云芝糖肽、丹参酮ⅡA对荷瘤小鼠的抗肿瘤及免疫调节作用 被引量：14

1

作者 祝绚 鲍依稀 +2 位作者 李进 刘靖 王宏萍 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第6期526-529,共4页

目的:研究云芝、丹参有效组分单体以及复方对EAC荷瘤小鼠的抗肿瘤和免疫调节作用,为肿瘤的中药治疗新方剂的临床广泛应用提供一定的实验基础。方法:建立EAC实体型荷瘤小鼠动物模型,随机分为6组:生理盐水对照组(NS)、阿霉素治疗组(ADM)... 目的:研究云芝、丹参有效组分单体以及复方对EAC荷瘤小鼠的抗肿瘤和免疫调节作用,为肿瘤的中药治疗新方剂的临床广泛应用提供一定的实验基础。方法:建立EAC实体型荷瘤小鼠动物模型,随机分为6组:生理盐水对照组(NS)、阿霉素治疗组(ADM)、云芝糖肽组(PSP)、丹参酮Ⅱ组(TanⅡA)、复方组(PSP+TanⅡA)和综合治疗组(PSP+TanⅡA+ADM),并给予相应药物治疗,应用免疫组化法检测小鼠脾脏IL-2、IL-2R和肿瘤组织中周期蛋白CDK4以及凋亡蛋白Bax、Bcl-2表达,并计算抑瘤率、脏器指数,结果与对照组和化疗组进行比较。结果:云芝糖肽组小鼠脾脏IL-2、IL-2R水平高于NS组和化疗组(P<0.05),各药物治疗组肿瘤Bax均高于化疗组,CDK4均低于NS组(P<0.05),复方组Bax高于NS组(P<0.05),云芝组糖肽、丹参酮ⅡA组、综合治疗组CDK4低于化疗组(P<0.05),云芝糖肽组、复方组与综合治疗组肿瘤Bcl-2低于NS组(P<0.05),各药物治疗组对肿瘤有明显的抑制作用(P<0.05),复方组胸腺指数高于NS组,各药物治疗组胸腺指数均高于化疗组(P<0.05)。结论:云芝糖肽、丹参酮ⅡA对EAC荷瘤小鼠有明显的抗肿瘤和免疫调节作用,并能缓解化疗药物所引起的毒副作用,二者联用存在一定协同作用。 展开更多

关键词 云芝糖肽 丹参酮ⅡA 艾氏腹水癌 免疫调节 周期蛋白 凋亡相关蛋白

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结核菌H37Ra免疫小鼠后机体抗结核细胞免疫功能的研究 被引量：6

2

作者 陶昆 卢贤瑜 +1 位作者 陈思静 夏长胜 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第11期1195-1197,共3页

目的探讨小鼠皮内接种H37Ra后,细菌在体内的定植及机体能否产生针对结核菌的免疫力。方法用H37Ra皮内免疫小鼠后15、30、60 d,检测结核菌在小鼠体内脏器的定植;免疫后第30、60天,MTT法检测小鼠脾淋巴细胞受PPD刺激后的增殖转化刺激指数... 目的探讨小鼠皮内接种H37Ra后,细菌在体内的定植及机体能否产生针对结核菌的免疫力。方法用H37Ra皮内免疫小鼠后15、30、60 d,检测结核菌在小鼠体内脏器的定植;免疫后第30、60天,MTT法检测小鼠脾淋巴细胞受PPD刺激后的增殖转化刺激指数、ELISA法检测小鼠脾淋巴细胞受PPD刺激后IL-2、sIL-2R的表达量。结果小鼠脾、肺脏中有结核菌定植,并至少存活60 d;脾淋巴细胞30、60 d的刺激指数分别为(2.81±0.63)、(2.16±0.52),与BCG皮内接种组无显著性差异,与未免疫组有显著性差异(P<0.05);脾淋巴细胞IL-2、sIL-2R表达量分别为(126.88±8.11)、(91.26±7.29)pg/m l和(138.58±7.67)、(127.09±5.47)pg/m l,与BCG皮内接种组、未免疫组比较均有显著性差异(P<0.05)。结论H37Ra免疫小鼠后能诱导机体产生特异性的抗结核免疫力,且免疫效果略优于BCG。 展开更多

