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大黄素对大鼠急性脊髓损伤后继发脊髓水肿的影响 被引量：14
1
作者 曾欢欢 黄英如 +2 位作者 李子健 汪一 张松 《中国康复理论与实践》 CSCD 北大核心 2018年第4期378-384,共7页
目的探讨大黄素对大鼠急性脊髓损伤后脊髓水肿的影响及其机制。方法将180只健康雌性Sprague-Dawley大鼠随机分为假手术组(A组),模型组(B组),大黄素低剂量组(C组)、中剂量组(D组)和高剂量组(E组),每组36只。采用Allen法制作大鼠脊髓损伤... 目的探讨大黄素对大鼠急性脊髓损伤后脊髓水肿的影响及其机制。方法将180只健康雌性Sprague-Dawley大鼠随机分为假手术组(A组),模型组(B组),大黄素低剂量组(C组)、中剂量组(D组)和高剂量组(E组),每组36只。采用Allen法制作大鼠脊髓损伤模型,术后3 d、7 d、14 d及28 d,BBB评分及斜板实验观察大鼠运动功能恢复。术后3 d,HE染色观察脊髓组织病理变化,干湿重法检测脊髓组织含水量,伊文思蓝(EB)染色检测血脊髓屏障(BSCB)通透性,RT-PCR和Western blotting检测水通道蛋白-4(AQP-4)、基质金属蛋白酶-2(MMP-2)m RNA和蛋白表达。结果 BBB评分及斜板实验结果显示,术后7 d、14 d、28 d,C组、D组和E组均优于B组(P<0.05),E组最佳(P<0.05)。术后3 d,HE染色显示,B组损伤节段内有大片出血灶,神经细胞肿胀、破坏,大量炎性细胞浸润,组织间隙增宽,水肿严重,C组、D组和E组上述病理改变改善,其中E组最明显;B组脊髓组织含水量较A组增高(P<0.05),D组、E组脊髓组织含水量低于B组和C组(P<0.05),E组低于D组(P<0.05);B组EB含量高于A组(P<0.05),C组、D组和E组EB含量均低于B组(P<0.05);C组、D组和E组AQP-4、MMP-2 m RNA和蛋白表达均低于B组(P<0.05),E组最低(P<0.05)。结论大黄素能减轻大鼠急性脊髓损伤后的脊髓水肿,促进肢体功能康复,这可能与大黄素下调损伤后脊髓组织AQP-4和MMP-2表达,降低BSCB通透性有关。 展开更多
关键词 脊髓损伤 水肿 大黄素 水通道蛋白-4 基质金属蛋白酶-2 大鼠
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二甲基亚砜和乙二醇对玻璃化保存大鼠坐骨神经的协同保护作用 被引量：3
2
作者 肖龙 黄英如 +2 位作者 李沿江 吴珍元 邓熊 《上海交通大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2015年第7期940-946,共7页
目的探讨冷冻保护剂二甲基亚砜(DMSO)、乙二醇(EG)单独及联合应用对周围神经玻璃化保存的影响。方法取30只3月龄雄性SD大鼠双侧坐骨神经,制成长约15 mm神经段,在含不同冷冻保护剂的玻璃化溶液中-80℃保存4周:空白组(不含冷冻保护剂)、10... 目的探讨冷冻保护剂二甲基亚砜(DMSO)、乙二醇(EG)单独及联合应用对周围神经玻璃化保存的影响。方法取30只3月龄雄性SD大鼠双侧坐骨神经,制成长约15 mm神经段,在含不同冷冻保护剂的玻璃化溶液中-80℃保存4周:空白组(不含冷冻保护剂)、10%DMSO组、20%EG组、10%DMSO+20%EG组(每组n=15)。透射电镜观察神经组织超微结构,Calcein-AM和PI双染色激光扫描共聚焦显微镜(LSCM)检测神经组织生物活性,Western blotting检测神经组织Caspase-3、Caspase-8表达。