基因EIF6的表达。Western blot结果显示miR-588降低了AKT和mTOR的磷酸化水平(P<0.05)。结论lncRNA ENST 933可通过调控miR-588/EIF6轴促进BC的进展。 展开更多
关键词 ENST00000579933 miR-588 EIF6 乳腺癌 增殖 侵袭
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乳酸链球菌素对乳酸菌抑菌作用的研究 被引量：10
4
作者 贺松 龚芳红 +1 位作者 张德纯 郭亚楠 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2009年第23期352-355,共4页
目的:为了观察Nisin对乳酸菌的抑菌效果,探讨Nisin作为食品级载体筛选方法的最佳抑菌浓度和持续时间。方法:采用试管稀释法和纸片扩散法检测Nisin对乳酸菌的抑菌浓度,并根据乳酸菌的OD600nm作出生长曲线,以研究Nisin对乳酸菌的抑菌效果... 目的:为了观察Nisin对乳酸菌的抑菌效果,探讨Nisin作为食品级载体筛选方法的最佳抑菌浓度和持续时间。方法:采用试管稀释法和纸片扩散法检测Nisin对乳酸菌的抑菌浓度,并根据乳酸菌的OD600nm作出生长曲线,以研究Nisin对乳酸菌的抑菌效果。结果:Nisin对乳品工业常用乳酸菌具有较强的抑菌作用,仅某些乳酸乳球菌对Nisin表现出抗性;Nisin对乳酸菌有较持久的抑菌效果,可达30～48h以上。结论:该实验为Nisin作为食品级载体筛选方法的最佳抑菌浓度和持续时间提供了依据。 展开更多
关键词 乳酸链球菌素 乳酸菌 抑菌作用 食品级载体
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椰汁体外促双歧杆菌生长作用的研究 被引量：6
5
作者 朱辉 张德纯 +2 位作者 王春耀 刘明方 刘胜男 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第18期1849-1852,共4页
目的探讨椰汁体外对4株双歧杆菌生长的促进作用。方法利用4株常见的双歧杆菌作为受试菌,以菌液D(600)值、pH值、活菌计数以及发酵牛乳凝乳时间和乳液pH值等为指标,来研究椰汁对4种双歧杆菌增殖和活性的促进作用。结果按照25%(V/V)添加... 目的探讨椰汁体外对4株双歧杆菌生长的促进作用。方法利用4株常见的双歧杆菌作为受试菌,以菌液D(600)值、pH值、活菌计数以及发酵牛乳凝乳时间和乳液pH值等为指标,来研究椰汁对4种双歧杆菌增殖和活性的促进作用。结果按照25%(V/V)添加椰汁时,4株双歧杆菌菌体浓度(光密度值及活菌计数)均明显高于空白对照组(P<0.05),其中两歧双歧杆菌、青春双歧杆菌以及长双歧杆菌甚至高于双歧因子阳性对照组﹙P<0.05﹚。4株双歧杆菌发酵含有椰汁的牛乳后,两歧双歧杆菌、青春双歧杆菌和长双歧杆菌的凝乳时间均较空白对照组和阳性对照组明显缩短﹙P<0.05﹚,婴儿双歧杆菌却未出现凝乳现象,但4株双歧杆菌pH值均低于空白对照组和阳性对照组(P<0.05)。结论椰汁有可能成为一种良好的双歧因子,并可作为双歧杆菌的天然培养基。 展开更多
关键词 椰汁 双歧杆菌 促生长作用 双歧因子
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嗜酸乳杆菌β-半乳糖苷酶基因的克隆及其作为食品级筛选标记的研究 被引量：4
6
作者 贺松 龚芳红 +3 位作者 张德纯 刘明方 程芳 郭亚楠 《食品与生物技术学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第5期777-781,共5页
为研究嗜酸乳杆菌β-半乳糖苷酶基因(lacZ)作为食品级筛选标记的活性及筛选稳定性,作者从嗜酸乳杆菌基因组中克隆β-半乳糖苷酶基因并在乳酸乳球菌中表达,通过X-gal显色筛选阳性克隆;用X-gal显色筛选方法将重组乳酸乳球菌传60代,并测定... 为研究嗜酸乳杆菌β-半乳糖苷酶基因(lacZ)作为食品级筛选标记的活性及筛选稳定性,作者从嗜酸乳杆菌基因组中克隆β-半乳糖苷酶基因并在乳酸乳球菌中表达,通过X-gal显色筛选阳性克隆;用X-gal显色筛选方法将重组乳酸乳球菌传60代,并测定β-半乳糖苷酶酶活和比活力。结果显示:通过表达有活性的β-半乳糖苷酶和X-gal显色可成功筛选出阳性克隆菌株;对借助X-gal传60代后的重组乳酸乳球菌进行β-半乳糖苷酶比活力检测,与X-gal筛选的第二代相比没有显著差异(P=0.592>0.05),与红霉素筛选比较也没有显著差异(P=0.882>0.05)。由此可见,β-半乳糖苷酶基因作为筛选标记具有较好的活性和稳定性,为以β-半乳糖苷酶基因作为筛选标记的食品级载体的研究奠定了基础。 展开更多