关键词 H37RA 定植 细胞免疫

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有机硒增强BCG细胞免疫效果的初步探讨 被引量：3

3

作者 李惠 卢贤瑜 +1 位作者 王利娴 阳强 《重庆医科大学学报》 CAS CSCD 2007年第7期682-685,共4页

目的:探讨酵母硒(Yeast-based selenium,Se)对卡介苗(BCG)免疫效果的影响。方法:将小鼠分为4组:A组BCG皮内接种+喂硒、B组BCG皮内接种、C组单纯喂硒、D组对照组(control)。于接种4周、8周后取单个脾淋巴细胞,通过检测淋巴细胞增殖指数(S... 目的:探讨酵母硒(Yeast-based selenium,Se)对卡介苗(BCG)免疫效果的影响。方法:将小鼠分为4组:A组BCG皮内接种+喂硒、B组BCG皮内接种、C组单纯喂硒、D组对照组(control)。于接种4周、8周后取单个脾淋巴细胞,通过检测淋巴细胞增殖指数(Stimulation idex,SI)、IL-2、IFN-γ、细胞毒T淋巴细胞(CTL)杀伤活力及淋巴细胞颗粒酶B及穿孔素的表达量来评价机体抗结核的细胞免疫能力。结果:6项指标A与B组均高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);A组的SI、IL-2、IFN-γ、CTL杀伤活力,免疫4周后分别为2.61±0.24、(172.56±9.34)pg/ml、(131.89±3.32)pg/ml、(43.91±3.21)%(8周值分别为2.32±0.31、(138.04±9.67)pg/ml、(129.17±2.41)pg/ml、(39.92±6.45)%,均显著高于B组(4周值:(1.62±0.14)、(134.06±9.60)pg/ml、(105.89±4.62)pg/ml、(30.46±7.97)%;8周值:1.61±0.19、(101.42±7.76)pg/ml、(102.00±5.41)pg/ml、(28.14±5.70)%),P<0.05。结论:BCG与硒酵母有免疫协同作用,能诱导机体产生较强的抗结核的细胞免疫应答反应。 展开更多

关键词 BCG 有机硒 细胞免疫

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结核菌H37Ra在小鼠体内诱导的抗结核细胞免疫应答的研究 被引量：1

4

作者 王淑玲 刘来成 +1 位作者 卢贤瑜 冯文莉 《重庆医科大学学报》 CAS CSCD 2008年第5期553-556,共4页

目的:研究结核菌H37Ra免疫小鼠后产生的特异性细胞免疫应答及其对结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,MTB)毒株感染的保护力。方法:Balb/c小鼠随机分为H37Ra组、BCG组和生理盐水(NS)组,皮内免疫8周后处死小鼠,流式细胞分析仪检测... 目的:研究结核菌H37Ra免疫小鼠后产生的特异性细胞免疫应答及其对结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,MTB)毒株感染的保护力。方法:Balb/c小鼠随机分为H37Ra组、BCG组和生理盐水(NS)组,皮内免疫8周后处死小鼠,流式细胞分析仪检测小鼠脾脏T淋巴细胞亚群的变化;取小鼠脾淋巴细胞体外培养并用PPD刺激,MTT法检测脾淋巴细胞的刺激指数(SI);ELISA法检测培养上清液中IFN-γ;免疫后第8周,用MTB毒株H37Rv经小鼠腹腔注射,4周后处死小鼠,测定小鼠肺脏荷菌量,观察免疫小鼠对MTB抵抗作用。结果:H37Ra免疫小鼠脾脏CD3^+T细胞、CD4^+T细胞的百分率分别为(41.63±1.68)%、(27.08±0.58)%,显著高于NS对照组(38.34±0.74)%、(24.37±1.60)%(P<0.05)。H37Ra免疫组脾脏CD3^+T细胞、CD4^+T细胞及CD8^+T细胞的百分率均不同程度地高于BCG免疫组,但差异无统计学意义。脾淋巴细胞SI和IFN-γ水平检测均发现H37Ra免疫组显著高于NS对照组(P<0.05),略高于BCG免疫组。感染4周后H37Ra组小鼠肺脏荷菌量与NS对照组比较下降0.954log_(10)CFU,差异有显著性(P<0.05),与BCG组之间差异均无显著性(P>0.05)。结论:H37Ra免疫小鼠后可以诱导产生特异性抗结核的细胞免疫应答,能够抵抗毒株H37Rv的攻击,且免疫效果与BCG相近。 展开更多

关键词 结核分枝杆菌 H37RA 细胞免疫

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结核菌H37Ra在小鼠体内诱导的免疫应答及其保护力

5

作者 刘来成 王淑玲 +3 位作者 范雄林 付瑞玲 吴扬 卢贤瑜 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第7期610-612,616,共4页

目的:研究结核菌H37Ra免疫小鼠后产生的特异性免疫应答以及保护效果。方法:BALB/c小鼠随机分为H37Ra组、BCG组和生理盐水(NS)组,免疫8周后处死部分小鼠,取脾淋巴细胞经体外培养、PPD刺激后,MTT法检测淋巴细胞的刺激指数,ELISA法检测培... 目的:研究结核菌H37Ra免疫小鼠后产生的特异性免疫应答以及保护效果。方法:BALB/c小鼠随机分为H37Ra组、BCG组和生理盐水(NS)组,免疫8周后处死部分小鼠,取脾淋巴细胞经体外培养、PPD刺激后,MTT法检测淋巴细胞的刺激指数,ELISA法检测培养上清液中IFN-γ和IL-4水平。另一部分免疫小鼠经腹腔感染结核分枝杆菌(Mycobacteriumtuber-culosis,MTB)毒株H37Rv,4周后处死,测定小鼠脏器重量指数。取稀释的小鼠脾脏和肺脏匀浆接种于改良罗氏培养基,培养21天后计数脏器荷菌量。结果:H37Ra和BCG免疫小鼠脾淋巴细胞刺激指数、IFN-γ和IL-4水平均显著高于NS对照组。感染4周后H37Ra和BCG组小鼠脏器重量指数较NS对照组均显著降低。H37Ra组小鼠脾脏和肺脏荷菌量与NS对照组比较分别下降了1.228log10CFU和0.954log10CFU,差异有显著性(P<0.05),与BCG组之间差异均无显著性。结论:H37Ra免疫小鼠后可以诱导产生Th1型免疫应答,能够抵抗毒株H37Rv的攻击,且免疫效果与BCG相当。 展开更多

