双歧啤酒生产工艺的实验室研究 被引量：6

1

作者 李代昆 张德纯 +1 位作者 穆小萍 邱建 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2007年第5期132-135,共4页

采用增湿法粉碎澳大利亚麦芽,麦皮破而不碎,麦粉较细,干法粉碎大米成细粉;选用双醪浸出糖化法进行麦汁制备、过滤、添加酒花和麦汁煮沸,麦汁呈黄色、澄清,可发酵糖和α-氨基氮的含量符合发酵要求;利用双歧杆菌(厌氧)和酿酒酵母(需氧)共... 采用增湿法粉碎澳大利亚麦芽,麦皮破而不碎,麦粉较细,干法粉碎大米成细粉;选用双醪浸出糖化法进行麦汁制备、过滤、添加酒花和麦汁煮沸,麦汁呈黄色、澄清,可发酵糖和α-氨基氮的含量符合发酵要求;利用双歧杆菌(厌氧)和酿酒酵母(需氧)共同发酵啤酒,消毒灭菌和低温离心后进行灌装;通过几项重要指标的检测,进行评判啤酒的质量和性能。啤酒呈淡黄色、透明,有明显的酒花香味,爽而不淡、柔和适口;各项检测指标都达到啤酒质量标准,尤其是总酸度和低聚还原糖的含量显著增高。 展开更多

关键词 功能性啤酒 生产工艺 双歧杆菌

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人参皂苷Rh2抑制肝癌HepG2细胞迁移的实验研究 被引量：23

2

作者 冯子强 左国伟 +7 位作者 石庆强 赵绿翠 罗念 游智梅 夏菁 李丹阳 李静 陈地龙 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2015年第1期61-65,共5页

目的：研究人参皂苷Rh2对肝癌Hep G2细胞迁移的影响及其机制。方法：取对数生长期Hep G2细胞,Rh2（10~160μmol/L）诱导,同时设空白对照组,用CCK-8检测Rh2对细胞增殖影响;Transwell检测Rh2对细胞的迁移的影响;荧光素报告基因筛选可能的... 目的：研究人参皂苷Rh2对肝癌Hep G2细胞迁移的影响及其机制。方法：取对数生长期Hep G2细胞,Rh2（10~160μmol/L）诱导,同时设空白对照组,用CCK-8检测Rh2对细胞增殖影响;Transwell检测Rh2对细胞的迁移的影响;荧光素报告基因筛选可能的信号通路;Western blot检测Hep G2细胞中P-ERK、ERK、P-P38、P-38、P-JUK、JUK、MMP3等蛋白的表达;定量PCR方法检测AP1、MMP3基因的表达;荧光显微镜分别观察AP1、MMP3蛋白在细胞内的表达及分布。结果：CCK-8检测结果显示Rh2对肝癌Hep G2细胞生长抑制呈剂量和时间依赖性;Transwell检测显示Rh2对肝癌Hep G2细胞迁移有明显的抑制作用;荧光素报告基因筛选出AP1转录因子;Western blot检测结果显示P-ERK、MMP3蛋白表达水平呈下降趋势,PJUK、P-P38蛋白表达水平明显升高,ERK、JUK、P38蛋白则无明显变化;定量PCR方法结果显示：AP1、MMP3的基因表达下降。荧光结果显示：AP1、MMP3均分布在胞质内,随药物浓度的增加其荧光表达量减弱。结论：人参皂苷Rh2可通过激活MAPK通路来抑制肝癌Hep G2细胞的迁移。 展开更多

关键词 HEP G2细胞 Rh2 迁移 MAPK通路 AP1 MMP3

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二聚体蝎型探针荧光定量PCR快速检测临床标本结核分枝杆菌DNA 被引量：2

3

作者 王虹 钟敏 +2 位作者 舒朝忠 陈淑惠 尹一兵 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第7期661-663,666,共4页

