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苦参碱诱导K562细胞分化相关cDNA的克隆 被引量:5
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作者 张彦 蒋纪恺 +3 位作者 刘小珊 刘北忠 许相儒 何渝军 《重庆医科大学学报》 CAS CSCD 2000年第4期337-339,共3页
目的 克隆苦参碱诱导人白血病K562细胞分化的相关基因,以求了解白血病细胞分化及苦参碱的作用机制。方法 以人白血病细胞K562为研究对象,在苦参碱诱导其分化的基础上,利用mRNA差异显示技术对K562细胞在苦参碱诱导前及诱导后48小时... 目的 克隆苦参碱诱导人白血病K562细胞分化的相关基因,以求了解白血病细胞分化及苦参碱的作用机制。方法 以人白血病细胞K562为研究对象,在苦参碱诱导其分化的基础上,利用mRNA差异显示技术对K562细胞在苦参碱诱导前及诱导后48小时的基因表达情况进行分析。结果 在苦参碱诱导前后的K562细胞之间存在明显的基因表达差异,一些基因在诱导后表达增强,而一些基因经苦参碱作用后表达减弱甚至完全抑制。经克隆和筛选获得部分表达差异的cDNA片段,为进一步研究苦参碱的诱导分化机制及肿瘤细胞发生和分化机制打下了基础。结论 苦参碱具有调控分化相关基因表达的作用,苦参碱诱导K562细胞分化是多基因共同参与的过程。 展开更多
关键词 苦参碱 K562细胞 CDNA 白血病 克隆 MRNA
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端粒酶活性与白血病细胞系的分化 被引量:7
2
作者 张莉萍 刘祥贵 +6 位作者 蒋纪恺 张彦 许湘儒 刘北忠 何渝军 康格非 刘小珊 《中国肿瘤临床》 CAS CSCD 北大核心 1999年第3期178-181,共4页
为了探讨白血病细胞的分化和端粒酶活性改变的关系。方法:采用PCR-ELISA方法检测白血病细胞株K-562和HL-60诱导分化前后的端粒酶活性。结果:未经药物处理的K-562和HL-60细胞有高的端粒酶活性;用苦参碱... 为了探讨白血病细胞的分化和端粒酶活性改变的关系。方法:采用PCR-ELISA方法检测白血病细胞株K-562和HL-60诱导分化前后的端粒酶活性。结果:未经药物处理的K-562和HL-60细胞有高的端粒酶活性;用苦参碱作用K-562细胞和维甲酸处理HL-60细胞一定时间后,端粒酶活性被明显抑制:分化诱导剂不能直接抑制端粒酶活性;端粒酶活性的高低与细胞所处的分化状态有关。结论:分化是细胞自身调控的过程,端粒酶活性的高低与细胞所处的分化状态密切相关。 展开更多
关键词 端粒酶活性 白血病细胞系 PCR-ELISA
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苦参碱对K562细胞Cgi-100基因表达和细胞增殖的影响 被引量:8
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作者 黄凤霞 张彦 王伟佳 《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 2008年第3期525-530,共6页
本研究了解功能未知的cgi-100基因在苦参碱作用人白血病K562细胞中的表达情况,并探讨其对K562细胞生长的影响。应用RT-PCR检测苦参碱作用前后K562细胞中cgi-100基因的表达情况;构建pIRES2-EGFP/cgi-100真核表达质粒,用脂质体法转染至K56... 本研究了解功能未知的cgi-100基因在苦参碱作用人白血病K562细胞中的表达情况,并探讨其对K562细胞生长的影响。应用RT-PCR检测苦参碱作用前后K562细胞中cgi-100基因的表达情况;构建pIRES2-EGFP/cgi-100真核表达质粒,用脂质体法转染至K562细胞中;RT-PCR检测在重组细胞中目的基因cgi-100的表达状况,并采用台盼蓝染色法观察细胞生长趋势,电镜观察细胞形态学改变,流式细胞术检测细胞周期的变化,观察cgi-100基因过表达对K562细胞增殖的影响。结果表明,在苦参碱作用K562细胞后cgi-100基因表达下调;重组K562细胞中cgi-100基因过表达,且常染色质增加,异染色质减少,细胞增殖旺盛,S期细胞增多,增殖速度高于对照组。结论:不同浓度不同作用时间下苦参碱能使K562细胞中cgi-100基因表达下降;cgi-100基因过表达能使K562细胞增殖加速、细胞幼稚程度增加。 展开更多