关键词 Β-半乳糖苷酶 嗜酸乳杆菌 乳酸乳球菌 食品级筛选标记
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表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)对免疫性肝损伤的保护作用及其机制研究 被引量：4
7
作者 于淑静 周莲娣 +3 位作者 魏彩冰 孙宗良 张起辉 陶崑 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第10期1458-1461,共4页
目的:探讨表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)对雷公藤甲素(TP)诱导的免疫性肝损伤的保护性作用及其作用机制。方法:雌性C57BL/6小鼠随机分为4组,即正常对照组、EGCG对照组、TP组、EGCG治疗组。以赖氏法检测血清中ALT水平,以分光光度法检... 目的:探讨表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)对雷公藤甲素(TP)诱导的免疫性肝损伤的保护性作用及其作用机制。方法:雌性C57BL/6小鼠随机分为4组,即正常对照组、EGCG对照组、TP组、EGCG治疗组。以赖氏法检测血清中ALT水平,以分光光度法检测肝匀浆中丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)和还原型谷胱甘肽(GSH)的变化情况,以HE染色观测小鼠肝脏组织形态学变化,以ELISA方法检测肝脏中白细胞介素(IL)-17和IL-6的表达水平,以Western blot方法检测肝脏中Toll样受体4(TLR4)的表达情况。结果:TP组小鼠血清转氨酶水平明显高于正常对照组(P<0.005),EGCG对照组与正常对照组比较无变化(P>0.05),而EGCG治疗组小鼠血清转氨酶水平与TP组相比下降明显(P<0.005)。TP组小鼠肝脏病理切片示较多肝细胞坏死和中性粒细胞浸润,EGCG对照组和正常对照组小鼠肝脏形态学基本正常,EGCG治疗组示肝细胞炎症坏死程度较TP组有大幅减轻。TP组小鼠肝脏中MDA、IL-17及IL-6水平明显高于正常对照组(P<0.005),而SOD和GSH水平明显低于正常对照组(SOD,P<0.05;GSH,P<0.005),EGCG对照组与正常对照组比较无变化(P>0.05),EGCG治疗组小鼠肝脏中MDA、IL-17及IL-6水平均下降明显(P<0.005),而SOD和GSH水平均增高,与TP组比较有显著性差异(SOD,P<0.05;GSH,P<0.005)。TP组肝脏TLR4蛋白表达水平高于正常对照组,EGCG对照组与正常对照组比较无变化(P>0.05),而EGCG治疗组TLR4水平显著降低。结论:EGCG对TP所致小鼠肝损伤有明显的保护作用,可能与其抗氧化作用及对炎症因子的调节有关。 展开更多
关键词 表没食子儿茶素没食子酸酯 雷公藤甲素 肝损伤 炎症因子 抗氧化作用
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巨噬细胞Coronin-1的表达与非Mtb源性自噬相关性的实验研究 被引量：3
8
作者 李黎 陈全 +2 位作者 周芳妮 刘革力 张路渝 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2015年第5期613-619,共7页