取玻璃化保存4周后的各组坐骨神经,于37℃、5%CO2DMEM(含l0%胎牛血清)中培养7 d,RT-PCR、Western blotting检测培养神经表达的神经生长因子(NGF)和胶质源性神经营养因子(GDNF)。结果坐骨神经玻璃化保存4周,透射电镜显示:空白组神经纤维脱髓鞘变和轴质萎缩严重,而10%DMSO组、20%EG组、10%DMSO+20%EG组神经纤维脱髓鞘变和轴质萎缩均较轻(以10%DMSO+20%EG组最轻)。LSCM检测显示:空白组神经纤维绿色荧光较弱,而红色荧光较强、分布较广;10%DMSO组、20%EG组神经纤维绿色荧光较强、红色荧光较弱;而10%DMSO+20%EG组神经纤维绿色荧光最强、红色荧光最弱。Western blotting检测显示:玻璃化保存后坐骨神经Caspase-3、Caspase-8的表达,空白组与10%DMSO组、20%EG组、10%DMSO+20%EG组比较,10%DMSO+20%EG组与10%DMSO组、20%EG组比较,差异均具有统计学意义(P<0.05);但10%DMSO组与20%EG组间差异无统计学意义(P>0.05)。RT-PCR、Western blotting检测显示:培养神经NGF、GDNF的表达,空白组与10%DMSO组、20%EG组、10%DMSO+20%EG组比较,10%DMSO+20%EG组与10%DMSO组、20%EG组比较,差异均具有统计学意义(P<0.05);但10%DMSO组与20%EG组间差异无统计学意义(P>0.05)。结论 10%DMSO、20%EG对-80℃玻璃化保存的坐骨神经具有保护作用,能提高玻璃化保存后神经组织的生物活性,且二者联合应用具有协同作用。 展开更多
关键词 坐骨神经 玻璃化保存 冷冻保护剂 协同作用
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冷诱导RNA结合蛋白促进冷冻保存大鼠坐骨神经异体移植后神经再生的作用 被引量：5
3
作者 李子健 黄英如 +2 位作者 曾欢欢 汪一 张松 《中国康复理论与实践》 CSCD 北大核心 2018年第4期391-400,共10页
目的探讨冷诱导RNA结合蛋白(CIRP)对冷冻保存大鼠坐骨神经活性及同种异体移植后神经再生的影响。方法将15 mm雄性Sprague-Dawley大鼠坐骨神经片段置于DMEM溶液中,分别在4℃、15℃、32℃预处理24 h(A组、B组、C组),设置新鲜神经组(D组)。... 目的探讨冷诱导RNA结合蛋白(CIRP)对冷冻保存大鼠坐骨神经活性及同种异体移植后神经再生的影响。方法将15 mm雄性Sprague-Dawley大鼠坐骨神经片段置于DMEM溶液中,分别在4℃、15℃、32℃预处理24 h(A组、B组、C组),设置新鲜神经组(D组)。RT-PCR和Western blotting检测CIRP m RNA和蛋白表达。将上述4组神经置于冷冻保存液中液氮保存4周,Calcein-AM/PI荧光染色、激光共聚焦显微镜观察保存后神经活细胞、死细胞情况,Western blotting检测Bax、Bcl-2蛋白表达。取冷冻保存4周的坐骨神经,37℃、5%CO2培养7 d,Western blotting检测神经生长因子(NGF)、神经胶质细胞源性神经营养因子(GDNF)蛋白表达;用冷冻保存4周或新鲜雄性Sprague-Dawley大鼠坐骨神经,修复对应的雄性Wistar大鼠坐骨神经10 mm缺损(A′组、B′组、C′组、D′组、E′组),设立同系移植新鲜组(F′组)。术后4周,免疫组化染色观察移植段神经CD+4T淋巴细胞入侵,ELISA法检测血清白细胞介素(IL)-6、干扰素(IFN)-γ水平;术后20周,电生理检测肌肉复合动作电位(CMAP)和运动神经传导速度(MNCV),甲苯胺蓝染色分析再生有髓神经纤维数目和髓鞘厚度,电镜观察再生神经超微结构。结果 C组神经CIRP m RNA及蛋白表达均高于A组和B组(P<0.05)。