关键词 苦参碱 白血病 K562细胞 cgi-100基因
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改良DDRT-PCR研究苦参碱诱导K562细胞分化相关的差异表达基因 被引量:2
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作者 刘北忠 蒋纪恺 +2 位作者 何於娟 张彦 刘小珊 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2003年第3期388-390,共3页
The differentiation of human leukemia K562 cells can be induced by matrine. To investigate the mechanism of the induced cell differentiation, an improved DDRT PCR technique was applied to screen the differentially exp... The differentiation of human leukemia K562 cells can be induced by matrine. To investigate the mechanism of the induced cell differentiation, an improved DDRT PCR technique was applied to screen the differentially expressed genes between K562 cells and the matrine treated cells. The sequences of the fragments of the differentially expressed genes were obtained by sequencing following the T A cloned fragments identified by restriction endonuclease, and analyzed with bioinformatics. The results indicated that the multiple gene expression known already changed in the process of induced cell differentiation and an unknown gene fragment was cloned. It suggested that the differentially expressed genes acted as cell differentiation related genes involved in the early phase of the induced cell differentiation. 展开更多
关键词 DDRT-PCR 苦参碱 细胞分化 差异表达基因 中药 白血病
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人红白血病细胞株c-myc/N-ras/P_(53)mRNA的表达及其与细胞生物学特性的关系 被引量:1
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作者 张莉萍 蒋纪恺 +3 位作者 张彦 许湘儒 刘北忠 何渝军 《重庆医科大学学报》 CAS CSCD 2000年第1期4-6,共3页
本实验用一定浓度的苦参碱作用K562细胞16h, 24h,48h,采用分子生物学Northern Blot和Dot Blot杂交技术分析c-myc,N-ras及P53 mRNA在K562细胞诱导分化过程中表达水平改变,以... 本实验用一定浓度的苦参碱作用K562细胞16h, 24h,48h,采用分子生物学Northern Blot和Dot Blot杂交技术分析c-myc,N-ras及P53 mRNA在K562细胞诱导分化过程中表达水平改变,以探讨其表达水平与细胞生物学特性的关系。结果显示苦参碱作用K562细胞24h时,N-ras基因mRNA表达活化;P53-基因表达增强:作用48h时,c-myc mRNA水平表达明显受抑。说明苦参碱在诱导K562细胞分化启动时,能明显改变早期相关癌基因的表达。提示c-myc,N-ras和P53等癌基因是一类重要的细胞增殖、分化调控因素。 展开更多