目的:研究巨噬细胞Coronin-1与非Mtb源性细胞自噬的相关性及其可能信号通路。方法:分别构建过表达Coronin-1的p EGFP-C1-Coronin-1质粒和干扰Coronin-1表达的p Genesil-1-Coronin-1质粒,通过G418加压筛选其RAW264.7细胞稳定转染株,即Cor... 目的:研究巨噬细胞Coronin-1与非Mtb源性细胞自噬的相关性及其可能信号通路。方法:分别构建过表达Coronin-1的p EGFP-C1-Coronin-1质粒和干扰Coronin-1表达的p Genesil-1-Coronin-1质粒,通过G418加压筛选其RAW264.7细胞稳定转染株,即Coronin-1高表达细胞株(RAW264.7-Cor.Plus)和Coronin-1低表达细胞株(RAW264.7-Cor.Minus)。将RAW264.7-Cor.Plus组、RAW264.7组和RAW264.7-Cor.Minus组细胞分别采取完全培养基(空白处理对照)、饥饿、雷帕霉素、环孢素A等因素处理后,通过RT-PCR法检测Beclin-1的基因转录水平,Western blot法检测Coronin-1、LC3BⅡ/LC3BⅠ及Beclin-1的蛋白表达水平。结果:Coronin-1过表达质粒和siRNA质粒均构建成功,其细胞稳定筛选株具有过表达或抑制表达Coronin-1特性。1空白处理三组细胞,Western blot法检测LC3BⅡ/LC3BⅠ的比值:RAW264.7-Cor.Minus组>RAW264.7组>RAW264.7-Cor.Plus组;Western blot法检测Beclin-1:RAW264.7-Cor.Minus组>RAW264.7组>RAW264.7-Cor.Plus组;RTPCR法检测Beclin-1转录水平,趋势同Western blot;2饥饿处理三组细胞,LC3BⅡ/LC3BⅠ的比值:RAW264.7-Cor.Minus组<RAW264.7组<RAW264.7-Cor.Plus组;3雷帕霉素处理RAW264.7细胞,其Coronin-1蛋白被显著抑制;雷帕霉素和环孢素A分别处理RAW264.7-Cor.Plus细胞,其LC3BⅡ/LC3BⅠ比值明显较空白处理组高。结论:巨噬细胞Coronin-1与非Mtb源性细胞自噬具有相关性。在营养充足状态下,Coronin-1可抑制细胞自噬;在饥饿状态下,Coronin-1可促进细胞自噬。Coronin-1对自噬的调控可能与m TOR和钙离子信号通路有关。 展开更多
关键词 巨噬细胞 Coronin-1 自噬 雷帕霉素 环孢素A 结核分枝杆菌
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功能性米酒抗疲劳作用的研究 被引量：5
9
作者 朱辉 张德纯 杨金梅 《食品工业科技》 CAS CSCD 北大核心 2012年第23期364-366,共3页
探讨功能性米酒对小鼠的抗疲劳效应。将240只雄性昆明小鼠随机分为5组,每组48只。空白对照组给予生理盐水(50mL/kgbw),实验对照组给予市售普通米酒(50mL/kgbw),高、中、低剂量组每天分别给与剂量为100、50、25mL/kgbw的功能性米酒。30天... 探讨功能性米酒对小鼠的抗疲劳效应。将240只雄性昆明小鼠随机分为5组,每组48只。空白对照组给予生理盐水(50mL/kgbw),实验对照组给予市售普通米酒(50mL/kgbw),高、中、低剂量组每天分别给与剂量为100、50、25mL/kgbw的功能性米酒。30天后,测定各组小鼠体重、负重游泳时间、血尿素氮(Blood urea nitrogen,BUN)、肝糖原和血乳酸(Lactic Acid,LAC)的水平,所得结果均进行组间比较分析。结果显示:高、中剂量功能性米酒能显著延长小鼠负重游泳时间、提高肝糖原含量(p<0.01)、降低运动后血尿素氮和血清乳酸的水平(p<0.01或p<0.05),表明功能性米酒具有抗小鼠运动性疲劳的作用。 展开更多
关键词 功能性米酒 双歧杆菌 抗疲劳 小鼠
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雷公藤甲素致小鼠肝损伤的机制研究 被引量：6
10
作者 于淑静 魏彩冰 +1 位作者 陶崑 周莲娣 《天然产物研究与开发》 CAS CSCD 北大核心 2017年第3期472-476,共5页