关键词 结核分枝杆菌 H37RA BCG 免疫应答 免疫保护

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结核杆菌H37Ra免疫小鼠后脾淋巴细胞的杀伤活性及免疫机制的研究

6

作者 王利娴 卢贤瑜 +1 位作者 李惠 阳强 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第2期164-167,共4页

目的探讨结核杆菌H37Ra免疫小鼠后,产生特异性的脾淋巴细胞杀伤活性及其免疫机制。方法(1)分别以结核杆菌H37Ra、BCG和PBS免疫小鼠后第30天及第60天,分离各组小鼠脾淋巴细胞作为效应细胞,以表达Ag85B分泌蛋白的Sp2/0细胞为靶细胞,用MTT... 目的探讨结核杆菌H37Ra免疫小鼠后,产生特异性的脾淋巴细胞杀伤活性及其免疫机制。方法(1)分别以结核杆菌H37Ra、BCG和PBS免疫小鼠后第30天及第60天,分离各组小鼠脾淋巴细胞作为效应细胞,以表达Ag85B分泌蛋白的Sp2/0细胞为靶细胞,用MTT比色法检测免疫小鼠脾淋巴细胞的杀伤率;(2)在免疫后第60天,小鼠脾淋巴细胞经PPD刺激后,以RT-PCR法检测穿孔素mRNA及颗粒酶BmRNA的表达。结果(1)结核杆菌H37Ra组脾淋巴细胞的杀伤率明显高于PBS对照组(P<0.05),略高于BCG组;(2)H37Ra组和BCG组穿孔素、颗粒酶mRNA的表达量均显著高于PBS组(P<0.05),H37Ra组穿孔素mRNA的表达量显著高于BCG组(P<0.05),但颗粒酶BmRNA的表达量两组无差异。结论结核杆菌H37Ra免疫小鼠后,能增强脾淋巴细胞的杀伤活性,其机制可能与增加穿孔素、颗粒酶B的表达有关。 展开更多

关键词 结核杆菌H37Ra Ag85B蛋白 小鼠淋巴细胞 穿孔素 颗粒酶B

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Ag85B DNA/H37Ra序贯免疫效果的探讨

7

作者 王锦彤 卢贤瑜 冉柏林 《重庆医科大学学报》 CAS CSCD 2007年第6期584-587,共4页

目的:初步探讨含结核分枝杆菌Ag85B成熟蛋白的DNA(pTB30m)和结核菌H37Ra序贯免疫小鼠产生的特异性免疫应答。方法:重组质粒pTB30m用碱裂解法制备后进行质量鉴定。用pTB30m肌注初次免疫小鼠2周后,H37Ra皮内加强免疫作为DNA-85B/H37Ra组,... 目的:初步探讨含结核分枝杆菌Ag85B成熟蛋白的DNA(pTB30m)和结核菌H37Ra序贯免疫小鼠产生的特异性免疫应答。方法:重组质粒pTB30m用碱裂解法制备后进行质量鉴定。用pTB30m肌注初次免疫小鼠2周后,H37Ra皮内加强免疫作为DNA-85B/H37Ra组,同时设定DNA-85B/BCG组、H37Ra组、BCG组及未免疫组。免疫4周或8周后,用ELISA法检测小鼠血清中抗PPD IgG抗体的水平和MTT法检测其脾淋巴细胞的刺激指数(SI)。结果:酶切鉴定pTB30m所含外源基因片段大小正确,并且纯度较高。DNA-85B/H37Ra组小鼠血清中抗PPD IgG水平、脾淋巴细胞的SI均显著高于未免疫组(P<0.05);其抗PPD IgG水平稍高于DNA-85B/BCG组、H37Ra组及BCG组,但它们之间无显著性差异(P>0.05);其脾淋巴细胞的SI显著高于H37Ra、BCG组(P<0.05),而与DNA-85B/BCG组比较,仅在4周有显著性差异。在DNA-85B/H37Ra组内,SI在4周显著高于8周(P<0.05),而血清中抗PPD IgG水平8周均显著高于4周(P<0.05)。结论:DNA-85B/H37Ra序贯免疫策略可以诱导小鼠产生特异性体液免疫和细胞免疫,初步证明其免疫效果略优于BCG。 展开更多