目的比较二聚体蝎型探针荧光定量PCR与抗酸染色、L-J培养法、结核分枝杆菌直接试验(MTD)的检出率、检测时间等,探讨二聚体蝎型探针荧光定量PCR检测临床标本中结核分枝杆菌DNA(TB-DNA)的实际应用价值。方法以建立的结核二聚体蝎型探针荧... 目的比较二聚体蝎型探针荧光定量PCR与抗酸染色、L-J培养法、结核分枝杆菌直接试验(MTD)的检出率、检测时间等,探讨二聚体蝎型探针荧光定量PCR检测临床标本中结核分枝杆菌DNA(TB-DNA)的实际应用价值。方法以建立的结核二聚体蝎型探针荧光定量PCR方法为基础,对43例结核确诊患者的标本及11例非肺结核患者的痰标本进行检测,并与抗酸染色、L-J培养法、结核分枝杆菌直接试验(MTD)进行比较。结果二聚体蝎型探针荧光定量PCR能快速准确的检测临床标本中的TB-DNA。其标准品浓度在102～106copies/μl时,方法能够保持良好的线性关系(相关系数为0.9994),阳性检出率(100%)显著高于抗酸染色法(16.28%)和培养法(37.21%)的检出率,与MTD试验的检出率(100%)一致。MTD试验检测时间约4～5h,而二聚体蝎型探针FQ-PCR检测约需80min即可得到检测结果,检测费用仅为MTD的1/4。结论二聚体蝎型探针荧光定量PCR用于临床标本结核分枝杆菌DNA的检测具有快速价廉、敏感特异的特点,该方法作为定量检测结核分枝杆菌的分子诊断新途径值得临床推广应用。 展开更多

关键词 结核分枝杆菌 荧光定量PCR 二聚体蝎型探针

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自身淬灭荧光技术定量检测临床分离的淋病奈瑟菌DNA 被引量：1

4

作者 王箭 罗进勇 +1 位作者 王虹 尹一兵 《中国感染控制杂志》 CAS 2007年第4期224-226,230,共4页

目的 探讨自身淬灭荧光定量聚合酶链反应（FQ-PCR）检测临床分离的淋病奈瑟菌DNA的临床应用价值。方法 以建立的淋病奈瑟菌自身淬灭FQ-PCR方法为基础，对59例疑为淋病奈瑟菌感染患者的标本进行检测，并与分离培养法进行分析比较。结果... 目的 探讨自身淬灭荧光定量聚合酶链反应（FQ-PCR）检测临床分离的淋病奈瑟菌DNA的临床应用价值。方法 以建立的淋病奈瑟菌自身淬灭FQ-PCR方法为基础，对59例疑为淋病奈瑟菌感染患者的标本进行检测，并与分离培养法进行分析比较。结果自身淬灭FQ-PCR标准品浓度为10^2～10^7拷贝／μ时，方法能够保持良好的线性关系，标准曲线为：Y=-0．273X＋10．781，相关系数为0．9895。自身淬灭FQ-PCR阳性检出率为64．41％，高于培养法52．54％（χ^2=5．14，P〈0．05）；两者特异性均为100％。结论 自身淬灭FQ-PCR用于临床分离的淋病奈瑟菌DNA检测，敏感性、特异性均高，对淋病的诊断有较高价值，实现了PCR扩增、荧光探针杂交及检测一体化，简便省时。 展开更多

关键词 淋病奈瑟菌 自身淬灭探针 荧光定量聚合酶链反应 实验室技术与方法

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阿奇霉素联合亚胺培南对肺炎克雷伯菌生物膜的抑制作用 被引量：14

5

作者 穆小萍 唐玲玲 +3 位作者 纪存委 黄艳芬 张德纯 黄瑞玉 《中国抗生素杂志》 CAS CSCD 北大核心 2015年第8期617-620,共4页

目的研究阿奇霉素(azithromycin,AZM)联合亚胺培南(imipenem,IPM)对肺炎克雷伯菌生物膜(biofi lm,BF)的抑制作用。方法采用改良平板法建立肺炎克雷伯菌BF模型,微量稀释法测定抗菌药物的最低抑菌浓度,银染法快速鉴定细菌BF,噻唑蓝(MTT)... 目的研究阿奇霉素(azithromycin,AZM)联合亚胺培南(imipenem,IPM)对肺炎克雷伯菌生物膜(biofi lm,BF)的抑制作用。方法采用改良平板法建立肺炎克雷伯菌BF模型,微量稀释法测定抗菌药物的最低抑菌浓度,银染法快速鉴定细菌BF,噻唑蓝(MTT)比色法测定BF中的活菌数,棋盘设计法测定阿奇霉素和亚胺培南对BF的协同抑制作用,用RT-PCR对联合用药前后luxS基因的表达进行相对定量分析,检测结果采用SPSS13.0软件进行统计处理。结果加入1/16、1/4MIC阿奇霉素可显著增加1/4、1/2及1MIC亚胺培南对肺炎克雷伯菌BF的抑菌活性;加入1/4、1/2及1MIC的亚胺培南也可显著增加1/16、1/4MIC阿奇霉素的抑菌活性;1MIC IPM与1/4、1/16MIC AZM联合应用;1/2MIC IPM与1/4MIC AZM联合应用可以下调lux S基因的表达。结论阿奇霉素与亚胺培南联合使用可下调肺炎克雷伯菌lux S基因的表达,从而增强其对BF的抑菌活性。 展开更多