本文研究雷公藤甲素致肝损伤作用机制。将雌性C57BL/6小鼠20只随机分为2组,并以雷公藤甲素造模,通过检测血清中谷丙转氨酶(ALT)水平变化,以及观察小鼠肝脏组织切片HE染色结果,了解肝脏损伤情况;RT-PCR法检测小鼠肝脏中白细胞介素(IL)-17... 本文研究雷公藤甲素致肝损伤作用机制。将雌性C57BL/6小鼠20只随机分为2组,并以雷公藤甲素造模,通过检测血清中谷丙转氨酶(ALT)水平变化,以及观察小鼠肝脏组织切片HE染色结果,了解肝脏损伤情况;RT-PCR法检测小鼠肝脏中白细胞介素(IL)-17、IL-6、维甲酸孤儿核受体(ROR-γt)mRNA表达水平,ELISA法检测IL-17、IL-6蛋白表达水平,Western blot法检测小鼠肝脏中TLR4蛋白表达水平。与对照组比较,雷公藤甲素模型组小鼠血清ALT水平显著升高(P<0.005),HE染色切片显示较多的肝细胞坏死和炎症细胞浸润,IL-17、IL-6、ROR-γt mRNA表达水平和IL-17、IL-6蛋白表达水平显著升高(P<0.005),此外,TLR4蛋白表达水平显著升高(P<0.005)。结果表明,雷公藤甲素所导致的肝损伤可能通过激活TLR4信号,增加IL-17、IL-6的表达,影响Th17特异性转录因子ROR-γt,进而促进Th17细胞活化,增强其致炎功能。 展开更多
关键词 雷公藤甲素 肝损伤 炎症因子 C57BL/6小鼠
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microRNA与结核病相互关系的研究进展 被引量：2
11
作者 樊宇 杨春 +5 位作者 何永林 徐蕾 卢楠 穆柳青 张春燕 康月茜 《重庆医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第9期1167-1171,共5页
microRNA(miRNA)是一类广泛存在于各种生物体内的小分子非编码单链RNA,主要在转录后水平调控靶基因的表达。越来越多的证据表明它在细胞分化与沟通、机体发育、免疫反应等诸多方面都发挥着重要作用。尤其在疾病相关研究中,miRNA更是具... microRNA(miRNA)是一类广泛存在于各种生物体内的小分子非编码单链RNA,主要在转录后水平调控靶基因的表达。越来越多的证据表明它在细胞分化与沟通、机体发育、免疫反应等诸多方面都发挥着重要作用。尤其在疾病相关研究中,miRNA更是具有广泛的用途和美好的前景。本文主要针对miRNA的相关特性、与结核病(tuberculosis,TB)相互关系的研究进展以及应用前景等做综述。 展开更多
关键词 MICRORNA 结核病 结核分枝杆菌 BACILLUS Calmette-Guerin(BCG)
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带有HPV-16 E6/E7基因的树突状细胞疫苗对裸鼠人宫颈癌CaSki细胞移植瘤的抗肿瘤作用 被引量：2
12
作者 符少月 焦庆昉 +3 位作者 黄启彬 刘潇淇 易发平 宋方洲 《重庆医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第5期512-516,共5页
目的:探索带有HPV-16 E6/E7基因的树突状细胞(dendritic cell,DC)疫苗对裸鼠人宫颈癌CaSki细胞移植瘤的抗肿瘤作用。方法:体外诱导培养C57BL/6小鼠骨髓的未成熟DC(immature DC,imDC),将已经成功构建的携带人乳头状瘤病毒(human papillom... 目的:探索带有HPV-16 E6/E7基因的树突状细胞(dendritic cell,DC)疫苗对裸鼠人宫颈癌CaSki细胞移植瘤的抗肿瘤作用。方法:体外诱导培养C57BL/6小鼠骨髓的未成熟DC(immature DC,imDC),将已经成功构建的携带人乳头状瘤病毒(human papillomavirus,HPV)-16 E6/E7基因的重组腺病毒感染imDC,Western blot检测E7蛋白的表达;构建裸鼠的人宫颈癌CaSki细胞移植瘤模型,应用DC疫苗诱导的BALB/c小鼠脾脏的细胞毒性T淋巴细胞(cytotoxic T lymphocytes,CTL)处理后,观察裸鼠肿瘤体积变化,肿瘤长出第28天后处死裸鼠,小心剥下肿瘤组织,石蜡包埋,HE染色观察各组肿瘤的细胞形态,免疫组织化学技术法检测肿瘤组织中Bcl-2、Bax蛋白的表达情况。结果:成功培养出DC并制备出DC疫苗;第28天各组裸鼠肿瘤体积pAd-E6/E7-DC-CTL-CaSki组与pAd-mock-DC-CTL-CaSki组、DC-CTL-CaSki组、CaSki组相比较,pAd-E6/E7-DC-CTL-CaSki组裸鼠肿瘤体积最小(P<0.05);免疫组化检测肿瘤组织中Bax蛋白的表达结果显示pAd-E6/E7-DC-CTL-CaSki组最高,而CaSki组表达最低;免疫组化检测肿瘤组织中Bcl-2蛋白的表达结果显示pAd-E6/E7-DC-CTL-CaSki组最低,而CaSki组表达最高。结论:带有HPV-16 E6/E7DC疫苗能够诱导CTL抑制裸鼠人宫颈癌CaSki细胞移植瘤的生长。 展开更多