关键词 结核分枝杆菌 序贯免疫策略 初免-加强免疫接种策略 抗原Ag85B H37RA

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小鼠Ipr1基因与EGFP基因融合表达载体的构建及其在鼠巨噬细胞中的表达 被引量：5

8

作者 李娜 朱道银 +1 位作者 帖儒修 王瑜伟 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第3期231-233,237,共4页

目的:构建小鼠胞内病原体抗性基因1(Ipr1)基因与EGFP基因融合表达载体,观察小鼠Ipr1基因在小鼠巨噬细胞株RAW 264.7中的表达。方法:从C57BL/6J小鼠胸腺组织提取总RNA,以RT-PCR法调取Ipr1基因编码序列,克隆至pEGFP-C1载体中,筛选阳性克隆... 目的:构建小鼠胞内病原体抗性基因1(Ipr1)基因与EGFP基因融合表达载体,观察小鼠Ipr1基因在小鼠巨噬细胞株RAW 264.7中的表达。方法:从C57BL/6J小鼠胸腺组织提取总RNA,以RT-PCR法调取Ipr1基因编码序列,克隆至pEGFP-C1载体中,筛选阳性克隆作PCR、酶切及测序鉴定后得到pEGFP-Ipr1,脂质体瞬时转染小鼠巨噬细胞株RAW 264.7,以空质粒pEGFP-C1转染组作为对照。采用RT-PCR法检测Ipr1的RNA水平表达及用激光共聚焦显微镜观察融合蛋白的表达及细胞内定位。结果:扩增出小鼠Ipr1基因编码序列,经PCR、酶切及测序鉴定证明得到正确的重组质粒pEGFP-Ipr1,脂质体瞬时转染小鼠巨噬细胞株RAW 264.7得到了成功表达,Ipr1基因表达产物定位于细胞核内。结论:成功地调取小鼠Ipr1基因,构建了小鼠Ipr1基因与EGFP基因融合表达载体并在小鼠巨噬细胞株RAW 264.7得到了成功表达。Ipr1编码蛋白定位于细胞核内,提示其是一种调节蛋白。 展开更多

关键词 Ipr1基因 结核病 绿色荧光蛋白 定位

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结核杆菌H37Ra感染巨噬细胞的研究 被引量：7

9

作者 刘来成 王淑玲 +3 位作者 卢贤瑜 曾佑群 吴扬 张鹏辉 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第11期1195-1197,共3页

目的:研究结核杆菌H37Ra感染巨噬细胞后氮氧化物的产生及细胞因子的分泌和表达情况。方法:结核杆菌H37Ra感染RAW264.7巨噬细胞株24 h后收集上清液,用Griess法检测一氧化氮(NO),化学法检测过氧化氢(H2O2)的产生,逆转录-聚合酶链反应(RT-P... 目的:研究结核杆菌H37Ra感染巨噬细胞后氮氧化物的产生及细胞因子的分泌和表达情况。方法:结核杆菌H37Ra感染RAW264.7巨噬细胞株24 h后收集上清液,用Griess法检测一氧化氮(NO),化学法检测过氧化氢(H2O2)的产生,逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法检测感染后巨噬细胞IL-12和TNF-αmRNA的表达,ELISA法检测细胞因子IL-12和TNF-α的含量。结果:结核杆菌H37Ra感染巨噬细胞后产生的NO和H2O2水平均显著升高,同时IL-12和TNF-α的分泌和表达也明显增加(P<0.05)。结论:结核杆菌H37Ra感染巨噬细胞后能产生大量的氮氧化物和抗结核细胞因子,从而产生有利于宿主的抗结核免疫应答。 展开更多

关键词 结核分枝杆菌 H37RA 巨噬细胞 氮氧化物 细胞因子

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结核分枝杆菌阿拉伯糖基转移酶AftA的原核表达及鉴定 被引量：2

10

作者 王爽 朱道银 +2 位作者 帖儒修 李娜 王渝伟 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第5期400-403,共4页

目的构建高效表达菌株,以大量表达结核分枝杆菌AftA蛋白,为后续的抗结核药物的筛选奠定基础。方法采用PCR法从结核分枝杆菌H37Rv基因组DNA中扩增出AftA的基因片段,将其插入原核表达质粒PQE30,构建重组质粒PQE30-aftA。将PQE30-aftA转化... 目的构建高效表达菌株,以大量表达结核分枝杆菌AftA蛋白,为后续的抗结核药物的筛选奠定基础。方法采用PCR法从结核分枝杆菌H37Rv基因组DNA中扩增出AftA的基因片段,将其插入原核表达质粒PQE30,构建重组质粒PQE30-aftA。将PQE30-aftA转化大肠杆菌,用IPTG诱导目的基因表达。Western-blotting免疫印迹法鉴定后纯化该表达产物。结果经核苷酸序列测定和酶切鉴定结果表明,成功构建了重组质粒PQE30-aftA。在大肠杆菌M15中用IPTG诱导表达后,获得了AftA蛋白。蛋白经SDS-PAGE分析约为69.5kD。免疫印迹分析证实目的蛋白与阳性结核病患者抗血清产生特异性反应。结论成功制备出重组的AftA蛋白,为新型抗结核药物的筛选奠定了物质基础。 展开更多

