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铬还原酶T体外合成及活性鉴定
被引量：
3
1
作者
谭小庆
邓鹏
+3 位作者
吴颖
白群华
贾燕
肖虹
《重庆医科大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2014年第7期973-977,共5页
目的：克隆沙雷氏菌CQMUS2中铬还原酶T（Chromate reductaseT，ChrT）的全基因，构建其原核表达载体并转化至大肠杆菌中表达蛋白。分析表达产物的活性。方法：应用PCR技术，以耐铬沙雷氏菌CQMUS2基因组DNA为模板扩增chrT全基因。将该基...
目的：克隆沙雷氏菌CQMUS2中铬还原酶T（Chromate reductaseT，ChrT）的全基因，构建其原核表达载体并转化至大肠杆菌中表达蛋白。分析表达产物的活性。方法：应用PCR技术，以耐铬沙雷氏菌CQMUS2基因组DNA为模板扩增chrT全基因。将该基因连接至表达载体pET-28a（＋）并转化进大肠杆菌感受态细胞E．coli BL21（DE3）表达，用酶促反应鉴定重组chrT酶的活性和cr（Ⅵ）还原能力，探索其最适pH和温度。结果：克隆出的chrT全基因长为567bp，编码188个氨基酸，分子量约20kD：IPTG诱导10h后，在大肠杆菌中成功表达了目的蛋白，其碱基序列和分子量与ch门酶一致；纯化后，chrT酶能还原酶促反应体系中的cr（Ⅵ）。使实验组cr（Ⅵ）含量明显低于对照组（P=0．000），其酶活可达997U／L；ChrT酶的最适pH为6．5-7．5，最适温度为37℃。结论：ChrT酶具有cr（VI）还原活性，为进一步研究高效除铬基因工程菌奠定了基础。
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关键词
沙雷氏菌
铬还原酶
克隆
表达
六价铬
还原
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职称材料
高三尖杉酯碱通过下调IRS4蛋白质的表达抑制黑色素瘤维罗非尼耐药细胞周期和增殖
被引量：
1
2
作者
黄世莹
曾娣
+5 位作者
张滔
唐加峰
杜玉梅
连瑞
李静
陈地龙
《中国生物化学与分子生物学报》
CAS
CSCD
北大核心
2020年第8期970-976,共7页
黑色素瘤是一种死亡率极高的恶性肿瘤。近年来,其发病率逐年上升且耐药问题日渐突出。因此,如何克服耐药提高治疗效果是目前急需解决的问题。本文对高三尖杉酯碱对黑色素瘤维罗非尼耐药细胞A375R的作用及其机制进行初步探究。采用CCK-8...
黑色素瘤是一种死亡率极高的恶性肿瘤。近年来,其发病率逐年上升且耐药问题日渐突出。因此,如何克服耐药提高治疗效果是目前急需解决的问题。本文对高三尖杉酯碱对黑色素瘤维罗非尼耐药细胞A375R的作用及其机制进行初步探究。采用CCK-8法检测发现,维罗非尼对黑色素瘤细胞A375和A375R的半数抑制浓度(IC50)分别为0.94μmol/L和49.09μmol/L,其耐药倍数为52.22倍,证明A375R具有耐药性,可进行后续实验;高三尖杉酯碱作用于A375R细胞24、48、72 h后的IC50分别为18.57 ng/mL、9.88 ng/mL、9.23 ng/mL,说明高三尖杉酯碱能有效抑制A375R细胞的增殖,且呈时间和浓度依赖性。克隆形成实验显示与对照组相比,给予高三尖杉酯碱5、10、20 ng/mL,作用24 h,克隆形成率分别为52.18%、29.72%、2.36%,表明高三尖杉酯碱能有效抑制A375R细胞的克隆形成。流式细胞术检测显示,G0/G1期细胞由正常对照组的38.94%增加至55.05%,细胞阻滞在G0/G1期。蛋白质印迹结果显示,与A375细胞相比,A375R细胞中胰岛素受体底物4(IRS4)、p-Akt蛋白质表达水平上调,使用高三尖杉酯碱能下调A375R中IRS4、p-Akt、细胞周期蛋白E1、CDK2蛋白质的表达水平。以上结果表明,高三尖杉酯碱可能通过下调IRS4蛋白表达抑制PI3K/Akt通路的激活,使细胞周期阻滞在G0/G1期,从而抑制黑色素瘤耐药细胞的增殖。
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关键词
高三尖杉酯碱
黑色素瘤
耐药
胰岛素受体底物4
细胞周期
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职称材料
PAEs对原代培养的大鼠脂肪细胞PPAR-γ2表达的影响
3
作者
伍剑
代兴碧
+2 位作者
郭春红
于露露
尹梁宇
《重庆医科大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2012年第2期130-134,共5页
目的:观察邻苯二甲酸酯类化合物(Phthalate acid esters,PAEs)对原代培养的大鼠脂肪细胞过氧化物酶体增殖剂激活受体-γ2(Peroxisome prolifcrator activated receptor gamma 2,PPAR-γ2)mRNA表达的影响。方法:对脂肪细胞进行PAEs染毒培...