关键词 树突状细胞 人乳头瘤病毒16 T淋巴细胞 CASKI细胞
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HPV 16 E6E7基因修饰树突状细胞疫苗诱导CTL致CaSki细胞凋亡体外实验研究 被引量：2
13
作者 焦庆昉 易发平 +6 位作者 汪长东 袁成福 刘勒 兰欢 符少月 艾青 宋方洲 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第2期115-119,共5页
目的:采用人乳头状瘤-16(HPV-16)E6E7重组腺病毒(pAd-E6E7)转染树突状细胞(Dendritic cell,DC),观察基因修饰的DC疫苗诱导细胞毒性T淋巴细胞(Cytotoxic Tlymphocyte,CTL)致使CaSki细胞凋亡的效果。方法:将pAd-E6E7转染体外培养的小鼠未... 目的:采用人乳头状瘤-16(HPV-16)E6E7重组腺病毒(pAd-E6E7)转染树突状细胞(Dendritic cell,DC),观察基因修饰的DC疫苗诱导细胞毒性T淋巴细胞(Cytotoxic Tlymphocyte,CTL)致使CaSki细胞凋亡的效果。方法:将pAd-E6E7转染体外培养的小鼠未成熟树突状细胞制备DC疫苗,激光共聚焦显微镜观察转染的小鼠未成熟树突状细胞绿色荧光蛋白表达,流式细胞术检测转染前后小鼠树突状细胞表面标志物(CD40、CD86、MHCⅡ和CD11C)。DC疫苗诱导产生特异性细胞毒性T淋巴细胞,与CaSki细胞共培养后,采用DAPI、TUNEL及流式细胞术检测CaSki细胞凋亡情况。结果:pAd-E6E7成功转染体外培养的小鼠未成熟树突状细胞,体外转染效率约为40%～50%,成功制备了HPV16 E6E7基因修饰树突状细胞疫苗,诱导产生细胞毒性T淋巴细胞,经DAPI、TUNEL及流式细胞术检测证明CaSki出现凋亡。结论:以带有HPV16 E6E7基因的重组腺病毒载体转染DC制备基因修饰的DC疫苗,诱导CTL致使CaSki细胞出现凋亡。 展开更多
关键词 人乳头状瘤病毒 细胞毒性T淋巴细胞 CASKI细胞 树突状细胞
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Maspin、P53、Skp2蛋白在结直肠肿瘤中的表达及其意义 被引量：2
14
作者 倪江涛 易永芬 石海鹏 《重庆医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第1期29-33,共5页
目的:研究maspin、p53及skp2蛋白在结直肠肿瘤组织中的表达及临床病理意义。方法:采用免疫组织化学法检测maspin、p53及skp2在50例结直肠腺癌,20例结直肠腺瘤、20例正常结直肠粘膜组织中的表达。结果:maspin蛋白在结直肠腺瘤和正常结直... 目的:研究maspin、p53及skp2蛋白在结直肠肿瘤组织中的表达及临床病理意义。方法:采用免疫组织化学法检测maspin、p53及skp2在50例结直肠腺癌,20例结直肠腺瘤、20例正常结直肠粘膜组织中的表达。结果:maspin蛋白在结直肠腺瘤和正常结直肠粘膜组织中的表达均高于结直肠腺癌(P<0.05);无淋巴结转移组maspin表达率高于淋巴结转移组(P<0.05);DukesC,D期结直肠癌组织maspin表达率低于DukesA、B期(P<0.05)。在结直肠腺癌及腺瘤中maspin与p53的表达均呈负相关(P<0.01),然而在skp2与maspin、skp2与p53之间没有发现相关性(P>0.05)。结论:maspin的表达可能受p53基因的调控。联合检测maspin、p53及skp2在结直肠肿瘤中表达水平,对判定结直肠癌恶性程度及预后可能具有重要参考价值。 展开更多