关键词 结核分枝杆菌 阿拉伯糖基转移酶 aftA基因 原核表达

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滴鼻途径建立鼠结核病模型的探讨 被引量：4

11

作者 杨春 何永林 +4 位作者 徐蕾 张黎 伊正君 李娜 王渝伟 《四川动物》 CSCD 北大核心 2010年第1期45-48,共4页

目的探讨滴鼻途径建立BALB/C小鼠结核分枝杆菌感染的模型的可行性。方法人型MtbH37Rv标准株经腹腔接种小鼠,取小鼠腹腔冲洗液100μl接种改良罗-琴氏培养基。刮取上述培养基上生长4周已恢复毒力的结核分枝杆菌H37Rv标准株,加0.05%Tween8... 目的探讨滴鼻途径建立BALB/C小鼠结核分枝杆菌感染的模型的可行性。方法人型MtbH37Rv标准株经腹腔接种小鼠,取小鼠腹腔冲洗液100μl接种改良罗-琴氏培养基。刮取上述培养基上生长4周已恢复毒力的结核分枝杆菌H37Rv标准株,加0.05%Tween80生理盐水磨菌制成悬液,菌落计数,计数后稀释悬液为5×103CFU/50μl、5×104CFU/50μl、5×105CFU/50μl及50μl生理盐水分别感染4组Balb/c小鼠,制作结核分枝杆菌感染模型。结果滴鼻感染小鼠4周后,所有小鼠肺、脾组织中均可见抗酸阳性菌,在感染小鼠肺、脾组织匀浆均培养出Mtb。肺组织病理改变明显,正常肺泡结构消失,以充血实变、淋巴细胞、巨噬细胞浸润为主,增生性改变不明显,未见明显的组织坏死。脾组织病理改变主要是巨噬细胞和淋巴细胞增生。结论滴鼻感染途径建立小鼠结核病模型简便、可行,为进一步研究开发重组BCG疫苗对鼠结核病的防治打下良好的基础。 展开更多

关键词 滴鼻途径 结核病 动物模型

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HPV 16 E6E7基因修饰树突状细胞疫苗诱导CTL致CaSki细胞凋亡体外实验研究 被引量：2

12

作者 焦庆昉 易发平 +6 位作者 汪长东 袁成福 刘勒 兰欢 符少月 艾青 宋方洲 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第2期115-119,共5页

目的:采用人乳头状瘤-16(HPV-16)E6E7重组腺病毒(pAd-E6E7)转染树突状细胞(Dendritic cell,DC),观察基因修饰的DC疫苗诱导细胞毒性T淋巴细胞(Cytotoxic Tlymphocyte,CTL)致使CaSki细胞凋亡的效果。方法:将pAd-E6E7转染体外培养的小鼠未... 目的:采用人乳头状瘤-16(HPV-16)E6E7重组腺病毒(pAd-E6E7)转染树突状细胞(Dendritic cell,DC),观察基因修饰的DC疫苗诱导细胞毒性T淋巴细胞(Cytotoxic Tlymphocyte,CTL)致使CaSki细胞凋亡的效果。方法:将pAd-E6E7转染体外培养的小鼠未成熟树突状细胞制备DC疫苗,激光共聚焦显微镜观察转染的小鼠未成熟树突状细胞绿色荧光蛋白表达,流式细胞术检测转染前后小鼠树突状细胞表面标志物(CD40、CD86、MHCⅡ和CD11C)。DC疫苗诱导产生特异性细胞毒性T淋巴细胞,与CaSki细胞共培养后,采用DAPI、TUNEL及流式细胞术检测CaSki细胞凋亡情况。结果:pAd-E6E7成功转染体外培养的小鼠未成熟树突状细胞,体外转染效率约为40%～50%,成功制备了HPV16 E6E7基因修饰树突状细胞疫苗,诱导产生细胞毒性T淋巴细胞,经DAPI、TUNEL及流式细胞术检测证明CaSki出现凋亡。结论:以带有HPV16 E6E7基因的重组腺病毒载体转染DC制备基因修饰的DC疫苗,诱导CTL致使CaSki细胞出现凋亡。 展开更多

关键词 人乳头状瘤病毒 细胞毒性T淋巴细胞 CASKI细胞 树突状细胞

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基因芯片检测吴茱萸碱对小鼠DC细胞功能调控相关基因表达的影响 被引量：3

13

作者 祝绚 梁华平 鲍依稀 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第7期597-600,共4页