关键词 肺炎克雷伯菌 生物膜 阿奇霉素 亚胺培南 LUXS基因 协同作用

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人参皂苷Rh2对人红白血病K562细胞HDAC1/2活性和周期蛋白的影响 被引量：9

6

作者 夏菁 陈地龙 +5 位作者 左国伟 魏强 游智梅 李丹阳 刘泽洪 李静 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2014年第10期1062-1066,共5页

目的 探讨人参皂苷单体Rh2[20（S）-ginsenoside Rh2,Rh2（S）]对人红白血病K562细胞增殖及对组蛋白去乙酰化酶1（HDAC1）、HDAC2活性和周期蛋白的影响。方法 以10-80μmol/L的Rh2（S）作用于体外培养的K562细胞,采用CCK-8法检测Rh2（S... 目的 探讨人参皂苷单体Rh2[20（S）-ginsenoside Rh2,Rh2（S）]对人红白血病K562细胞增殖及对组蛋白去乙酰化酶1（HDAC1）、HDAC2活性和周期蛋白的影响。方法 以10-80μmol/L的Rh2（S）作用于体外培养的K562细胞,采用CCK-8法检测Rh2（S）对K562细胞增殖活性的影响;流式细胞术（FCM）检测细胞周期、细胞凋亡的变化;化学比色法检测细胞中HDAC活性;Western blot法检测（10、20、40、60）μmol/L Rh2（S）诱导48 h后HDAC1、HDAC2、细胞周期蛋白D1（cyclin D1）、细胞周期蛋白依赖激酶4（CDK4）、p16INK4A和p21蛋白的表达。结果 CCK-8结果显示,Rh2（S）在20-80μmol/L浓度范围内能有效抑制K562细胞生长,并呈时间剂量依赖性;FCM结果显示,60μmol/L Rh2（S）将K562细胞周期阻滞在G0/G1期;（20、40、60）μmol/L Rh2（S）诱导K562早期凋亡,其凋亡率分别为（8.09±0.86）%、（9.44±0.53）%、（22.80±2.16）%,与空白对照组（2.63±0.14）%相比,差异有统计学意义（P〈0.05）;40~60μmol/L Rh2（S）能降低K562细胞中HDAC的活性;Western blot结果显示,Rh2（S）能够下调HDAC1/2和cyclin D1、CDK4,激活p16INK4A和p21的表达。结论 Rh2（S）可能是通过抑制HDAC1、HDAC2的活性,下调cyclin D1激活p16INK4A和p21的表达,从而抑制白血病细胞增殖,诱导周期阻滞和细胞凋亡。 展开更多

关键词 人参皂苷Rh2(S) K562 细胞周期 组蛋白去乙酰化酶

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沉默HPV16 E6基因对人宫颈癌裸鼠移植瘤的抑制作用 被引量：9

7

作者 成海恩 张溢 +5 位作者 张翠莉 潘巍巍 石华 易发平 郭风劲 宋方洲 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第6期486-489,共4页

目的采用RNA干扰抑制人宫颈癌CaSki细胞裸鼠移植瘤中人乳头瘤病毒(human papillomavirus-16,HPV16)E6基因的表达,观察对裸鼠移植瘤的抑制作用。方法将HPV16 E6特异性的小干扰RNA(small interference RNA,siRNA)真核表达载体转染到人宫... 目的采用RNA干扰抑制人宫颈癌CaSki细胞裸鼠移植瘤中人乳头瘤病毒(human papillomavirus-16,HPV16)E6基因的表达,观察对裸鼠移植瘤的抑制作用。方法将HPV16 E6特异性的小干扰RNA(small interference RNA,siRNA)真核表达载体转染到人宫颈癌细胞株CaSki细胞中,经G418筛选,RT-PCR检测E6基因的表达;将细胞接种到BALB/c裸鼠背部皮下,同时将该质粒注射到人宫颈癌CaSki细胞移植瘤的裸鼠中,观察肿瘤出现时间及体积变化;观察肿瘤组织的病理改变。结果成功筛选到持续表达E6 siRNA的CaSki细胞,经RT-PCR检测该细胞中HPV16 E6基因表达降低;裸鼠成瘤实验结果显示,处理后的CaSki细胞成瘤能力明显降低,抑瘤率为71.4%;注射质粒进行基因治疗后,裸鼠肿瘤生长受到抑制,肿瘤的体积与质量明显低于CaSki细胞组,差异具有显著性(P<0.05)。病理检查结果显示,经pGensil-CH2处理的肿瘤生长不佳,细胞分裂像少见,组织内有较多坏死区域。结论沉默CaSki细胞中HPV16 E6基因的表达能明显降低宫癌细胞的成瘤作用。 展开更多

