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静态化学发光淬灭分析法测定血清硒 被引量:3
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作者 易钢 颜玉蓉 +1 位作者 钟梁 涂植光 《重庆医科大学学报》 CAS CSCD 2006年第1期119-120,128,共3页
目的:探讨硒对鲁米诺(Luminol)-过氧化氢-高锰酸钾发光体系的阻化作用并实现血清硒的化学发光测定。方法:采用GD-1型液相化学发光仪测定鲁米诺-过氧化氢-高锰酸钾反应体系的化学发光强度,建立化学发光强度与溶液中硒浓度的标准曲线,从... 目的:探讨硒对鲁米诺(Luminol)-过氧化氢-高锰酸钾发光体系的阻化作用并实现血清硒的化学发光测定。方法:采用GD-1型液相化学发光仪测定鲁米诺-过氧化氢-高锰酸钾反应体系的化学发光强度,建立化学发光强度与溶液中硒浓度的标准曲线,从而实现血清硒的静态化学发光淬灭分析测定。结果:本方法的检出限为6.5×10-4μg/ml,线性范围为1.5×10-3~6.5×10-1μg/ml;平均回收率为94.21%,变异系数为2.97%。结论:本方法是一种简便、准确的血清硒检测方法,对Mg2+、Cu2+等多种离子的干扰实验表明方法具有较好的选择性。 展开更多
关键词 鲁米诺 化学发光
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Wnt3a协同BMP9调控间充质干细胞成骨分化及机制研究 被引量:7
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作者 张晓 徐道晶 +2 位作者 林良波 梁熙 黄伟 《重庆医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第7期565-569,共5页
目的:探讨经典Wnt信号通路与骨形态发生蛋白9(Bone morphogenetic protein 9,BMP9)诱导间充质干细胞(Mes-enchymal stem cells,MSCs)成骨的相互影响及分子机制。方法:以小鼠骨髓来源MSCs C3H10T1/2为目的细胞,用Wnt3a上调经典Wnt信号通... 目的:探讨经典Wnt信号通路与骨形态发生蛋白9(Bone morphogenetic protein 9,BMP9)诱导间充质干细胞(Mes-enchymal stem cells,MSCs)成骨的相互影响及分子机制。方法:以小鼠骨髓来源MSCs C3H10T1/2为目的细胞,用Wnt3a上调经典Wnt信号通路,联合BMP9作用于细胞,通过碱性磷酸酶(Alkaline phosphatase,ALP)活性测定、钙盐沉积实验、real time PCR、免疫细胞化学染色等方法观测BMP9与经典Wnt信号通路联合后对MSCs成骨分化的影响。结果:Wnt3a明显促进了BMP9诱导的ALP活性的增加[F=264.962,P=0.000;t(BMP9+Wnt3a)-BMP9=7.19,P=0.000;t(BMP9+Wnt3a)-Wnt3a=16.36,P=0.000],同时也明显增加了成骨标志物骨钙蛋白(Osteocalcin,OC)[F=3 920.102,P=0.000;t(BMP9+Wnt3a)-BMP9=39.10,P=0.000;t(BMP9+Wnt3a)-Wnt3a=62.56,P=0.000]和骨桥蛋白(Osteopontin,OPN)[F=1 935.824,P=0.000;t(BMP9+Wnt3a)-BMP9=40.88,P=0.000;t(BMP9+Wnt3a)-Wnt3a=56.42,P=0.000]的表达以及Runx2的mR-NA的表达[F=3 635.980,P=0.000;t(BMP9+Wnt3a)-BMP9=79.37,P=0.000;t(BMP9+Wnt3a)-Wnt3a=86.96,P=0.000],并且还促进了钙盐沉积。结论:Wnt3a与BMP9相互协同诱导MSCs的骨向分化,其中成骨转录因子Runx2可能作为二者的交汇点起了重要作用。 展开更多
关键词 骨形态发生蛋白9 WNT3A 间充质干细胞 骨向分化
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胚胎细胞MAD2基因表达对染色体分离的影响 被引量:1
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作者 施琼 翁亚光 +2 位作者 蔡燕 刘青松 刘子杰 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第15期1544-1547,共4页