目的:利用基因芯片技术检测吴茱萸碱对小鼠骨髓来源DC功能调控相关基因表达的影响。方法:分离BALB/c小鼠骨髓细胞,经GM-CSF体外诱导培养10天的未成熟DC细胞(iDC)经不同因素处理并分为:对照组(Ⅰ)、吴茱萸碱组(EVO)(Ⅱ)、内毒素(LPS)组(... 目的:利用基因芯片技术检测吴茱萸碱对小鼠骨髓来源DC功能调控相关基因表达的影响。方法:分离BALB/c小鼠骨髓细胞,经GM-CSF体外诱导培养10天的未成熟DC细胞(iDC)经不同因素处理并分为:对照组(Ⅰ)、吴茱萸碱组(EVO)(Ⅱ)、内毒素(LPS)组(Ⅲ)、EVO+LPS组(Ⅳ),24小时后收集各组细胞,抽提总RNA,利用SuperArray公司小鼠DC与抗原提呈细胞基因芯片MM-604对细胞功能相关基因进行检测。结果:Ⅱ/Ⅰ上调≥2倍基因7个,下调≥2倍基因10个;Ⅲ/Ⅰ上调≥2倍基因37个,下调≥2倍基因12个;Ⅳ/Ⅱ上调≥2倍基因46个,下调≥2倍基因7个;Ⅳ/Ⅲ上调≥2倍基因24个,下调≥2基因2个,对这些基因功能进行检索分类,主要涉及细胞因子分泌及其受体表达、抗原摄取、抗原提呈、细胞表面受体、信号传导。结论:吴茱萸碱对DC作用涉及多个基因的表达调控,这些基因控制并影响着DC功能、分化和成熟,为进一步寻找药物靶点提供了线索。 展开更多

关键词 吴茱萸碱 树突状细胞 基因芯片

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结核分枝杆菌RpfA蛋白的原核表达、鉴定和纯化 被引量：1

14

作者 徐蕾 帖儒修 +4 位作者 王爽 王瑜伟 李娜 何永林 蒋仁举 《重庆医科大学学报》 CAS CSCD 2008年第5期560-563,637,共5页

目的:构建结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,MTB)复活促进因子A(Resuscitation-promoting factor,ARpfA)的原核表达质粒,并在大肠杆菌中表达和纯化。方法:采用聚合酶链反应(PCR)方法从结核分枝杆菌H37Rv基因组DNA中扩增出RpfA基... 目的:构建结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,MTB)复活促进因子A(Resuscitation-promoting factor,ARpfA)的原核表达质粒,并在大肠杆菌中表达和纯化。方法:采用聚合酶链反应(PCR)方法从结核分枝杆菌H37Rv基因组DNA中扩增出RpfA基因(1 224bp),然后用双内切酶消化后,与同样酶消化的pET32aα(+)载体连接,转入大肠杆菌Top10;阳性克隆用酶切和DNA测序鉴定。测序正确后,将重组质粒转化到的大肠杆菌BL21中,经IPTG诱导,由T7启动子调控表达了RpfA蛋白;利用His-tag in-gel Stain对表达蛋白进行鉴定,最后对目的蛋白进行纯化。结果:双酶切鉴定所切下的片段大小与理论值相符,测序结果与文献报道一致。经SDS-PAGE分析和His-tag in-gel Stain鉴定均发现66ku处有特异性蛋白条带。结论:成功克隆并构建了RpfA基因的重组表达质粒pET32α(+)-RpfA,并获得了高纯度的重组蛋白,为以后的深入研究奠定了基础。 展开更多

关键词 结核分枝杆菌 RpfA 克隆 表达 纯化

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结核分枝杆菌复活促进因子B的原核表达、鉴定和纯化 被引量：1

15

作者 徐蕾 何永林 +2 位作者 张黎 辛渝 朱道银 《重庆医科大学学报》 CAS CSCD 2007年第3期253-256,共4页

目的:构建结核分枝杆菌复活促进因子B(RpfB)的原核表达质粒,并在大肠杆菌中表达和纯化。方法:采用聚合酶链反应(PCR)方法从结核分枝杆菌H37Rv基因组DNA中扩增出RpfB基因(1089bp),然后用双内切酶消化后,与同样酶消化的pET32a(+)载体连接... 目的:构建结核分枝杆菌复活促进因子B(RpfB)的原核表达质粒,并在大肠杆菌中表达和纯化。方法:采用聚合酶链反应(PCR)方法从结核分枝杆菌H37Rv基因组DNA中扩增出RpfB基因(1089bp),然后用双内切酶消化后,与同样酶消化的pET32a(+)载体连接,转入大肠杆菌Top10;阳性克隆用酶切和DNA测序鉴定。测序正确后,将重组质粒转化到的大肠杆菌BL21中,经IPTG诱导,由T7启动子调控表达了RpfB蛋白;利用Western-blot法对表达蛋白进行鉴定,最后对目的蛋白进行纯化。结果:双酶切鉴定所切下的片段大小与理论值相符,测序结果与文献报道一致。经SDS-PAGE分析和Western-blot鉴定均发现61KDa处有特异性蛋白条带。结论:成功克隆并构建了RpfB基因的重组表达质粒pET32a(+)-RpfBv,并获得了高纯度的重组蛋白,为以后的深入研究奠定了基础。 展开更多

