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CENP－I表达下调对HEK293细胞生长及染色体分离的影响
被引量：
1
1
作者
袁泰先
蔡燕
+5 位作者
彭乙华
翁亚光
施琼
刘子杰
刘斌
李素彦
《第三军医大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2009年第16期1569-1572,共4页
目的构建CENP-I特异性RNA干扰真核表达载体,体外观察抑制CENP-I基因表达对HEK293细胞生长、细胞周期和染色体数目异常率的影响。方法构建CENP-IsiRNA真核表达载体,脂质体法将pGenesil-1空载体和pGene-sil-1/CENP-I-siRNA-1、pGenesil-1/...
目的构建CENP-I特异性RNA干扰真核表达载体,体外观察抑制CENP-I基因表达对HEK293细胞生长、细胞周期和染色体数目异常率的影响。方法构建CENP-IsiRNA真核表达载体,脂质体法将pGenesil-1空载体和pGene-sil-1/CENP-I-siRNA-1、pGenesil-1/CENP-I-siRNA-2、pGenesil-1/CENP-I-siRNA-3真核表达载体分别导入人胚肾HEK293细胞。转染后24、48、72h收集细胞用Western blot和FQ-PCR检测HEK293细胞内CENP-I蛋白及mRNA水平的表达情况,以确定干扰效果及最佳干扰时间。MTT法检测各实验组细胞生长情况,流式细胞术检测各组细胞的细胞周期分布,Giemsa染色法计数细胞分裂指数,常规法制备染色体标本。结果成功构建CENP-I siRNA真核表达载体,筛选出具有干扰效果的质粒载体即pGenesil-1/CENP-I-siRNA-3,转染人胚肾HEK293细胞72h后可使CENP-I蛋白及mRNA表达显著下凋。CENP-I表达降低的HEK293细胞生长速度明显减慢(P<0.05),G2/M期细胞增加,分裂期细胞比例增大。结论RNA干扰有效地特异性抑制着丝粒特异性蛋白质CENP-I的表达。CENP-I的抑制可使人胚肾HEK293细胞生长减慢,增殖能力减弱,使细胞分裂期延长。
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关键词
CENP—I基因
RNA干扰
细胞分裂指数
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题名
CENP－I表达下调对HEK293细胞生长及染色体分离的影响
被引量：
1
1
作者
袁泰先
蔡燕
彭乙华
翁亚光
施琼
刘子杰
刘斌
李素彦
机构
重庆医科大学临床检验诊断学省部共建教育部实验室、重庆市市级重点实验室
川北医学院附属医院急诊科
出处
《第三军医大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2009年第16期1569-1572,共4页
基金
国家自然科学基金(30371485)
教育部博士培养基金(20060631012)
重庆市重点项目[渝科发计字(2004)47号]~~
文摘
目的构建CENP-I特异性RNA干扰真核表达载体,体外观察抑制CENP-I基因表达对HEK293细胞生长、细胞周期和染色体数目异常率的影响。方法构建CENP-IsiRNA真核表达载体,脂质体法将pGenesil-1空载体和pGene-sil-1/CENP-I-siRNA-1、pGenesil-1/CENP-I-siRNA-2、pGenesil-1/CENP-I-siRNA-3真核表达载体分别导入人胚肾HEK293细胞。转染后24、48、72h收集细胞用Western blot和FQ-PCR检测HEK293细胞内CENP-I蛋白及mRNA水平的表达情况,以确定干扰效果及最佳干扰时间。MTT法检测各实验组细胞生长情况,流式细胞术检测各组细胞的细胞周期分布,Giemsa染色法计数细胞分裂指数,常规法制备染色体标本。结果成功构建CENP-I siRNA真核表达载体,筛选出具有干扰效果的质粒载体即pGenesil-1/CENP-I-siRNA-3,转染人胚肾HEK293细胞72h后可使CENP-I蛋白及mRNA表达显著下凋。CENP-I表达降低的HEK293细胞生长速度明显减慢(P<0.05),G2/M期细胞增加,分裂期细胞比例增大。结论RNA干扰有效地特异性抑制着丝粒特异性蛋白质CENP-I的表达。CENP-I的抑制可使人胚肾HEK293细胞生长减慢,增殖能力减弱,使细胞分裂期延长。
关键词
CENP—I基因
RNA干扰
细胞分裂指数
Keywords
centromere protein-I
RNA interference
cell mitotic index
分类号
R322.61 [医药卫生—人体解剖和组织胚胎学]
R329.25 [医药卫生—人体解剖和组织胚胎学]
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题名
作者
出处
发文年
被引量
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1
CENP－I表达下调对HEK293细胞生长及染色体分离的影响
袁泰先
蔡燕
彭乙华
翁亚光
施琼
刘子杰
刘斌
李素彦
《第三军医大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2009
1
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