目的:观察邻苯二甲酸酯类化合物(Phthalate acid esters,PAEs)对原代培养的大鼠脂肪细胞过氧化物酶体增殖剂激活受体-γ2(Peroxisome prolifcrator activated receptor gamma 2,PPAR-γ2)mRNA表达的影响。方法:对脂肪细胞进行PAEs染毒培养,观察脂肪细胞多方面的变化,评价PAEs对脂肪细胞的影响。主要实验:①显微镜每天观察脂肪细胞的形态变化;②油红O染色提取法和MTT比色法检查脂肪细胞的生长状况;③提取脂肪细胞的总RNA,通过逆转录PCR实验,分析PPAR-γ2 mR-NA的表达情况。结果:①PAEs处理过的脂肪细胞由最初的小圆形变化为梭形最后变成椭圆形,大鼠脂肪细胞内出现脂肪颗粒,并逐渐增加,最后部分脂肪颗粒融合为较大的脂肪颗粒,符合脂肪细胞的发育规律。②随着培养液中PAEs浓度的增加,大鼠脂肪细胞产生的脂肪颗粒数量增多。③PPAR-γ2的表达随着PAEs浓度的增加而增加。结论:可以认为PAEs通过增强PPAR-γ2表达来促进脂肪细胞的生长发育,研究结果将会为研究PAEs与肥胖的关系提供科学依据,为进一步研究PAEs对健康的影响提供了一个新的思路。
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关键词
邻苯二甲酸酯类化合物
过氧化物酶体增殖剂激活受体-γ2
原代培养
RT-PCR技术
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职称材料
题名
铬还原酶T体外合成及活性鉴定
被引量：
3
1
作者
谭小庆
邓鹏
吴颖
白群华
贾燕
肖虹
机构
重庆医科大学公共卫生与管理学院卫生检验教研室
出处
《重庆医科大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2014年第7期973-977,共5页
基金
重庆市自然科学基金计划资助项目(编号:2010BB5360)
文摘
目的：克隆沙雷氏菌CQMUS2中铬还原酶T（Chromate reductaseT，ChrT）的全基因，构建其原核表达载体并转化至大肠杆菌中表达蛋白。分析表达产物的活性。方法：应用PCR技术，以耐铬沙雷氏菌CQMUS2基因组DNA为模板扩增chrT全基因。将该基因连接至表达载体pET-28a（＋）并转化进大肠杆菌感受态细胞E．coli BL21（DE3）表达，用酶促反应鉴定重组chrT酶的活性和cr（Ⅵ）还原能力，探索其最适pH和温度。结果：克隆出的chrT全基因长为567bp，编码188个氨基酸，分子量约20kD：IPTG诱导10h后，在大肠杆菌中成功表达了目的蛋白，其碱基序列和分子量与ch门酶一致；纯化后，chrT酶能还原酶促反应体系中的cr（Ⅵ）。使实验组cr（Ⅵ）含量明显低于对照组（P=0．000），其酶活可达997U／L；ChrT酶的最适pH为6．5-7．5，最适温度为37℃。结论：ChrT酶具有cr（VI）还原活性，为进一步研究高效除铬基因工程菌奠定了基础。
关键词
沙雷氏菌
铬还原酶
克隆
表达
六价铬
还原
Keywords
serratia specie.