关键词 宫颈肿瘤 RNA干扰 HPV16 E6基因

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原代绒毛滋养层细胞的培养及转染研究 被引量：10

8

作者 施琼 朱旦 +5 位作者 王箭 翁亚光 王应雄 蔡燕 蒋洪彦 徐远久 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第12期1203-1206,共4页

目的探索绒毛组织滋养层细胞原代培养、纯化的有效方法及最佳转染方法。方法分离妊娠7周内的人工流产胚胎的绒毛组织进行滋养层细胞的培养和纯化。用细胞免疫化学方法对培养细胞进行鉴定;用MTT实验方法绘制滋养层细胞的生长曲线;用细胞... 目的探索绒毛组织滋养层细胞原代培养、纯化的有效方法及最佳转染方法。方法分离妊娠7周内的人工流产胚胎的绒毛组织进行滋养层细胞的培养和纯化。用细胞免疫化学方法对培养细胞进行鉴定;用MTT实验方法绘制滋养层细胞的生长曲线;用细胞贴壁率找到最适pH;用细胞存活分数评价转染的最佳脂质体用量。结果成功寻找到滋养层细胞原代培养和纯化的有效方法;细胞消化传代后的12～48h滋养层细胞处于对数生长期,pH6.8～7.0为培养液最适pH范围;并找到质粒转染滋养层细胞的最佳脂质体用量。结论成功培养和纯化滋养层细胞,并找到滋养层细胞的最佳转染方法。 展开更多

关键词 细胞培养 滋养层细胞 细胞转染

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甲磺酸甾醇类药物诱导HL60细胞分化及其蛋白质组表达差异的研究 被引量：7

9

作者 王伟佳 唐薇 +1 位作者 毛小琴 邱宗荫 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第12期1634-1639,共6页

目的研究新的甲磺酸甾醇类药物(NSC67657)对HL60细胞的诱导分化作用,并对HL60细胞在药物诱导分化前后的蛋白质组表达差异进行分析。方法首先在基因和蛋白水平验证NSC67657对CEBPα的诱导作用;然后采用MTT法探索在不同药物浓度作用下HL6... 目的研究新的甲磺酸甾醇类药物(NSC67657)对HL60细胞的诱导分化作用,并对HL60细胞在药物诱导分化前后的蛋白质组表达差异进行分析。方法首先在基因和蛋白水平验证NSC67657对CEBPα的诱导作用;然后采用MTT法探索在不同药物浓度作用下HL60细胞的增殖水平;采用细胞化学染色了解HL60细胞药物作用后的大概分化方向;然后采用流式细胞仪检测细胞在不同时间、不同药物浓度作用下细胞表面分化抗原的表达,筛选最佳药物诱导浓度和时间;再用流式细胞技术和电镜观察,对以最佳的药物浓度和诱导时间作用下HL60细胞进行细胞周期和超微结构观察,以及预测在该药物作用浓度和时间下是否有凋亡发生;最后应用改良双向电泳技术对药物作用前后HL60细胞蛋白质组进行分离,并对差异蛋白点进行质谱分析。结果NSC67657可以促进CEBPα基因和蛋白的表达增高。通过比较可见药物处理后的HL60细胞增殖受抑,细胞化学染色的结果表明NSC67657处理后的HL60细胞向单核系分化,并以药物浓度为10μmol·L-1、连续诱导5d为最佳。处理后的细胞G0～G1期数目增多,流式细胞检测和电镜观察都显示无凋亡现象发生。经过双向电泳分离药物处理前后的HL60细胞全蛋白质组,发现有14个蛋白点仅在分化细胞检测到,20个蛋白点仅在未分化细胞检测到。结论NSC67657可以促进CEBPα基因和蛋白的表达升高,并可诱导HL60细胞向单核系分化,分离分析处理前后细胞的蛋白表达差异,为后续关键蛋白的筛选及其功能研究奠定了基础。 展开更多

关键词 甾醇类药物 HL60细胞 分化 双向电泳

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苦参碱对K562细胞Cgi-100基因表达和细胞增殖的影响 被引量：8

10

作者 黄凤霞 张彦 王伟佳 《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 2008年第3期525-530,共6页