关键词 结核分枝杆菌 RpfB 隆 表达 纯化

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icl mRNA特异性10-23DRz在小鼠体内抗结核分枝杆菌感染的实验研究 被引量：1

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作者 李俊明 朱道银 +2 位作者 王娜 罗清 万腊根 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第6期541-545,共5页

目的探讨iclmRNA特异性10-23脱氧核酶(deoxyribozyme,DRz)对结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,Mtb)在小鼠体内感染的影响,及其单独或与异烟肼(isoniazidum,INH)联合应用治疗小鼠结核病的效果。方法分别用DZ4、INH、INH+DZ4-S或I... 目的探讨iclmRNA特异性10-23脱氧核酶(deoxyribozyme,DRz)对结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,Mtb)在小鼠体内感染的影响,及其单独或与异烟肼(isoniazidum,INH)联合应用治疗小鼠结核病的效果。方法分别用DZ4、INH、INH+DZ4-S或INH+DZ4对Mtb进行预处理,再用上述经过预处理的Mtb感染BALB/c小鼠,一定时间后进行小鼠肺组织Mtb培养及病理学改变观察。利用DZ4-FITC溶液对BALB/c小鼠进行滴鼻处理,检测滴鼻途径给药的效果。采用尾静脉注射法建立小鼠结核病模型,将模型小鼠随机分为5组(n=10),分别给予生理盐水、DZ4、INH、INH+DZ4、INH+DZ4-polyG治疗,于治疗完成2周后进行小鼠肺组织Mtb荷菌量检测和病理学改变观察。结果Mtb感染后2周,各组小鼠的肺组织荷菌量均无显著性差异(P>0.05)。感染进行至4～12周时,INH+DZ4预处理组Mtb感染小鼠的肺组织荷菌量较其它各组均显著偏低(P<0.05),肺组织的病理改变较其他各组也明显轻微。经滴鼻途径给予DZ4-FITC溶液4h后,小鼠肺组织冰冻切片在荧光显微镜下可见强烈的黄绿色荧光,并至少持续48h。对小鼠结核病模型的治疗结果显示,DZ4单独治疗组小鼠肺组织荷菌量及病理表现与未治疗组无显著差异;加用INH治疗的各组小鼠肺组织荷菌量与生理盐水组比较有显著下降(P<0.05),肺组织病理表现也明显轻微,但10-23DRz和INH联合治疗组与INH单独治疗组在肺组织荷菌量和病理表现上均无显著性差异。结论10-23DRz与INH联合预处理可有效降低Mtb感染小鼠的能力;本研究未发现10-23DRz对结核病具有治疗作用或辅助治疗作用。 展开更多

关键词 分枝杆菌 结核 10—23脱氧核酶 结核病模型 小鼠

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结核菌H37Ra皮内接种对小鼠巨噬细胞的激活效应 被引量：3

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作者 陶昆 卢贤瑜 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第3期232-235,共4页

目的探讨小鼠皮内接种结核菌H37Ra后,腹腔MΦ是否被免疫激活以及激活后氮氧化物的产生、抗结核细胞因子的表达,从而了解H37Ra的免疫应答过程及对MΦ的抗菌免疫作用。方法用H37Ra、BCG皮内免疫小鼠后第30、60天,分别采用Griess法、化学法... 目的探讨小鼠皮内接种结核菌H37Ra后,腹腔MΦ是否被免疫激活以及激活后氮氧化物的产生、抗结核细胞因子的表达,从而了解H37Ra的免疫应答过程及对MΦ的抗菌免疫作用。方法用H37Ra、BCG皮内免疫小鼠后第30、60天,分别采用Griess法、化学法、ELISA法检测小鼠腹腔MΦ在受到、未受到IFN-γ刺激后NO、H2O2的产生以及IL-12、TNF-α的表达水平。结果①H37Ra免疫小鼠后能显著诱导MΦ分泌表达IL-12、TNF-α,与BCG皮内接种组、未免疫组比较,其差异均有统计学意义(P<0.05);也能诱导MΦ产生NO、H2O2,与未免疫组比较具有统计学意义(P<0.05),与BCG皮内接种组比较,无明显差异;②IFN-γ对巨噬细胞氮氧化物的产生、细胞因子的表达具增强效应。结论H37Ra皮内接种小鼠后能诱导巨噬细胞活化并产生较强的激活效应,且该效应略优于BCG。 展开更多

关键词 H37RA 巨噬细胞 氮氧化物 细胞因子

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p38 MAPK对嗜酸性粒细胞和支气管上皮细胞共培养时细胞因子释放的调控作用 被引量：1

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作者 王成彬 黄振国 +3 位作者 叶伟基 林伟基 鲍依希 田亚平 《解放军医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第2期118-120,共3页