关键词 MASPIN P53 SKP2 结直肠肿瘤
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乳腺癌B7-H4的表达与FOXP3＋Treg细胞浸润及淋巴结转移的相关性研究 被引量：1
15
作者 黄文炼 徐曼 +3 位作者 陈瑜 王婷婷 耿卫朴 张燕 《重庆医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第11期1330-1334,共5页
目的:研究B7同源体4(B7 homolog 4,B7-H4)在人乳腺癌组织的表达及其与肿瘤内FOXP3+调节性T细胞(Treg)浸润数量和淋巴结转移的相关性。方法:应用SP免疫组织化学法检测B7-H4蛋白在16例正常乳腺组织和79例乳腺癌组织的表达;间接免疫荧光双... 目的:研究B7同源体4(B7 homolog 4,B7-H4)在人乳腺癌组织的表达及其与肿瘤内FOXP3+调节性T细胞(Treg)浸润数量和淋巴结转移的相关性。方法:应用SP免疫组织化学法检测B7-H4蛋白在16例正常乳腺组织和79例乳腺癌组织的表达;间接免疫荧光双标染色法观察64例浸润性乳腺癌组织中CD3+T细胞和FOXP3+Treg的浸润情况;统计学分析B7-H4的表达与癌间质浸润的FOXP3+Treg数量和淋巴结转移的相关性。结果 :B7-H4在正常乳腺组织、导管内癌和浸润性乳腺癌的阳性表达率分别为6.3%、40.0%和78.1%,其在浸润性乳腺癌中的表达明显高于正常乳腺组织和导管内癌组(P=0.000,P=0.009),但在正常乳腺组织和导管内癌间未见明显差异(P=0.037);B7-H4的表达与乳腺癌间质浸润的FOXP3+Treg数量正相关(P=0.368,P=0.003),而与浸润的CD3+T细胞数量负相关(r s=-0.316,P=0.011);但B7-H4的表达与乳腺癌的淋巴结转移无关(P>0.05)。结论:B7-H4在乳腺癌异常高表达且与肿瘤局部免疫抑制有关,但与淋巴结转移无明显相关性。 展开更多
关键词 B7同源体4 FOXP3fiN节性T细胞 淋巴结转移 乳腺癌
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人宫颈癌细胞和永生化细胞的细胞中心体γ-tubulin和Aurora-A激酶表达的差异分析 被引量：1
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作者 巫静娴 赵涌 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第13期1421-1424,共4页
目的对比人乳头瘤病毒(human papillomavirus,HPV)16E6E7基因阳性的人宫颈癌细胞(CasKi细胞株)和人宫颈鳞状上皮永生化细胞(H8细胞株)中γ-tubulin和中心体相关激酶Aurora-A表达的差异并探讨其意义。方法采用间接免疫荧光显示γ-tubuli... 目的对比人乳头瘤病毒(human papillomavirus,HPV)16E6E7基因阳性的人宫颈癌细胞(CasKi细胞株)和人宫颈鳞状上皮永生化细胞(H8细胞株)中γ-tubulin和中心体相关激酶Aurora-A表达的差异并探讨其意义。方法采用间接免疫荧光显示γ-tubulin的荧光强度来分析CasKi和H8细胞中心体的差异,RT-PCR检测中心体相关激酶Aurora-AmRNA水平,Western blot方法对γ-tubulin、Aurora-A在两种细胞中的表达水平进行半定量分析。结果宫颈癌细胞CasKi中γ-tubulin的免疫荧光信号(57.78±3.13)明显强于H8细胞(37.37±2.37)(P<0.05);Aurora-AmRNA在CasKi细胞(0.745±0.013)中的表达显著高于H8细胞(0.617±0.223)(P<0.05);Westernblot结果显示Aurora-A和γ-tubulin在CasKi细胞中的蛋白表达水平分别为(0.969±0.011),(0.909±0.019)明显高于H8细胞[分别为(0.568±0.016),(0.571±0.022),P<0.05]。结论中心体的异常扩增和过表达可能是宫颈癌前病变转变成癌的早期生物学标志,中心体异常可能成为诊断宫颈上皮内瘤变进展为癌的辅助分子生物学指标。 展开更多