本研究了解功能未知的cgi-100基因在苦参碱作用人白血病K562细胞中的表达情况,并探讨其对K562细胞生长的影响。应用RT-PCR检测苦参碱作用前后K562细胞中cgi-100基因的表达情况;构建pIRES2-EGFP/cgi-100真核表达质粒,用脂质体法转染至K56... 本研究了解功能未知的cgi-100基因在苦参碱作用人白血病K562细胞中的表达情况,并探讨其对K562细胞生长的影响。应用RT-PCR检测苦参碱作用前后K562细胞中cgi-100基因的表达情况;构建pIRES2-EGFP/cgi-100真核表达质粒,用脂质体法转染至K562细胞中;RT-PCR检测在重组细胞中目的基因cgi-100的表达状况,并采用台盼蓝染色法观察细胞生长趋势,电镜观察细胞形态学改变,流式细胞术检测细胞周期的变化,观察cgi-100基因过表达对K562细胞增殖的影响。结果表明,在苦参碱作用K562细胞后cgi-100基因表达下调;重组K562细胞中cgi-100基因过表达,且常染色质增加,异染色质减少,细胞增殖旺盛,S期细胞增多,增殖速度高于对照组。结论:不同浓度不同作用时间下苦参碱能使K562细胞中cgi-100基因表达下降;cgi-100基因过表达能使K562细胞增殖加速、细胞幼稚程度增加。 展开更多

关键词 苦参碱 白血病 K562细胞 cgi-100基因

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人参总皂苷对放射所致骨髓造血细胞衰老的保护作用 被引量：4

11

作者 龙轩 官涛 +4 位作者 李春莉 左国伟 姜蓉 闫玲玲 王建伟 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第22期2278-2282,共5页

目的探讨人参总皂苷(total saponins of panax ginseng,TSPG)抗放射(6.5 Gy)所致骨髓造血细胞损伤衰老的作用。方法 40只雄性C57BL/6小鼠分为4组(每组10只):对照组、放射(irradiation,IR)组、IR+T50(TSPG 50 mg/kg)组、IR+T200(TSPG 200... 目的探讨人参总皂苷(total saponins of panax ginseng,TSPG)抗放射(6.5 Gy)所致骨髓造血细胞损伤衰老的作用。方法 40只雄性C57BL/6小鼠分为4组(每组10只):对照组、放射(irradiation,IR)组、IR+T50(TSPG 50 mg/kg)组、IR+T200(TSPG 200 mg/kg)组。先给药3 d,然后照射,照射后继续给药7 d,检测外周血的变化情况,计数各组骨髓单个核细胞数、骨髓造血细胞集落生成单位(CFU)的数量,观察形态变化;流式细胞术检测周期变化;回收CFU细胞进行β-半乳糖苷酶衰老(SA-β-gal)染色和细胞免疫荧光分析p16Ink4a蛋白的表达水平。结果与IR组比较,给药处理后,IR+T200组的白细胞数增加至(2.19±0.87)(P<0.05),但各组之间红细胞与血小板均无明显变化(P>0.05);IR+T200组的单个核细胞数及集落个数均明显增加(P<0.05);骨髓造血细胞周期G1期细胞比例随药物浓度增加有减少的趋势;SA-β-gal染色和p16Ink4a细胞免疫荧光染色均显示,IR+T200组的CFU中细胞阳性率明显降低(P<0.05)。结论合适剂量的TSPG(200 mg/kg)对放射引起的造血细胞损伤衰老有保护作用。 展开更多

关键词 放射 造血细胞损伤与衰老 人参总皂苷

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K14和CMV启动子驱动裸鼠体内HPV16 E6/E7基因表达的差异 被引量：2

12

作者 潘巍巍 徐营 +5 位作者 曹利仙 沈忠飞 李平 郭连军 邬维娅 宋方洲 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第7期620-626,共7页

人乳头瘤病毒(human papillomavirus,HPV)是一种无包膜的环状闭合双链DNA病毒,具有严格的嗜人组织的特性.为探讨不同启动子驱动HPVE6/E7癌蛋白在裸鼠体内不同组织的表达效率,构建了带有角蛋白(K14)启动子和带有巨细胞病毒(CMV)启动子的E... 人乳头瘤病毒(human papillomavirus,HPV)是一种无包膜的环状闭合双链DNA病毒,具有严格的嗜人组织的特性.为探讨不同启动子驱动HPVE6/E7癌蛋白在裸鼠体内不同组织的表达效率,构建了带有角蛋白(K14)启动子和带有巨细胞病毒(CMV)启动子的E6/E7腺病毒载体(pAd-K14-E6/E7和pAd-CMV-E6/E7),pAd-K14-E6/E7和pAd-CMV-E6/E7、以及作为对照的重组腺病毒空载体pAdtrack-K14和pAd-CMV同源重组后,分别在293细胞中包装,收集重组病毒Ad-K14-E6/E7、Ad-CMV-E6/E7、Adtrack-K14和Ad-CMV,通过尾缘静脉注射到随机分组的裸鼠体内,并每d向裸鼠腹腔注射0.05 mg雌激素.采用RT-PCR和Western免疫印迹检测不同实验组E6/E7 mRNA和蛋白表达水平,免疫组化法检测P53和Bcl-2蛋白表达.结果显示,注射病毒Ad-K14-E6/E7(实验组1)裸鼠子宫体中E6/E7 mRNA、E6蛋白质、P53和Bcl-2蛋白高表达,而其它组织中低表达;注射病毒Ad-CMV-E6/E7(实验组2)裸鼠各组织E6/E7 mRNA、E6蛋白质、P53和Bcl-2蛋白均低表达.研究表明,在裸鼠体内角蛋白K14启动子可以调控E6/E7在子宫体中表达,CMV启动子未能诱导E6/E7在子宫体中表达. 展开更多