目的探讨MAD2基因表达对染色体分离的影响。方法用定量RT-PCR比较RNA干扰前后的胚胎细胞内源性基因MAD2 mRNA表达水平,同时对染色体数目异常率进行比较分析。结果干扰后MAD2基因mRNA拷贝数/GAPDH基因mRNA拷贝数的均值为干扰前的20%,染... 目的探讨MAD2基因表达对染色体分离的影响。方法用定量RT-PCR比较RNA干扰前后的胚胎细胞内源性基因MAD2 mRNA表达水平,同时对染色体数目异常率进行比较分析。结果干扰后MAD2基因mRNA拷贝数/GAPDH基因mRNA拷贝数的均值为干扰前的20%,染色体数目异常率均值由干扰前的4.702%上升到28.498%。经统计学分析,RNA干扰后MAD2基因mRNA水平显著下降,染色体数目异常率显著增高。结论MAD2基因表达的降低会导致染色体分离的异常,本研究为染色体分离相关蛋白功能研究建立了新的研究手段和实验评价体系。 展开更多
关键词 MAD2基因 RNA干扰 定量RT—PCR
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微小RNA对胚胎细胞BUB1基因的表达抑制 被引量:1
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作者 施琼 翁亚光 +2 位作者 徐远久 蔡燕 蒋洪彦 《重庆医科大学学报》 CAS CSCD 2007年第1期44-47,51,共5页
目的:探讨微小RNA对胚胎细胞BUB1基因表达的调控。方法:用定量real-timePCR比较microRNA转染前后的胚胎细胞内源性基因BUB1mRNA表达水平,同时用westernblot比较转染前后Bub1蛋白的表达水平。结果:对照组的BUB1基因mRNA拷贝数/GAPAHmRNA... 目的:探讨微小RNA对胚胎细胞BUB1基因表达的调控。方法:用定量real-timePCR比较microRNA转染前后的胚胎细胞内源性基因BUB1mRNA表达水平,同时用westernblot比较转染前后Bub1蛋白的表达水平。结果:对照组的BUB1基因mRNA拷贝数/GAPAHmRNA拷贝数为0.1960±0.0688,而转染microRNA重组质粒后,实验组的mRNA比值分别为0.1968±0.0689和0.1962±0.0670,经统计分析,两实验组细胞的内源性BUB1基因mRNA水平与对照组无显著性差异;而蛋白水平在转染后均有明显降低。结论:microRNA主要在翻译水平调节哺乳动物细胞内基因的表达,为研究基因表达的调控机制奠定了良好的基础。 展开更多
关键词 微小RNA BUB1基因 定量RT-PCR
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酵母双杂交系统筛选Mps1相互作用蛋白 被引量:1
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作者 施琼 翁亚光 《重庆医科大学学报》 CAS CSCD 2006年第6期854-856,888,共4页
目的:对前期筛出的与Mps1可能有相互作用的两种蛋白用酵母双杂交回转,验证与Mps1有相互作用的蛋白,为染色体分离机制研究提供线索,并为蛋白质相互作用网络提供资料。方法:应用酵母双杂交技术,将前期以pDBLeu-Mps1为诱饵质粒筛选成人肝脏... 目的:对前期筛出的与Mps1可能有相互作用的两种蛋白用酵母双杂交回转,验证与Mps1有相互作用的蛋白,为染色体分离机制研究提供线索,并为蛋白质相互作用网络提供资料。方法:应用酵母双杂交技术,将前期以pDBLeu-Mps1为诱饵质粒筛选成人肝脏cDNA文库,得到的Leu+LacZ+阳性克隆进一步回转酵母进行验证,即将文库质粒与诱饵质粒一对一重新转入酵母体内对相互作用进行验证。并对验证后的阳性克隆的外源片段进行测序及同源性分析。结果:用同源性分析,从人胚胎cDNA文库筛选到的与M ps1有相互作用的两个蛋白在酵母双杂交回转实验中仅有一个为阳性,另一个相互作用为阴性。结论:应用酵母双杂交系统从人胚胎cDNA文库中筛选并初步验证了与Mps1有相互作用的蛋白,为Mps1蛋白的功能研究奠定了基础。 展开更多
关键词 酵母双杂交技术 Mps1 蛋白质相互作用
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结肠癌中有丝分裂关卡基因hsMAD2表达的分析
