NIRF(Np95/ICBP90-like RING finger protein)是2002年发现的一种核蛋白,其功能涉及细胞增殖调节、蛋白多聚泛素化降解、细胞癌变进程控制等领域.已有研究报道,NIRF能与p53相互作用,NIRF本身也是一个高度调节蛋白,在细胞正常的生理状态...NIRF(Np95/ICBP90-like RING finger protein)是2002年发现的一种核蛋白,其功能涉及细胞增殖调节、蛋白多聚泛素化降解、细胞癌变进程控制等领域.已有研究报道,NIRF能与p53相互作用,NIRF本身也是一个高度调节蛋白,在细胞正常的生理状态下发挥泛素化E3连接酶的作用,结合p53并将其降解,但NIRF与p53结合的蛋白结合域目前尚不清楚.本文研究证明,NIRF能与p53结合成复合体参与泛素化蛋白降解途径,并测定出NIRF与p53结合的区域.为了检测NIRF的蛋白结合域,将空载体和NIRF缺失突变体质粒分别转染于HEK293细胞,蛋白表达水平通过Western印迹用两种抗体分别检测.结果显示,所有的突变体都能在细胞中表达,并且两种抗体检测结果完全一致.同时,免疫共沉淀技术用于进一步分析实验结果.由于泛素化蛋白通常伴随蛋白酶体通路介导的降解,免疫共沉淀的蛋白纯化过程中用蛋白酶体抑制剂MG-132以抑制蛋白降解.本研究结果显示,NIRF通过PHD区域与p53形成复合体.该复合体可能参与蛋白分选、蛋白降解、DNA修复以及细胞凋亡等一系列重要的细胞活动,从而形成与细胞增殖相关的新的信号通路,在肿瘤的发生发展中可能发挥某种程度的作用.展开更多
UHRF2(ubiquitin-like with PHD and ring finger domains 2)是新近发现的具有多个结构域的核蛋白,在细胞周期调控和表观遗传学中发挥重要作用.近期研究提示,UHRF2是肿瘤抑制蛋白p53的1个E3连接酶,在体内外能与p53相互结合并促进其泛素...UHRF2(ubiquitin-like with PHD and ring finger domains 2)是新近发现的具有多个结构域的核蛋白,在细胞周期调控和表观遗传学中发挥重要作用.近期研究提示,UHRF2是肿瘤抑制蛋白p53的1个E3连接酶,在体内外能与p53相互结合并促进其泛素化,过表达UHRF2能使细胞周期停滞于G1期.然而,UHRF2介导的G1期阻滞及其与p53联系尚不清楚.通过共转染UHRF2质粒及p53特异性小干扰RNA(siRNAs)到HEK293细胞构建细胞模型,探索UHRF2引起细胞周期停滞与p53之间的关系.结果显示,UHRF2能促进HEK293细胞中p53的稳定,从而引起p21(CIP1/WAF1)基因表达,并使细胞周期停滞于G1期;但在siRNA抑制p53的表达后p21(CIP1/WAF1)表达降低,UHRF2引起的细胞周期阻滞消除.研究结果提示,UHRF2可通过稳定p53,上调p21的表达,从而介导细胞周期阻滞于G1期;同时UHRF2可能参与细胞周期调控及DNA损伤反应(DNA damage response,DDR).UHRF2稳定p53的具体分子机制及其在DDR中的作用有待进一步研究证明.展开更多
随着对NIRF(Np95/ICBP-90 like RING finger protein)研究的深入,其功能已涉及细胞癌变进程以及表观遗传学等领域.近期研究显示,NIRF能与HBc(hepatitis B virus core protein)相互结合,但其对乙型肝炎病毒(HBV)抗原表达的影响尚不明确....随着对NIRF(Np95/ICBP-90 like RING finger protein)研究的深入,其功能已涉及细胞癌变进程以及表观遗传学等领域.近期研究显示,NIRF能与HBc(hepatitis B virus core protein)相互结合,但其对乙型肝炎病毒(HBV)抗原表达的影响尚不明确.本文通过转染pAAV-HBV1.3质粒和高压水动力法尾静脉注射BALB/C小鼠,建立乙型肝炎病毒的细胞和动物模型,研究NIRF对乙型肝炎病毒抗原表达的影响.ELISA检测细胞上清和小鼠血清中HBsAg、HBeAg的分泌和表达情况,Western印迹或免疫组化染色技术检测HBcAg.结果显示,乙型肝炎病毒抗原分泌的细胞以及小动物模型建立成功,并且无论在体内外,NIRF都能对它们的表达起抑制作用,期待能为后续的HBV致病机理以及治疗药物的研究提供支持与帮助.展开更多