关键词 红白血病 C-MYC N-RAS P53基因 MRNA
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蛤蚧对大鼠小肠自由基代谢的影响 被引量:1
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作者 薛长江 陈国千 +3 位作者 周小棉 刘建武 吴春梅 王霞文 《重庆医科大学学报》 CAS CSCD 1992年第2期86-88,共3页
本文观察了蛤阶乙醇提取液对18月龄大鼠小肠匀浆中超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH—Px)活性及还原型谷胱甘肽(GSH)和过氧化脂质(LPO)含量的影响.结果显示蛤蚧对大鼠小肠的自由基代谢有着积极的意义,使SO... 本文观察了蛤阶乙醇提取液对18月龄大鼠小肠匀浆中超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH—Px)活性及还原型谷胱甘肽(GSH)和过氧化脂质(LPO)含量的影响.结果显示蛤蚧对大鼠小肠的自由基代谢有着积极的意义,使SOD、GSH—Px和CAT活性明显增强,GSH水平增高,而LPO含量明显下降.同时表明,蛤蚧尾部的作用大于体部; 展开更多
关键词 蛤蚧 超氧化物歧化酶 衰老
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未知基因CGI-100的克隆及其真核表达载体的构建 被引量:1
7
作者 黄凤霞 张彦 王伟佳 《重庆医科大学学报》 CAS CSCD 2007年第8期785-788,共4页
目的:为探讨研究未知基因CGI-100的功能,克隆人CGI-100基因并构建其真核表达载体。方法:通过RT-PCR从人白血病K562细胞中克隆CGI-100基因全长编码区,将该cDNA片段亚克隆至载体pMD18-T SimpleT中,经测序鉴定后,用BamHⅠ和PstⅠ双酶切将目... 目的:为探讨研究未知基因CGI-100的功能,克隆人CGI-100基因并构建其真核表达载体。方法:通过RT-PCR从人白血病K562细胞中克隆CGI-100基因全长编码区,将该cDNA片段亚克隆至载体pMD18-T SimpleT中,经测序鉴定后,用BamHⅠ和PstⅠ双酶切将目的cDNA片段定向克隆至相同处理的pIRES2-EGFP真核表达质粒中,然后经酶切、PCR鉴定和DNA序列测定三重鉴定方法对重组质粒进行鉴定。结果:经酶切、PCR及测序鉴定证实,CGI-100基因全长编码区cDNA被准确正向插入至pIRES2-EGFP质粒的酶切位点BamHⅠ和PstⅠ之间,未发现碱基突变或移位。结论:成功地构建并鉴定了含CGI-100基因全长编码区的真核表达质粒,为以后研究该基因的功能奠定了基础。 展开更多
关键词 CGI-100基因 真核表达载体 克隆
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磷脂酶A_2抑制剂及抗氧化剂对内毒素所致生物膜损伤的保护作用 被引量:1
8
作者 吕礼应 康格非 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 1995年第2期160-163,共4页
研究磷脂酶A2抑制剂及抗氧化剂对内毒素所致红细胞膜损伤的保护作用。结果表明:磷脂酶A2抑制剂氯丙嗪及地塞米松能明显改善内毒素所致的红细胞膜磷脂降解及脂质过氧化反应的增强,抗氧化剂维生素E则具有显著的抗氧化能力。提示:... 研究磷脂酶A2抑制剂及抗氧化剂对内毒素所致红细胞膜损伤的保护作用。结果表明:磷脂酶A2抑制剂氯丙嗪及地塞米松能明显改善内毒素所致的红细胞膜磷脂降解及脂质过氧化反应的增强,抗氧化剂维生素E则具有显著的抗氧化能力。提示:由磷脂酶A2激活所介导的膜磷脂降解及脂质过氧化在内毒素所致生物膜损伤中具有重要意义。 展开更多
关键词 磷脂酶A2 脂质过氧化 内毒素 生物膜损伤
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未知KL基因cDNA片段的末端快速扩增
9