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作者 施琼 翁亚光 +4 位作者 蒋洪彦 徐远久 刘子杰 刘青松 蔡燕 《重庆医科大学学报》 CAS CSCD 2007年第3期247-249,共3页
目的:研究结肠癌组织中有丝分裂关卡基因HsMAD2的表达。方法:采用定量real-timeRT-PCR方法检测18例结肠癌及正常结肠组织中hsMAD2基因表达水平。结果:以hsMAD2基因mRNA拷贝数/GAPDH基因mRNA拷贝数比值为hs-MAD2基因mRNA水平的相对定量... 目的:研究结肠癌组织中有丝分裂关卡基因HsMAD2的表达。方法:采用定量real-timeRT-PCR方法检测18例结肠癌及正常结肠组织中hsMAD2基因表达水平。结果:以hsMAD2基因mRNA拷贝数/GAPDH基因mRNA拷贝数比值为hs-MAD2基因mRNA水平的相对定量值。结肠癌和正常组织中的hsMAD2基因mRNA拷贝数/GAPDH基因mRNA拷贝数比值分别为0.1235±0.0752和0.0312±0.0598。hsMAD2基因的表达水平在结肠癌中显著高于正常结肠组织。结论:hsMAD2基因在结肠癌组织中的高表达,可能与癌细胞的异常增殖有关,是结肠癌发生发展的原因,可为临床结肠癌的治疗提供有效的靶点。 展开更多
关键词 hsMAD2基因 定量RT-PCR 结肠癌
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细胞分裂调控基因MAD2与GFP融合的真核表达质粒的构建及表达
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作者 施琼 翁亚光 +4 位作者 徐远久 蒋洪彦 刘子杰 刘青松 蔡燕 《重庆医科大学学报》 CAS CSCD 2006年第2期180-182,239,共4页
目的:构建MAD2基因与GFP融合的绿色荧光蛋白真核表达质粒,并在HepG2细胞中表达。方法:通过RT-PCR扩增,获得MAD2基因的完整序列。将此片断插入pEGFP-N1载体多克隆位点区,构建MAD2基因与GFP融合的绿色荧光蛋白真核表达质粒。应用脂质体转... 目的:构建MAD2基因与GFP融合的绿色荧光蛋白真核表达质粒,并在HepG2细胞中表达。方法:通过RT-PCR扩增,获得MAD2基因的完整序列。将此片断插入pEGFP-N1载体多克隆位点区,构建MAD2基因与GFP融合的绿色荧光蛋白真核表达质粒。应用脂质体转染技术转染HepG2细胞并观察表达的绿色荧光。结果:成功构建MAD2基因与GFP融合的绿色荧光蛋白真核表达质粒,并在HepG2细胞中观察到绿色荧光蛋白的表达。结论:该载体的成功构建,为研究MAD2基因在细胞分裂中的功能及定位建立了有效的观察体系。 展开更多
关键词 MAD2基因 绿色荧光蛋白 HEPG2细胞
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微小RNA抑制胚胎细胞MAD2基因的表达
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作者 施琼 翁亚光 +2 位作者 徐远久 蔡燕 蒋洪彦 《重庆医科大学学报》 CAS CSCD 2007年第2期138-141,共4页
目的:探讨微小RNA(microRNA)抑制胚胎细胞MAD2基因表达的机理。方法:用定量real-time PCR比较microRNA转染前后的胚胎细胞内源性基因MAD2 mRNA表达水平,同时用western blot比较转染前后Mad2蛋白的表达水平。结果:对照组的MAD2基因mRNA... 目的:探讨微小RNA(microRNA)抑制胚胎细胞MAD2基因表达的机理。方法:用定量real-time PCR比较microRNA转染前后的胚胎细胞内源性基因MAD2 mRNA表达水平,同时用western blot比较转染前后Mad2蛋白的表达水平。结果:对照组的MAD2基因mRNA拷贝数/GAPAH mRNA拷贝数为0.1780±0.0688,而转染microRNA重组质粒后,实验组的mRNA比值分别为0.1778±0.0689和0.1778±0.0670,经统计分析,两实验组细胞的内源性MAD2基因mRNA水平与对照组无显著性差异;而其中一实验组的蛋白水平在转染后有明显降低。结论:microRNA主要在翻译水平调节哺乳动物细胞内基因的表达,为研究基因表达的调控机制奠定了良好的基础。 展开更多
关键词 微小RNA MAD2基因 定量RT-PCR
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