文摘NIRF(Np95/ICBP90-like RING finger protein)是2002年发现的一种核蛋白,其功能涉及细胞增殖调节、蛋白多聚泛素化降解、细胞癌变进程控制等领域.已有研究报道,NIRF能与p53相互作用,NIRF本身也是一个高度调节蛋白,在细胞正常的生理状态下发挥泛素化E3连接酶的作用,结合p53并将其降解,但NIRF与p53结合的蛋白结合域目前尚不清楚.本文研究证明,NIRF能与p53结合成复合体参与泛素化蛋白降解途径,并测定出NIRF与p53结合的区域.为了检测NIRF的蛋白结合域,将空载体和NIRF缺失突变体质粒分别转染于HEK293细胞,蛋白表达水平通过Western印迹用两种抗体分别检测.结果显示,所有的突变体都能在细胞中表达,并且两种抗体检测结果完全一致.同时,免疫共沉淀技术用于进一步分析实验结果.由于泛素化蛋白通常伴随蛋白酶体通路介导的降解,免疫共沉淀的蛋白纯化过程中用蛋白酶体抑制剂MG-132以抑制蛋白降解.本研究结果显示,NIRF通过PHD区域与p53形成复合体.该复合体可能参与蛋白分选、蛋白降解、DNA修复以及细胞凋亡等一系列重要的细胞活动,从而形成与细胞增殖相关的新的信号通路,在肿瘤的发生发展中可能发挥某种程度的作用.
文摘UHRF2(ubiquitin-like with PHD and ring finger domains 2)是新近发现的具有多个结构域的核蛋白,在细胞周期调控和表观遗传学中发挥重要作用.近期研究提示,UHRF2是肿瘤抑制蛋白p53的1个E3连接酶,在体内外能与p53相互结合并促进其泛素化,过表达UHRF2能使细胞周期停滞于G1期.然而,UHRF2介导的G1期阻滞及其与p53联系尚不清楚.通过共转染UHRF2质粒及p53特异性小干扰RNA(siRNAs)到HEK293细胞构建细胞模型,探索UHRF2引起细胞周期停滞与p53之间的关系.结果显示,UHRF2能促进HEK293细胞中p53的稳定,从而引起p21(CIP1/WAF1)基因表达,并使细胞周期停滞于G1期;但在siRNA抑制p53的表达后p21(CIP1/WAF1)表达降低,UHRF2引起的细胞周期阻滞消除.研究结果提示,UHRF2可通过稳定p53,上调p21的表达,从而介导细胞周期阻滞于G1期;同时UHRF2可能参与细胞周期调控及DNA损伤反应(DNA damage response,DDR).UHRF2稳定p53的具体分子机制及其在DDR中的作用有待进一步研究证明.
文摘随着对NIRF(Np95/ICBP-90 like RING finger protein)研究的深入,其功能已涉及细胞癌变进程以及表观遗传学等领域.近期研究显示,NIRF能与HBc(hepatitis B virus core protein)相互结合,但其对乙型肝炎病毒(HBV)抗原表达的影响尚不明确.本文通过转染pAAV-HBV1.3质粒和高压水动力法尾静脉注射BALB/C小鼠,建立乙型肝炎病毒的细胞和动物模型,研究NIRF对乙型肝炎病毒抗原表达的影响.ELISA检测细胞上清和小鼠血清中HBsAg、HBeAg的分泌和表达情况,Western印迹或免疫组化染色技术检测HBcAg.结果显示,乙型肝炎病毒抗原分泌的细胞以及小动物模型建立成功,并且无论在体内外,NIRF都能对它们的表达起抑制作用,期待能为后续的HBV致病机理以及治疗药物的研究提供支持与帮助.