冷冻保存4周后,与A组、B组、D组相比,C组神经活细胞数量较多,Bax表达降低(P<0.05),Bcl-2表达升高(P<0.05);C组冷冻保存神经分泌NGF、GDNF表达均高于A组和B组(P<0.05)。同种异体移植术后4周,与E′组相比,C′组CD+4T淋巴细胞减少,血清IL-6、IFN-γ水平降低(P<0.05),但C′组与D′组和F′组比较无显著性差异(P>0.05)。术后20周,C′组CMAP、MNCV、再生神经轴突密度及髓鞘厚度均优于A′、B′、D′组和E′组(P<0.05)。再生神经超微结构显示,与A′组、B′组、D′组和E′组相比,C′、F′组有髓神经纤维数量多,粗细均匀,分布广泛,髓鞘厚。结论 32℃预处理可促进坐骨神经CIRP高表达,CIRP高表达对冷冻保存大鼠坐骨神经具有保护作用,能维持保存后神经的生物活性,促进同种异体移植后受体神经再生。 展开更多
关键词 周围神经损伤 冷诱导RNA结合蛋白 冷冻保存 同种异体移植 神经再生
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内源性神经营养因子促进冷冻保存大鼠坐骨神经异体移植后神经再生的作用 被引量：6
4
作者 张松 黄英如 +2 位作者 石一峰 刘云霄 冼华 《中国康复理论与实践》 CSCD 北大核心 2020年第4期407-422,共16页
目的探讨内源性神经营养因子(ENTFs)对冷冻保存大鼠坐骨神经同种异体移植后神经再生的影响。方法 15 mm雌性Sprague-Dawley大鼠坐骨神经置于DMEM溶液中,37℃、5%CO2分别体外预处理1 d、3 d、7 d、14 d和21 d (A组、B组、C组、D组和E组)... 目的探讨内源性神经营养因子(ENTFs)对冷冻保存大鼠坐骨神经同种异体移植后神经再生的影响。方法 15 mm雌性Sprague-Dawley大鼠坐骨神经置于DMEM溶液中,37℃、5%CO2分别体外预处理1 d、3 d、7 d、14 d和21 d (A组、B组、C组、D组和E组),设置新鲜神经对照组(F组)。Western blotting检测神经的胶质细胞源性神经营养因子(GDNF)、神经生长因子(NGF)、Bcl-2、Bax、Caspase-3、主要组织相容性复合体(MHC)-Ⅰ、MHC-Ⅱ蛋白表达。将上述6组神经置于冷冻保存液中液氮保存4周,Calcein-AM/Propidium Iodide染色、激光共聚焦显微镜观察保存后神经活细胞和死细胞情况。用上述冷冻保存4周的坐骨神经和新鲜坐骨神经(G组),同种异体移植修复雌性Wistar大鼠坐骨神经10 mm缺损(A′组、B′组、C′组、D′组、E′组、F′组和G′组),设置同系移植组(H′组)。移植术后1周,免疫荧光染色观察CD8+T细胞、巨噬细胞入侵移植物情况,ELISA法检测受者血清白细胞介素(IL)-2、干扰素(IFN)-γ、肿瘤坏死因子(TNF)-α水平;移植术后20周,电生理检测肌肉复合动作电位(CMAP)和神经传导速度(NCV),称重计算腓肠肌湿重比,神经丝(NF)200免疫荧光染色、甲苯胺蓝染色和透射电镜观察再生神经组织学。结果与F组相比,C组、D组和E组GDNF、NGF蛋白表达均增加(P <0.05);B^E组Bcl-2蛋白表达降低(P <0.05),Bax和Caspase-3蛋白表达均增加(P <0.05);A组~E组MHC-Ⅰ、MHC-Ⅱ蛋白表达均降低(P <0.05)。坐骨神经冷冻保存4周后,与F组和G组相比,C组、D组和E组活细胞数量降低。同种异体移植术后1周,与F′组和G′组相比,C′组、D′组和E′组移植物CD8+T细胞、巨噬细胞减少,受者血清IL-2、TNF-α水平降低(P <0.05)。移植术后20周,C′组、D′组和E′组CMAP、NCV、腓肠肌湿重比、再生有髓神经纤维数及髓鞘厚度均显著优于F′组和G′组(P <0.05),C′组、D′组和E′组移植神经NF200表达高于F′组和G′组。结论体外预处理大鼠坐骨神经能诱导ENTFs表达,高表达ENTFs的坐骨神经冷冻保存后异体移植能促进受者神经再生和功能恢复。 展开更多