目的了解嗜酸性粒细胞和支气管上皮细胞相互作用诱导细胞因子释放的p38MAPK信号转导通路。方法用CD16磁珠抗体分离外周血中嗜酸性粒细胞,以嗜酸性粒细胞和支气管上皮细胞(BEAS-2B)接触共培养为实验模型,观察SB203580对细胞培养上清液中... 目的了解嗜酸性粒细胞和支气管上皮细胞相互作用诱导细胞因子释放的p38MAPK信号转导通路。方法用CD16磁珠抗体分离外周血中嗜酸性粒细胞,以嗜酸性粒细胞和支气管上皮细胞(BEAS-2B)接触共培养为实验模型,观察SB203580对细胞培养上清液中细胞因子浓度的影响。细胞因子浓度采用ELISA和流式细胞微珠方法测定。结果SB203580能够有效抑制BEAS-2B细胞释放IL-6、IL-8(P<0.05)和嗜酸性粒细胞释放IL-8(P<0.01)。SB203580对嗜酸性粒细胞与BEAS-2B细胞接触共培养诱导的IL-6、IL-8和IP-10释放具有显著抑制作用(P<0.001)。结论嗜酸性粒细胞、BEAS-2B细胞单独或相互作用时均通过p38MAPK信号转导通路释放细胞因子。 展开更多

关键词 嗜酸细胞 支气管上皮细胞 细胞因子类 有丝分裂素激活蛋白激酶激酶类

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携带结核杆菌Ag85B靶细胞的构建、鉴定及应用 被引量：1

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作者 李惠 王利娴 +1 位作者 卢贤瑜 阳强 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第3期214-217,共4页

目的构建表达结核分枝杆菌分泌蛋白Ag85B的靶细胞以便评定结核疫苗的特异性细胞毒(CTL)作用。方法将携带有Ag85B基因的重组质粒pTB30s转入小鼠骨髓瘤细胞(SP2/0),用RT-PCR及免疫组化染色法鉴定阳性克隆细胞胞内的Ag85B基因转录和蛋白表... 目的构建表达结核分枝杆菌分泌蛋白Ag85B的靶细胞以便评定结核疫苗的特异性细胞毒(CTL)作用。方法将携带有Ag85B基因的重组质粒pTB30s转入小鼠骨髓瘤细胞(SP2/0),用RT-PCR及免疫组化染色法鉴定阳性克隆细胞胞内的Ag85B基因转录和蛋白表达水平;同时,用接种过BCG,pTB30s或生理盐水(NS)小鼠脾脏单个核细胞作为效应细胞,G418高压筛选的阳性克隆细胞为靶细胞,用MTT法检测各组CTL杀伤活性。结果RT-PCR以及免疫组化结果显示,阳性细胞能稳定表达Ag85B。CTL杀伤实验:BCG、pTB30s及NS对照组杀伤率分别为28.14%、45.18%和5.13%。结论含有Ag85B靶细胞构建成功及应用,为研究结核疫苗的免疫效果提供了较好的研究手段。 展开更多

关键词 结核分枝杆菌 AG85B 特异性CTL杀伤活性

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小鼠巨噬细胞Ipr1基因真核表达载体的构建及表达

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作者 李娜 朱道银 +1 位作者 何永林 张黎 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第3期216-219,共4页

目的构建小鼠Ipr1(intracellular pathogen resistance 1)基因真核表达载体。方法从C57BL/6J小鼠胸腺组织提取总RNA,以RT-PCR法调取Ipr1基因编码序列,克隆至pMD19-Tsimple载体中,转化大肠杆菌JM109,筛选的阳性克隆作PCR及酶切鉴定后测... 目的构建小鼠Ipr1(intracellular pathogen resistance 1)基因真核表达载体。方法从C57BL/6J小鼠胸腺组织提取总RNA,以RT-PCR法调取Ipr1基因编码序列,克隆至pMD19-Tsimple载体中,转化大肠杆菌JM109,筛选的阳性克隆作PCR及酶切鉴定后测序分析。其中的突变碱基经点突变修复后将Ipr1基因亚克隆于原核真核双系统表达质粒pQE-TriSystem中得到pQE-TriSystem-Ipr1,用脂质体瞬时转染小鼠巨噬细胞株RAW264.7细胞,RT-PCR鉴定Ipr1基因的表达。结果从C57BL/6J小鼠胸腺组织内扩增出大小为1338bp片段。阳性克隆测序鉴定发现一个点突变,经点突变修复后与GenBank报道的Ipr1基因序列一致。亚克隆获得重组质粒pQE-TriSystem-Ipr1,转染RAW264.7细胞经RT-PCR扩增出Ipr1基因相应大小的DNA片段。结论成功调取小鼠Ipr1基因并成功构建含Ipr1基因的真核表达载体,为进一步研究Ipr1基因的功能奠定基础。 展开更多

关键词 Ipr1 结核病 真核表达载体 pQE-TriSystem

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