关键词 人乳头瘤病毒 腺病毒 E6/E7基因 裸鼠 CMV启动子 角蛋白K14启动子

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人hIL-24Δ103重组腺病毒感染诱导A549细胞凋亡 被引量：2

13

作者 丁嵩涛 卜友泉 +4 位作者 魏丽丽 张琴 罗耀玲 易发平 宋方洲 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第11期1047-1052,共6页

白细胞介素24(interleukin24,IL-24)是近年来新发现的1个IL-10家族细胞因子,具有明显的抗肿瘤活性.为了研究开发高活性、低分子量的IL-24,并探讨其用于肿瘤靶向治疗的可能性,本研究在前期基础上,进一步构建并制备了缺失N端103个氨基酸... 白细胞介素24(interleukin24,IL-24)是近年来新发现的1个IL-10家族细胞因子,具有明显的抗肿瘤活性.为了研究开发高活性、低分子量的IL-24,并探讨其用于肿瘤靶向治疗的可能性,本研究在前期基础上,进一步构建并制备了缺失N端103个氨基酸残基的IL-24(hIL-24Δ103)重组腺病毒,并观察了其对A549细胞生长增殖和凋亡的影响.首先,采用PCR技术扩增IL-24第104位至第206位氨基酸区域的编码序列,制备hIL-24Δ103重组腺病毒.用Ad-hIL-24Δ103重组腺病毒感染肺癌A549细胞.MTT分析结果表明,Ad-hIL-24Δ103感染显著抑制了A549细胞的生长.Hoechst 33258染色和流式细胞仪分析结果表明,Ad-hIL-24Δ103感染导致细胞凋亡.Western印迹分析结果表明,Ad-hIL-24Δ103感染导致了PKR和eIF-2α蛋白的表达上调与磷酸化激活,提示PKR和eIF-2α参与了hIL-24Δ103导致的细胞生长抑制和细胞凋亡过程的调节. 展开更多

关键词 人白介素24 腺病毒 细胞增殖 细胞凋亡

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双歧啤酒抗疲劳作用研究 被引量：3

14

作者 邱建 张德纯 穆小萍 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2007年第8期451-453,共3页

目的:研究双歧啤酒对小鼠的抗疲劳效果。方法:小鼠随机分成空白对照组、实验对照组和双歧啤酒高、中、低三个剂量组,剂量分别为100、50、25ml/kgbw,空白对照组给予蒸馏水,实验对照组给予普通啤酒,共30d。测定负重游泳时间、肝糖原(LG)... 目的:研究双歧啤酒对小鼠的抗疲劳效果。方法:小鼠随机分成空白对照组、实验对照组和双歧啤酒高、中、低三个剂量组,剂量分别为100、50、25ml/kgbw,空白对照组给予蒸馏水,实验对照组给予普通啤酒,共30d。测定负重游泳时间、肝糖原(LG)、尿素氮(BUN)、血乳酸(LAC)指标。结果:高、中剂量组双歧啤酒能显著提高小鼠运动耐力以及肝糖原储备量,降低运动后血乳酸和尿素氮含量。结论:双歧啤酒具有良好的抗运动疲劳作用。 展开更多

关键词 双歧杆菌 双歧啤酒 抗疲劳 小鼠

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双歧啤酒对小鼠免疫功能的影响 被引量：2

15

作者 穆小萍 张德纯 +1 位作者 邱建 蒲荣 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2008年第1期306-308,共3页