关键词 宫颈癌 永生化 中心体 Γ-TUBULIN AURORA-A
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siRNA介导的Plk1表达沉默对COS-7细胞影响的研究
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作者 朱江 洪苏玲 +2 位作者 柯霞 兰欢 卜友泉 《重庆医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第3期324-327,共4页
目的:研究(Polo-like kinase1,Plk1)表达被抑制后对COS-7细胞的影响,探讨Plk1作为分子靶点用于肿瘤治疗的潜在价值。方法:化学合成法合成特异性的短链Plk1siRNA,脂质体转染法将短链siRNA分别导入COS-7细胞;采用RT-PCR和Western blot法检... 目的:研究(Polo-like kinase1,Plk1)表达被抑制后对COS-7细胞的影响,探讨Plk1作为分子靶点用于肿瘤治疗的潜在价值。方法:化学合成法合成特异性的短链Plk1siRNA,脂质体转染法将短链siRNA分别导入COS-7细胞;采用RT-PCR和Western blot法检测siRNA对Plk1表达的抑制效果;采用胎盘兰染色结合细胞计数法、FACS分析siRNA介导的Plk1表达抑制对COS-7癌细胞生长增殖、细胞周期的影响。结果:半定量RT-PCR和蛋白质印迹分析结果表明,合成的特异性短链Plk1siRNA在mRNA和蛋白质水平上均能高效、特异性地抑制COS-7细胞中Plk1的表达。细胞生长分析结果表明,siRNA介导的Plk1表达沉默导致COS-7细胞的生长增殖受到显著抑制。FACS分析结果表明,Plk1表达被抑制后,出现细胞周期停滞,大量细胞呈现sub-G1期时相。结论:siRNA介导的Plk1表达沉默显著抑制COS-7细胞生长增殖,是一个潜在的肿瘤治疗靶点。 展开更多
关键词 PLK1 SIRNA 细胞周期 细胞生长
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重组疫苗E.coli LLO/OVA对小鼠CD4^+ CD25^+ Treg细胞调节作用的研究
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作者 徐曼 蒋小卫 米粲 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第5期409-412,共4页
目的:探讨重组E.coli LLO/OVA对小鼠CD4+ CD25+ Treg细胞的调节作用。方法:E.coli LLO/OVA和E.coli OVA分别免疫小鼠后,磁珠分离脾脏CD11c、CD4+CD25+Treg和CD4+CD25-T细胞,比较两组CD11c细胞对CD4+ CD25+ Treg细胞分泌IL-10的影响,以及... 目的:探讨重组E.coli LLO/OVA对小鼠CD4+ CD25+ Treg细胞的调节作用。方法:E.coli LLO/OVA和E.coli OVA分别免疫小鼠后,磁珠分离脾脏CD11c、CD4+CD25+Treg和CD4+CD25-T细胞,比较两组CD11c细胞对CD4+ CD25+ Treg细胞分泌IL-10的影响,以及CD4+ CD25+ Treg细胞抑制CD4+ CD25- T细胞增殖的作用;流式细胞术分析荷瘤小鼠OVA特异性CD8+ T细胞比率,观察去除CD4+ CD25+ Treg细胞前后两组黑色素瘤B16-OVA荷瘤小鼠肺转移情况。结果:E.coli LLO/OVA免疫组小鼠脾脏CD4+ CD25+ Treg细胞产生IL-10水平明显低于E.coli OVA免疫组小鼠(P<0.05),CD4+ CD25+ Treg细胞对CD4+ CD25- T细胞增殖的抑制作用明显减弱(P<0.05),且OVA特异性CD8+ T细胞数量明显增多(P<0.05)。在去除CD4+ CD25+ Treg细胞前后,E.coli LLO/OVA免疫的荷瘤小鼠肺转移结节数无明显减少(P>0.05)。结论:重组E.coli LLO/OVA可通过下调小鼠CD4+ CD25+ Treg细胞数量、抑制其功能而促进机体特异性抗肿瘤免疫。 展开更多
