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沉默HPV16 E6基因对人宫颈癌裸鼠移植瘤的抑制作用
被引量：
9
1
作者
成海恩
张溢
+5 位作者
张翠莉
潘巍巍
石华
易发平
郭风劲
宋方洲
《第三军医大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2007年第6期486-489,共4页
目的采用RNA干扰抑制人宫颈癌CaSki细胞裸鼠移植瘤中人乳头瘤病毒(human papillomavirus-16,HPV16)E6基因的表达,观察对裸鼠移植瘤的抑制作用。方法将HPV16 E6特异性的小干扰RNA(small interference RNA,siRNA)真核表达载体转染到人宫...
目的采用RNA干扰抑制人宫颈癌CaSki细胞裸鼠移植瘤中人乳头瘤病毒(human papillomavirus-16,HPV16)E6基因的表达,观察对裸鼠移植瘤的抑制作用。方法将HPV16 E6特异性的小干扰RNA(small interference RNA,siRNA)真核表达载体转染到人宫颈癌细胞株CaSki细胞中,经G418筛选,RT-PCR检测E6基因的表达;将细胞接种到BALB/c裸鼠背部皮下,同时将该质粒注射到人宫颈癌CaSki细胞移植瘤的裸鼠中,观察肿瘤出现时间及体积变化;观察肿瘤组织的病理改变。结果成功筛选到持续表达E6 siRNA的CaSki细胞,经RT-PCR检测该细胞中HPV16 E6基因表达降低;裸鼠成瘤实验结果显示,处理后的CaSki细胞成瘤能力明显降低,抑瘤率为71.4%;注射质粒进行基因治疗后,裸鼠肿瘤生长受到抑制,肿瘤的体积与质量明显低于CaSki细胞组,差异具有显著性(P<0.05)。病理检查结果显示,经pGensil-CH2处理的肿瘤生长不佳,细胞分裂像少见,组织内有较多坏死区域。结论沉默CaSki细胞中HPV16 E6基因的表达能明显降低宫癌细胞的成瘤作用。
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关键词
宫颈肿瘤
RNA干扰
HPV16
E6基因
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职称材料
促凋亡因子Smac/DIABLO与核受体NR4A1相互作用的筛选和鉴定
被引量：
2
2
作者
张翠莉
杨晓明
+2 位作者
成海恩
刘涛
王应雄
《第三军医大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2007年第6期482-485,共4页
目的利用酵母双杂交技术筛选线粒体促凋亡因子野生型Smac/DIABLO的相互作用蛋白。方法①设计促凋亡因子野生型Smac/DIABLO引物,利用PCR在成人肝cDNA文库中扩增野生型Smac/DIABLO基因片段,构建酵母真核表达载体pDBLeu-Smac/DIABLO。②pDB...
目的利用酵母双杂交技术筛选线粒体促凋亡因子野生型Smac/DIABLO的相互作用蛋白。方法①设计促凋亡因子野生型Smac/DIABLO引物,利用PCR在成人肝cDNA文库中扩增野生型Smac/DIABLO基因片段,构建酵母真核表达载体pDBLeu-Smac/DIABLO。②pDBLeu-Smac/DIABLO诱饵质粒转化酵母MaV203,Western blot检测融合蛋白在酵母中的正确表达,自激活作用的检测并确定抑制His基础表达的3AT浓度。③对成人肝cDNA文库的筛选。选择能同时激活His、Ura、LacZ3个报告基因的克隆为阳性,利用回转实验和GST-pull down对阳性克隆进行鉴定。结果成功构建pDBLeu-Smac/DIABLO载体,转化酵母细胞MaV203,无细胞毒性,无自激活作用,3AT浓度为25mmol/L。经回转实验和GST-pull down证实了线粒体促凋亡因子Smac/DIABLO与核受体NR4A1之间具有相互作用。结论Smac/DIABLO可能通过与核受体NR4A1的相互作用来影响核受体NR4A1对细胞生存或者凋亡的调控。
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关键词
SMAC/DIABLO
NR4A1
酵母双杂交
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职称材料
题名
沉默HPV16 E6基因对人宫颈癌裸鼠移植瘤的抑制作用
被引量：
9
1
作者
成海恩
张溢
张翠莉
潘巍巍
石华
易发平
郭风劲
宋方洲
机构
重庆医科大学
基础医
学院
生物化学与分子生物学
教研室
重庆医科大学公共卫生学院生殖医学系遗传学教研室
重庆医科大学
