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苦参碱对HepG_2细胞系增殖能力的影响 被引量:33
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作者 司维柯 张广运 +1 位作者 马立强 康格非 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2000年第5期451-451,458,共2页
关键词 苦参碱 肝肿瘤 中医药疗法 HEPG2细胞 细胞增殖
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苦参碱对人肝癌细胞HepG_2的细胞形态影响和相关增殖因素的变化 被引量:14
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作者 司维柯 肖桃元 康格非 《第三军医大学学报》 CSCD 北大核心 2000年第6期553-556,共4页
目的 观察苦参碱作用于HepG2 细胞后 ,光镜和电镜下细胞形态结构改变以及AFP、PCNA和分裂指数的变化。方法 倒置显微镜下观察活细胞形态 ;光镜下观察Wright和苏丹Ⅲ染色的细胞形态和分裂指数 ;扫描和透射电镜观察细胞表面和内部超微... 目的 观察苦参碱作用于HepG2 细胞后 ,光镜和电镜下细胞形态结构改变以及AFP、PCNA和分裂指数的变化。方法 倒置显微镜下观察活细胞形态 ;光镜下观察Wright和苏丹Ⅲ染色的细胞形态和分裂指数 ;扫描和透射电镜观察细胞表面和内部超微结构改变 ;免疫组化和图像分析 ,检测AFP和PCNA。结果 未用药细胞具有肿瘤细胞典型的形态特征 ,细胞的分裂指数为 5 3 .8‰ ,胞浆内未见透明颗粒和空泡 ,苏丹Ⅲ染色为阴性。免疫组化染色AFP和PCNA为阳性。苦参碱处理细胞后 ,细胞数量减少 ,散在生长 ,形态呈多形性 ,细胞浆内充满圆形、透明的颗粒。Wright染色 ,细胞浆呈空泡状 ,细胞核变小 ,核浆比减小 ,核仁变小、数目减少 ,细胞的分裂指数降低。苏丹Ⅲ染色 ,胞浆内有阳性的颗粒。电镜下 ,细胞表面微绒毛变短、变粗 ,甚至消失。核内异染色质增多 ,核仁变小、甚至消失。细胞浆内滑面内质网扩张 ,并有脂肪空泡和自噬小体形成。胞浆局部还出现了较多的板层状排列的粗面内质网。细胞核膜和胞膜均完整。AFP和PCNA量 ,随用药浓度和作用时间的增加而降低。结论 苦参碱对HepG2 细胞的生长增殖有抑制作用 ,使HepG2 细胞的某些恶性增殖表型减弱或消失 ,反应了该细胞的恶性程度和侵袭力均减弱或消失。 展开更多
关键词 苦参碱 肝细胞癌 细胞形态 HEPG2 细胞增殖
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Western blot检测蛋白表达的方法改进及初步应用 被引量:13
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作者 张莉萍 蒋纪恺 Joe Tam 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2001年第10期1242-1243,共2页
目的 探讨Western blotting 增强化学发光法 (ECL )在分析细胞周期调控蛋白表达中的应用。方法 采用K562细胞 ,制备细胞核 ,对电泳、封闭、结合、检测等关键步骤进行了实验条件的摸索和改进 ,并对我室研究苦参碱诱导K562细胞分化机制... 目的 探讨Western blotting 增强化学发光法 (ECL )在分析细胞周期调控蛋白表达中的应用。方法 采用K562细胞 ,制备细胞核 ,对电泳、封闭、结合、检测等关键步骤进行了实验条件的摸索和改进 ,并对我室研究苦参碱诱导K562细胞分化机制的细胞周期蛋白的表达进行了分析。结果  3 0 μg核蛋白质即可检测到K562细胞中 ,均有不同程度的CyclinE、Cdk2、CyclinD1、Cdk5表达。结论 Western blotting ECL法特异性强、灵敏度高 ,是分析蛋白质表达较为理想的方法。 展开更多
关键词 蛋白质 表达 WESTERN-BLOT法
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重组逆转录病毒双表达载体的构建及其对K562细胞增殖活性的影响 被引量:1
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作者 曾建明 冯文莉 +6 位作者 王小中 赵世巧 白卫君 罗云萍 温健萍 涂植光 黄宗干 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第21期2130-2134,共5页
目的构建针对慢性粒细胞白血病bcr-abl b3a2型mRNA的双表达逆转录病毒载体,初步探讨其对K562细胞表型的影响。方法以逆转录病毒载体pMSCV-neo为骨架,构建eGFP及针对bcr-abl b3a2型mRNA的反义RNA双表达载体pMSCV/GFP-H1-BCR/ABL40AS,同... 目的构建针对慢性粒细胞白血病bcr-abl b3a2型mRNA的双表达逆转录病毒载体,初步探讨其对K562细胞表型的影响。方法以逆转录病毒载体pMSCV-neo为骨架,构建eGFP及针对bcr-abl b3a2型mRNA的反义RNA双表达载体pMSCV/GFP-H1-BCR/ABL40AS,同时构建对照载体pMSCV/GFP-H1-BCR/ABL40S和pMSCV/GFP-H1-BCR/ABL80AS,酶切及测序鉴定各重组载体;以脂质体法转染各载体到PT67包装细胞后,G418筛选稳定的病毒产生细胞株,再以NIH3T3细胞测定病毒滴度并感染K562细胞,计数细胞数绘制细胞生长曲线,FCM检测细胞凋亡情况、并用Westernblot检测PKR激活情况。结果酶切及测序结果证实各重组载体构建完全正确;G418筛选到高滴度重组逆转录病毒生产细胞株:PT67-MSCV/GFP、PT67-40as、PT67-40s和PT67-80as,且PT67-40as上清感染组K562细胞生长受抑制,其24h时早期细胞凋亡率为22.54±3.19%,与除PT67-80as组外的其余各组相比有显著差异(P<0.05);PT67-40as和PT67-80as处理组细胞PKR磷酸化水平分别增高了59.20%和60.33%,2AP能抑制PT67-40as的作用。结论成功构建重组逆转录病毒双表达载体,并发现其能抑制K562细胞生长并引起细胞凋亡,通过激活PKR抗肿瘤可望成为肿瘤新的靶向治疗策略。 展开更多
关键词 慢性粒细胞白血病 PKR 反义RNA 逆转录病毒载体 基因克隆
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肾功能损害病人尿对大鼠脑、肾K^+-pNPPase活力影响的探讨
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作者 王继红 欧阳恒静 《重庆医科大学学报》 CAS CSCD 1993年第4期268-271,共4页
K^+-pNPPase,(钾激活对硝基苯硝酸酶)为钠泵的一部分。肾功能损害病人尿及正常人尿经SephadexG-25脱盐后,加入K^+-pNPPase活力测定体系,发现两组尿对酶活力有明显抑制作用。
关键词 肾功能损害 尿毒症
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