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9ku颗粒溶素活性肽重组减毒沙门菌的构建与表达
被引量：
1
1
作者
何永林
张黎
+3 位作者
朱道银
伊正君
杨春
徐蕾
《中国人兽共患病学报》
CAS
CSCD
北大核心
2007年第5期441-444,共4页
目的构建人9ku颗粒溶素(granulysin)的重组减毒沙门菌,并在真核细胞中表达,为下一步利用颗粒溶素基因治疗肿瘤奠定基础。方法以含有颗粒溶素cDNA序列的质粒为模板,通过聚合酶链反应(PCR)扩增获得含分泌肽编码基因的9ku的颗粒溶素基因片...
目的构建人9ku颗粒溶素(granulysin)的重组减毒沙门菌,并在真核细胞中表达,为下一步利用颗粒溶素基因治疗肿瘤奠定基础。方法以含有颗粒溶素cDNA序列的质粒为模板,通过聚合酶链反应(PCR)扩增获得含分泌肽编码基因的9ku的颗粒溶素基因片段后,定向插入真核表达载体pBudCE4.1中,获得重组表达质粒pBudCE4.1-S9K,通过PCR、双酶切及插入片段序列测定对重组质粒进行鉴定;采用RT-PCR,免疫细胞化学与Dot-ELISA法检测pBudCE4.1-S9K在RAW264.7细胞的瞬时表达与分泌;重组质粒电转化减毒沙门菌后,将重组菌感染巨噬细胞,以RT-PCR检查颗粒溶素的表达。结果成功扩增出含分泌肽编码基因的9ku的颗粒溶素基因片段;经酶切,PCR及测序鉴定证明得到读码框正确的重组质粒;转染细胞证实可分泌表达9ku颗粒溶素;重组减毒沙门菌感染细胞后,检测到颗粒溶素的表达。结论成功构建含9ku颗粒溶素活性肽基因的重组减毒沙门菌,该菌能成功递呈携带基因在感染细胞内表达。
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关键词
颗粒溶素
真核表达质粒
重组减毒沙门菌
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题名
9ku颗粒溶素活性肽重组减毒沙门菌的构建与表达
被引量：
1
1
作者
何永林
张黎
朱道银
伊正君
杨春
徐蕾
机构
重庆医科大学免疫学与微生物学教研室
出处
《中国人兽共患病学报》
CAS
CSCD
北大核心
2007年第5期441-444,共4页
基金
国家自然科学基金项目(30400375)
重庆市自然科学基金项目(CSTC2006BB5273)
文摘
目的构建人9ku颗粒溶素(granulysin)的重组减毒沙门菌,并在真核细胞中表达,为下一步利用颗粒溶素基因治疗肿瘤奠定基础。方法以含有颗粒溶素cDNA序列的质粒为模板,通过聚合酶链反应(PCR)扩增获得含分泌肽编码基因的9ku的颗粒溶素基因片段后,定向插入真核表达载体pBudCE4.1中,获得重组表达质粒pBudCE4.1-S9K,通过PCR、双酶切及插入片段序列测定对重组质粒进行鉴定;采用RT-PCR,免疫细胞化学与Dot-ELISA法检测pBudCE4.1-S9K在RAW264.7细胞的瞬时表达与分泌;重组质粒电转化减毒沙门菌后,将重组菌感染巨噬细胞,以RT-PCR检查颗粒溶素的表达。结果成功扩增出含分泌肽编码基因的9ku的颗粒溶素基因片段;经酶切,PCR及测序鉴定证明得到读码框正确的重组质粒;转染细胞证实可分泌表达9ku颗粒溶素;重组减毒沙门菌感染细胞后,检测到颗粒溶素的表达。结论成功构建含9ku颗粒溶素活性肽基因的重组减毒沙门菌,该菌能成功递呈携带基因在感染细胞内表达。
关键词
颗粒溶素
真核表达质粒
重组减毒沙门菌
Keywords
granulysin
eukaryotic expression plasmid
recombinant attenuated Salmonella
分类号
R730.59 [医药卫生—肿瘤]
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作者
出处
发文年
被引量
操作
1
9ku颗粒溶素活性肽重组减毒沙门菌的构建与表达
何永林
张黎
朱道银
伊正君
杨春
徐蕾
《中国人兽共患病学报》
CAS
CSCD
北大核心
2007
1
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