临床检验诊断学省部共建教育部重点实验室
出处
《第三军医大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2007年第6期486-489,共4页
基金
国家自然科学基金(30371479)~~
文摘
目的采用RNA干扰抑制人宫颈癌CaSki细胞裸鼠移植瘤中人乳头瘤病毒(human papillomavirus-16,HPV16)E6基因的表达,观察对裸鼠移植瘤的抑制作用。方法将HPV16 E6特异性的小干扰RNA(small interference RNA,siRNA)真核表达载体转染到人宫颈癌细胞株CaSki细胞中,经G418筛选,RT-PCR检测E6基因的表达;将细胞接种到BALB/c裸鼠背部皮下,同时将该质粒注射到人宫颈癌CaSki细胞移植瘤的裸鼠中,观察肿瘤出现时间及体积变化;观察肿瘤组织的病理改变。结果成功筛选到持续表达E6 siRNA的CaSki细胞,经RT-PCR检测该细胞中HPV16 E6基因表达降低;裸鼠成瘤实验结果显示,处理后的CaSki细胞成瘤能力明显降低,抑瘤率为71.4%;注射质粒进行基因治疗后,裸鼠肿瘤生长受到抑制,肿瘤的体积与质量明显低于CaSki细胞组,差异具有显著性(P<0.05)。病理检查结果显示,经pGensil-CH2处理的肿瘤生长不佳,细胞分裂像少见,组织内有较多坏死区域。结论沉默CaSki细胞中HPV16 E6基因的表达能明显降低宫癌细胞的成瘤作用。
关键词
宫颈肿瘤
RNA干扰
HPV16
E6基因
Keywords
cervical cancer
RNA interference
human papillomavirus 16
E6 gene
分类号
R73-354 [医药卫生—肿瘤]
R73-362 [医药卫生—肿瘤]
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职称材料
题名
促凋亡因子Smac/DIABLO与核受体NR4A1相互作用的筛选和鉴定
被引量：
2
2
作者
张翠莉
杨晓明
成海恩
刘涛
王应雄
机构
重庆医科大学公共卫生学院生殖医学系遗传学教研室
军事
医学
科
学院
放射
医学
研究所
重庆医科大学
基础医
学院
生物化学与分子生物学
教研室
第三军医
大学
西南医院全军感染病研究所
出处
《第三军医大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2007年第6期482-485,共4页
基金
国家高技术研究发展计划项目(2004BA711A19)~~
文摘
目的利用酵母双杂交技术筛选线粒体促凋亡因子野生型Smac/DIABLO的相互作用蛋白。方法①设计促凋亡因子野生型Smac/DIABLO引物,利用PCR在成人肝cDNA文库中扩增野生型Smac/DIABLO基因片段,构建酵母真核表达载体pDBLeu-Smac/DIABLO。②pDBLeu-Smac/DIABLO诱饵质粒转化酵母MaV203,Western blot检测融合蛋白在酵母中的正确表达,自激活作用的检测并确定抑制His基础表达的3AT浓度。③对成人肝cDNA文库的筛选。选择能同时激活His、Ura、LacZ3个报告基因的克隆为阳性,利用回转实验和GST-pull down对阳性克隆进行鉴定。结果成功构建pDBLeu-Smac/DIABLO载体,转化酵母细胞MaV203,无细胞毒性,无自激活作用,3AT浓度为25mmol/L。经回转实验和GST-pull down证实了线粒体促凋亡因子Smac/DIABLO与核受体NR4A1之间具有相互作用。结论Smac/DIABLO可能通过与核受体NR4A1的相互作用来影响核受体NR4A1对细胞生存或者凋亡的调控。
关键词
SMAC/DIABLO
NR4A1
酵母双杂交
Keywords
Smac/DIABLO
NR4A1
yeast two-hybrid
分类号
Q503 [生物学—生物化学]
Q51 [生物学—生物化学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
沉默HPV16 E6基因对人宫颈癌裸鼠移植瘤的抑制作用
成海恩
张溢
张翠莉
潘巍巍
石华
易发平
郭风劲
宋方洲
《第三军医大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2007
9
在线阅读
下载PDF
职称材料
2
促凋亡因子Smac/DIABLO与核受体NR4A1相互作用的筛选和鉴定
张翠莉
杨晓明
成海恩
刘涛
王应雄
《第三军医大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2007
2
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