作者 刘北忠 蒋纪恺 +2 位作者 何於娟 张彦 刘小珊 《重庆医科大学学报》 CAS CSCD 2003年第1期14-16,28,共4页
目的:为研究白血病K562细胞中未知KL基因的结构与功能,对其cDNA片段进行全长克隆。方法:采用3种RACE策略,对未知KL基因的cDNA片段进行末端的快速扩增。结果:网上LabOnWeb的instant RACE与传统的3′-RACE使未知KL基因的cDNA片段向5′末端... 目的:为研究白血病K562细胞中未知KL基因的结构与功能,对其cDNA片段进行全长克隆。方法:采用3种RACE策略,对未知KL基因的cDNA片段进行末端的快速扩增。结果:网上LabOnWeb的instant RACE与传统的3′-RACE使未知KL基因的cDNA片段向5′末端与3′末端各自延伸了156bp与350bp。结论:通过末端快速扩增,表明白血病K562细胞中未知KL基因的全长cDNA大小约为1Kb,这为我们进行该基因的全长克隆,进而研究其结构与功能奠定了基础。 展开更多
关键词 KL基因 CDNA片段 白血病 克隆 K562细胞 苦参碱
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靶向CGI-100基因shRNA干扰载体的构建与鉴定
10
作者 汪永强 张彦 雷燕 《重庆医科大学学报》 CAS CSCD 2008年第12期1418-1422,共5页
目的:构建靶向CGI-100基因的RNAi表达载体并鉴定其抑制效率。方法:设计及化学合成3对靶向CGI-100基因的短发夹结构寡核苷酸,经退火成双链DNA片段,将其与经限制性内切酶BamHⅠ和HindⅢ双酶切的PGenesil-1质粒连接,构建表达shRNA的重组质... 目的:构建靶向CGI-100基因的RNAi表达载体并鉴定其抑制效率。方法:设计及化学合成3对靶向CGI-100基因的短发夹结构寡核苷酸,经退火成双链DNA片段,将其与经限制性内切酶BamHⅠ和HindⅢ双酶切的PGenesil-1质粒连接,构建表达shRNA的重组质粒,用脂质体2000转染到K562细胞中进行表达,经RT-PCR和斑点杂交检测转染前后CGI-100基因表达的变化。结果:经DNA测序证实3对靶向CGI-100基因的RNA干扰表达载体PGenesil-1-CGI-100构建成功,其中第1对PGenesil-1-CGI-100在mRNA水平抑制白血病K562细胞中CGI-100基因表达的效率最高,达54%。结论:成功构建针对CGI-100基因的RNA干扰的表达载体,并筛选出1对抑制效率较高的重组干扰载体,为进一步研究K562细胞中CGI-100基因的功能奠定基础。 展开更多
关键词 CGI-100基因 RNA干扰 SHRNA K562细胞
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核酶抑制神经母细胞瘤Bcl-2的表达及增强顺铂敏感性的实验研究
11
作者 程远 王世波 冯涛 《重庆医科大学学报》 CAS CSCD 2000年第2期123-124,127,共3页
目的 :研究抗Bcl- 2mRNA的锤头型核酶 (RibozymeRZ)基因抑制神经母细胞瘤 (SK -N -SH)生长以及增强化疗药物顺铂的敏感性。方法 :(1)应用电穿孔法 ,分别将整合有抗Bcl- 2mRNA核酶的缺陷性逆转录病毒载体 pDOR -RZ和空载体pDOR -neo导入S... 目的 :研究抗Bcl- 2mRNA的锤头型核酶 (RibozymeRZ)基因抑制神经母细胞瘤 (SK -N -SH)生长以及增强化疗药物顺铂的敏感性。方法 :(1)应用电穿孔法 ,分别将整合有抗Bcl- 2mRNA核酶的缺陷性逆转录病毒载体 pDOR -RZ和空载体pDOR -neo导入SK -N -SH细胞。 (2 )用免疫细胞染色法定性观察肿瘤细胞内Bcl- 2蛋白的表达 ;用间接免疫荧光染色法和流式细胞仪 (FCM)测定Bcl- 2蛋白含量。 (3)MTT法检测化疗药物顺铂敏感性。结果 :(1)转染RZ组Bcl- 2蛋白合成受到抑制 ,(2 )顺铂增敏试验表明顺铂对转RZ组杀伤作用增强。结论 :将抗Bcl- 2核酶基因转入神经母细胞内 ,(1)可明显抑制肿瘤细胞内Bcl- 2蛋白的合成 ,促进瘤细胞死亡 ;(2 ) 展开更多
关键词 核酶 BCL-2 基因治疗 神经母细胞瘤 顺铂
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