目的:研究双歧啤酒对小鼠免疫功能的影响。方法:将小鼠随机分成纯净水对照组、市售啤酒对照组和双歧啤酒低、中、高三个剂量组,剂量分别为25、50、100ml/kgbw,饮水法喂饲小鼠,测定小鼠胸腺和脾脏重量、腹腔巨噬细胞吞噬功能、血清溶血... 目的:研究双歧啤酒对小鼠免疫功能的影响。方法:将小鼠随机分成纯净水对照组、市售啤酒对照组和双歧啤酒低、中、高三个剂量组,剂量分别为25、50、100ml/kgbw,饮水法喂饲小鼠,测定小鼠胸腺和脾脏重量、腹腔巨噬细胞吞噬功能、血清溶血素抗体水平、皮肤迟发型超敏反应(DTH)程度。结果:与对照组比较,双歧啤酒高、中剂量组能显著增强巨噬细胞吞噬功能,增加血清溶血素抗体水平和DTH程度。结论:双歧啤酒能提高机体的免疫功能。 展开更多

关键词 双歧啤酒 免疫功能 小鼠

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质谱技术研究进展及其在药物分析中的应用 被引量：2

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作者 钟梁 涂植光 刘北忠 《重庆医科大学学报》 CAS CSCD 2006年第z1期110-113,共4页

　　自1906年J.J.Thomson发明质谱以来,经过了100多年的发展.特别是近年来,电喷雾电离(ESI)、基质辅助激光解吸电离(MALDI)、表面增强激光解吸电离(SELDI)、快原子轰击(FAB)、离子喷雾电离(ISI)、大气压电离(API)等软电离技术以及飞行... 　　自1906年J.J.Thomson发明质谱以来,经过了100多年的发展.特别是近年来,电喷雾电离(ESI)、基质辅助激光解吸电离(MALDI)、表面增强激光解吸电离(SELDI)、快原子轰击(FAB)、离子喷雾电离(ISI)、大气压电离(API)等软电离技术以及飞行时间质谱(TOF-MS)、傅立叶变换离子回旋共振质谱(FT-ICR-MS)等新的质量分析方法的发展,质谱技术已广泛应用于生物学、生物化学、分子生物学等生命科学的各领域,如蛋白质和核酸的质量和序列测定、蛋白质高级结构的研究、寡糖和多糖结构分析、各种超分子组装体的组成、结构、功能及作用机理;串联质谱、反应质谱、色-质联用等新技术为药物-受体相互作用、药代动力学研究等提供了有力的工具;而且质谱技术具有质量分辨、信息量大、样品用量少、灵敏、快速等特点,在测定有机化合物精确分子量、解析有机分子和药物的结构、研究有机反应的机理等方面亦发挥着十分重要的作用.…… 展开更多

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人HL-60细胞GR-αLBD诱饵表达载体的构建和鉴定

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作者 钟梁 郝坡 +5 位作者 刘北忠 王东生 刘畅 金丹婷 王翀 王春光 《重庆医科大学学报》 CAS CSCD 2008年第4期394-398,共5页

目的:构建糖皮质激素(Glucocorticoid,GC)受体α配体结合域(GRα-LBD)的诱饵表达载体,为小分子配体酵母三杂交系统的建立奠定基础。方法:RT-PCR扩增HL-60细胞的GRα-LBD,克隆入诱饵载体pGBKT7中,测序正确后,再把构建好的诱饵载体pGBKT7... 目的:构建糖皮质激素(Glucocorticoid,GC)受体α配体结合域(GRα-LBD)的诱饵表达载体,为小分子配体酵母三杂交系统的建立奠定基础。方法:RT-PCR扩增HL-60细胞的GRα-LBD,克隆入诱饵载体pGBKT7中,测序正确后,再把构建好的诱饵载体pGBKT7-GRα-LBD转化到酵母AH109细胞中,提取酵母蛋白,并用Western blot分析诱饵蛋白的表达情况。同时检测诱饵蛋白的毒性和自激活作用。结果:成功扩增了GRα-LBD,并成功亚克隆到pGBKT7中,测序结果正确。诱饵载体成功转化到酵母AH109细胞中,无毒性和自激活作用,Western blot分析也证实了酵母细胞高表达诱饵蛋白。结论:成功构建了GRα-LBD酵母诱饵表达载体,为建立小分子配体酵母三杂交系统奠定了基础。 展开更多

关键词 HL-60 GRα—LBD 诱饵载体 诱饵蛋白

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酵母双杂交诱饵载体pGBKT7-PML-V的构建、表达及鉴定

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作者 钟梁 王翀 +5 位作者 刘北忠 王东生 郝坡 刘畅 金丹婷 王春光 《重庆医科大学学报》 CAS CSCD 2008年第3期257-260,共4页