关键词 重组疫苗 调节T细胞 抗肿瘤免疫
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HBx基因抑制肝前体细胞凋亡与分化的小鼠体内研究 被引量：4
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作者 霍本念 刘洁 +3 位作者 王薛 张婷 刘梦楠 冯涛 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第5期406-414,共9页
目的构建将乙肝病毒X(hepatitis B virus X,HBx)基因导入小鼠肝脏内的动物模型,探讨HBx蛋白对小鼠体内肝前体细胞凋亡与分化的影响。方法从小鼠肝门静脉注射携带HBx基因的肝前体细胞和生理盐水,于第30、60、90、120天收取小鼠肝前体细... 目的构建将乙肝病毒X(hepatitis B virus X,HBx)基因导入小鼠肝脏内的动物模型,探讨HBx蛋白对小鼠体内肝前体细胞凋亡与分化的影响。方法从小鼠肝门静脉注射携带HBx基因的肝前体细胞和生理盐水,于第30、60、90、120天收取小鼠肝前体细胞标本,通过RT-PCR和Western blot验证HBx基因在肝前体细胞中的表达;通过荧光显微镜、免疫组织化学染色法、RT-PCR检测细胞株是否到达小鼠肝脏并表达目的基因;使用TUNEL-FITC/DAPI法、RT-PCR和Western blot检测肝前体细胞的凋亡和分化情况。结果携带了HBx基因的肝前体细胞株成功到达小鼠肝脏内并表达HBx蛋白,TUNEL-FITC/DAPI法显示HBx显著抑制小鼠肝前体细胞发生凋亡,RT-PCR和Western blot结果显示,抗凋亡蛋白Bcl2、Mcl-1的表达上调,促凋亡蛋白Bax的表达下调,细胞分化早期指标CK19表达增加,而细胞晚期分化指标CK18表达降低,差异均具有统计学意义(P<0.05)。结论 HBx蛋白在小鼠体内可以抑制肝前体细胞凋亡和分化成熟,诱发肝癌发生的早期事件。 展开更多
关键词 乙肝病毒X蛋白 肝前体细胞 凋亡 分化 动物模型
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细粒棘球绦虫水通道蛋白9的多肽特征及免疫定位研究 被引量：2
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作者 谭青青 李锴 +5 位作者 张静 高剑 吴宏烨 范俊杰 陆合 叶彬 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第1期45-52,59,共9页
目的研制细粒棘球绦虫水通道蛋白9(EgAQP9)的特异性多肽抗体,并用于检测其在棘球蚴囊壁、生发细胞及原头蚴中的组织分布情况。方法根据EgAQP9特异氨基酸序列设计合成B细胞抗原多肽,再用合成的多肽偶联KLH作为免疫原注射免疫新西兰兔以... 目的研制细粒棘球绦虫水通道蛋白9(EgAQP9)的特异性多肽抗体,并用于检测其在棘球蚴囊壁、生发细胞及原头蚴中的组织分布情况。方法根据EgAQP9特异氨基酸序列设计合成B细胞抗原多肽,再用合成的多肽偶联KLH作为免疫原注射免疫新西兰兔以制备多克隆抗体。酶联免疫吸附试验(ELISA)方法检测多肽抗体滴度,蛋白免疫印迹法(Western blot)测定多肽抗体免疫活性,免疫荧光实验分析EgAQP9的亚细胞定位,免疫组化实验分析EgAQP9组织定位。结果免疫新西兰兔成功制备出多肽抗体;间接ELISA检测其多肽抗体效价高达1∶256000;Western blot结果显示多肽抗体能够特异识别细粒棘球绦虫中36 kDa处的条带,与EgAQP9预测的相对分子量大小相符;免疫荧光实验结果显示EgAQP9分布于棘球蚴生发细胞的胞质、胞膜中;免疫组化实验显示该蛋白主要分布在原头蚴表面及棘球蚴囊泡生发层。结论本研究以制备的EgAQP9兔源多克隆抗体定位了AQP9在棘球蚴生发细胞、原头蚴及棘球蚴囊壁中的分布状况。 展开更多
关键词 细粒棘球绦虫 水通道蛋白 多肽抗体 亚细胞定位 组织定位
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