Chromate reductase
clone
expression
hexavalent chromium
reduction
分类号
Q786 [生物学—分子生物学]
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职称材料
题名
高三尖杉酯碱通过下调IRS4蛋白质的表达抑制黑色素瘤维罗非尼耐药细胞周期和增殖
被引量：
1
2
作者
黄世莹
曾娣
张滔
唐加峰
杜玉梅
连瑞
李静
陈地龙
机构
重庆医科大学
基础医
学院
组织学与胚胎学
教研室
重庆医科大学
基础医
学院
解剖学
教研室
重庆医科大学
公共
卫生与
管理
学院
卫生
检验
学
教研室
重庆
三峡医药高等专科学校
出处
《中国生物化学与分子生物学报》
CAS
CSCD
北大核心
2020年第8期970-976,共7页
基金
重庆市教委重点项目(No.KJZD-K201802701)资助。
文摘
黑色素瘤是一种死亡率极高的恶性肿瘤。近年来,其发病率逐年上升且耐药问题日渐突出。因此,如何克服耐药提高治疗效果是目前急需解决的问题。本文对高三尖杉酯碱对黑色素瘤维罗非尼耐药细胞A375R的作用及其机制进行初步探究。采用CCK-8法检测发现,维罗非尼对黑色素瘤细胞A375和A375R的半数抑制浓度(IC50)分别为0.94μmol/L和49.09μmol/L,其耐药倍数为52.22倍,证明A375R具有耐药性,可进行后续实验;高三尖杉酯碱作用于A375R细胞24、48、72 h后的IC50分别为18.57 ng/mL、9.88 ng/mL、9.23 ng/mL,说明高三尖杉酯碱能有效抑制A375R细胞的增殖,且呈时间和浓度依赖性。克隆形成实验显示与对照组相比,给予高三尖杉酯碱5、10、20 ng/mL,作用24 h,克隆形成率分别为52.18%、29.72%、2.36%,表明高三尖杉酯碱能有效抑制A375R细胞的克隆形成。流式细胞术检测显示,G0/G1期细胞由正常对照组的38.94%增加至55.05%,细胞阻滞在G0/G1期。蛋白质印迹结果显示,与A375细胞相比,A375R细胞中胰岛素受体底物4(IRS4)、p-Akt蛋白质表达水平上调,使用高三尖杉酯碱能下调A375R中IRS4、p-Akt、细胞周期蛋白E1、CDK2蛋白质的表达水平。以上结果表明,高三尖杉酯碱可能通过下调IRS4蛋白表达抑制PI3K/Akt通路的激活,使细胞周期阻滞在G0/G1期,从而抑制黑色素瘤耐药细胞的增殖。
关键词
高三尖杉酯碱
黑色素瘤
耐药
胰岛素受体底物4
细胞周期
Keywords
homoharringtonine(HHT)
melanoma
drug resistance
insulin receptor substrate 4(IRS4)
cell cycle
分类号
R739.5 [医药卫生—肿瘤]
R285.5 [医药卫生—中药学]
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职称材料
题名
PAEs对原代培养的大鼠脂肪细胞PPAR-γ2表达的影响
3
作者
伍剑
代兴碧
郭春红
于露露
尹梁宇
机构
重庆医科大学公共卫生与管理学院卫生检验教研室
出处
《重庆医科大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2012年第2期130-134,共5页
文摘
目的:观察邻苯二甲酸酯类化合物(Phthalate acid esters,PAEs)对原代培养的大鼠脂肪细胞过氧化物酶体增殖剂激活受体-γ2(Peroxisome prolifcrator activated receptor gamma 2,PPAR-γ2)mRNA表达的影响。方法:对脂肪细胞进行PAEs染毒培养,观察脂肪细胞多方面的变化,评价PAEs对脂肪细胞的影响。主要实验:①显微镜每天观察脂肪细胞的形态变化;②油红O染色提取法和MTT比色法检查脂肪细胞的生长状况;③提取脂肪细胞的总RNA,通过逆转录PCR实验,分析PPAR-γ2 mR-NA的表达情况。结果:①PAEs处理过的脂肪细胞由最初的小圆形变化为梭形最后变成椭圆形,大鼠脂肪细胞内出现脂肪颗粒,并逐渐增加,最后部分脂肪颗粒融合为较大的脂肪颗粒,符合脂肪细胞的发育规律。②随着培养液中PAEs浓度的增加,大鼠脂肪细胞产生的脂肪颗粒数量增多。③PPAR-γ2的表达随着PAEs浓度的增加而增加。结论:可以认为PAEs通过增强PPAR-γ2表达来促进脂肪细胞的生长发育,研究结果将会为研究PAEs与肥胖的关系提供科学依据,为进一步研究PAEs对健康的影响提供了一个新的思路。
关键词
邻苯二甲酸酯类化合物
过氧化物酶体增殖剂激活受体-γ2
原代培养
RT-PCR技术
Keywords
phthalate acid esters（PAEs）
peroxisome prolifcrator activated receptor gamma 2（PPAR-γ 2）
primary culture
reverse transcription PCR
分类号
R155.5 [医药卫生—营养与食品卫生学]
R124.3 [医药卫生—环境卫生学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
铬还原酶T体外合成及活性鉴定
谭小庆
邓鹏
吴颖
白群华
贾燕
肖虹
《重庆医科大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2014
3
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职称材料
2
高三尖杉酯碱通过下调IRS4蛋白质的表达抑制黑色素瘤维罗非尼耐药细胞周期和增殖
黄世莹
曾娣
张滔
唐加峰
杜玉梅
连瑞
李静
陈地龙
《中国生物化学与分子生物学报》
CAS
CSCD
北大核心
2020
1
在线阅读
下载PDF
职称材料
3
PAEs对原代培养的大鼠脂肪细胞PPAR-γ2表达的影响
伍剑
代兴碧
郭春红
于露露
尹梁宇
《重庆医科大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2012
0
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职称材料
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