目的:构建早幼粒细胞白血病基因变异蛋白(Promyelocytic leukemia,PML-V)的诱饵表达载体,为应用酵母双杂交系统(Yeast two-hybrid system)筛选与PML-V相互作用的蛋白建立实验基础。方法:PCR扩增PML-V,克隆入诱饵载体pGBKT7中,经测序鉴定... 目的:构建早幼粒细胞白血病基因变异蛋白(Promyelocytic leukemia,PML-V)的诱饵表达载体,为应用酵母双杂交系统(Yeast two-hybrid system)筛选与PML-V相互作用的蛋白建立实验基础。方法:PCR扩增PML-V,克隆入诱饵载体pGBKT7中,经测序鉴定后,将构建好的诱饵载体pGBKT7-PML-V转化到酵母细胞AH109中,并利用蛋白印迹法(Western Blotting)分析诱饵蛋白的表达情况。同时检测诱饵蛋白有无毒性、渗漏和自激活作用。结果:成功扩增了PML-V基因片断,并克隆入pGBKT7中,测序结果正确。诱饵载体成功转化到酵母细胞AH109中,诱饵蛋白无毒性、渗漏和自激活作用,Western Blotting分析证实酵母细胞表达诱饵蛋白。结论:成功构建了PML-V结合域的酵母诱饵表达载体,为进一步运用酵母双杂交技术筛选与之相互作用的蛋白奠定了基础。 展开更多

关键词 PML变异蛋白 质粒构建 诱饵蛋白

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核酸纯化对蝎型探针定量PCR准确检测结核分枝杆菌DNA的必要性研究

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作者 王虹 王箭 +2 位作者 阳强 朱旦 尹一兵 《中国感染控制杂志》 CAS 2007年第1期9-11,15,共4页

目的探讨经煮沸、Chelex 100树脂处理、核酸纯化三种方法平行处理的标本在进行结核分枝杆菌蝎型探针荧光定量聚合酶链反应（PCR）检测中的有效性，以得到标本的最佳处理效果。方法收集42例结核确诊患者的多种标本和14例非肺结核患者的... 目的探讨经煮沸、Chelex 100树脂处理、核酸纯化三种方法平行处理的标本在进行结核分枝杆菌蝎型探针荧光定量聚合酶链反应（PCR）检测中的有效性，以得到标本的最佳处理效果。方法收集42例结核确诊患者的多种标本和14例非肺结核患者的痰标本，对其分别用上述3种方法平行处理后，采用蝎型探针荧光定量PCR法进行检测，并分析其结果。结果核酸纯化法处理的标本阳性检出率为100％，明显高于煮沸法57．14％和Chelex 100树脂法52.38％（分别为P=0．0103，P=0．0233）；尤其是外观呈血性和菌阴性的标本，采用核酸纯化法处理标本后检测所得结核DNA量较其他方法处理所得量高约1～2个数量级。结论标本的处理对于结核分枝杆菌蝎型探针荧光定量PCR检测十分重要，煮沸（裂解）法和Chelex 100树脂法不适合用以处理临床标本，而应使用核酸纯化法。 展开更多

关键词 聚合酶链反应 结核 诊断 实验室技术与方法

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RNA干扰MRP2表达逆转结肠癌细胞对长春新碱的耐药性 被引量：3

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作者 杨毅 姜习新 +1 位作者 王继见 周洪伟 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第12期1179-1182,共4页

目的构建MRP2基因的真核表达载体pGenSil-1-MRP2-siRNA,并观察其转染人结肠癌耐长春新碱细胞株HCT-8/V前后MRP2基因和ABCC2蛋白表达变化以及对化疗药物敏感性变化。方法设计MRP2特异性siRNA的序列,克隆至pGenSil-1质粒中,测序鉴定后,用... 目的构建MRP2基因的真核表达载体pGenSil-1-MRP2-siRNA,并观察其转染人结肠癌耐长春新碱细胞株HCT-8/V前后MRP2基因和ABCC2蛋白表达变化以及对化疗药物敏感性变化。方法设计MRP2特异性siRNA的序列,克隆至pGenSil-1质粒中,测序鉴定后,用脂质体将重组质粒转染至HCT-8/V细胞中,用定量RT-PCR和Western blot检测MRP2的表达,MTT实验测定pGenSil-1-MRP2-siRNA和长春新碱对HCT-8/V细胞增殖抑制作用。结果在结肠癌耐药细胞HCT-8/V中,RNAi明显抑制了MRP2 mRNA及蛋白的表达,在相同浓度化疗药物的作用下,RNA干扰组细胞凋亡比例显著高于对照组(P<0.01),表明细胞耐药性显著下降,对药物敏感性显著增高。结论成功构建了MRP2的siR-NA真核表达载体,并且对结肠癌耐药细胞MRP2的表达有明显抑制作用,取得良好的逆转耐药效果。 展开更多

关键词 多药耐药 MRP2 RNA干扰 质粒

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