关键词 周围神经损伤 同种异体移植 周围神经冷冻保存 内源性神经营养因子 神经再生 大鼠
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热休克蛋白70对冷冻保存大鼠坐骨神经细胞活性及异体移植后神经再生的影响
5
作者 石一峰 黄英如 +2 位作者 刘云霄 张松 冼华 《上海交通大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2021年第9期1190-1196,共7页
目的·探讨热休克蛋白70(heat shock protein 70,HSP70)对冷冻保存大鼠坐骨神经细胞活性及异体移植后神经再生的影响。方法·将SD大鼠双侧坐骨神经置于DMEM培养基中,分别于37、42、45℃体外预处理1 h(记为37℃组、42℃组、45℃... 目的·探讨热休克蛋白70(heat shock protein 70,HSP70)对冷冻保存大鼠坐骨神经细胞活性及异体移植后神经再生的影响。方法·将SD大鼠双侧坐骨神经置于DMEM培养基中,分别于37、42、45℃体外预处理1 h(记为37℃组、42℃组、45℃组),并设置未经热应激处理的对照组(Con组),每组神经36根。蛋白质印迹(Western blotting)检测各组坐骨神经中HSP70的表达。将上述4组神经于液氮冷冻保存液中保存4周,Western blotting检测主要组织相容性复合体Ⅰ(major histocompatibility complex classⅠ,MHC-Ⅰ)、MHC-Ⅱ和半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(caspase-3)、caspase-9的表达,流式细胞术检测坐骨神经活细胞存活情况。取冷冻保存的坐骨神经,于37℃、5%CO_(2)培养7 d,Western blotting检测脑源性神经营养因子(brain-derived neurotrophic factor,BDNF)和胶质细胞源性神经营养因子(glial cell line-derived neurotrophic factor,GDNF)的表达。用上述4组冷冻保存4周的坐骨神经和SD大鼠新鲜坐骨神经(Fresh组),移植至Wistar大鼠对应坐骨神经10 mm缺损处对其进行修复(分别为37℃-Allo组、42℃-Allo组、45℃-Allo组、Con-Allo组、Fresh-Allo组),并设置Wistar大鼠坐骨神经同系移植组(Fresh-Iso组),每组大鼠6只。移植术后20周,电生理检测肌肉复合动作电位(compound muscle action potential,CMAP)和神经传导速度(nerve conduction velocity,NCV),甲苯胺蓝染色观察再生有髓神经纤维数,透射电镜观察再生神经超微结构。结果·42℃组HSP70表达水平高于37℃组、45℃组和Con组(均P<0.05)。冷冻保存4周后42℃组MHC-Ⅰ、MHC-Ⅱ表达水平与37℃组、45℃组、Con组差异均无统计学意义,但42℃组caspase-3、caspase-9表达水平较37℃组、45℃组、Con组降低,坐骨神经细胞存活率较高(均P<0.05)。培养7 d后,42℃组BDNF、GDNF表达水平较37℃组、45℃组、Con组升高(均P=0.000)。移植术后20周,42℃-Allo组CMAP、NCV、有髓神经纤维数、髓鞘厚度均优于Con-Allo组、Fresh-Allo组(均P=0.000)。结论·HSP70高表达能减轻大鼠坐骨神经冷冻保存损伤,提高保存后神经细胞活性,促进异体移植后神经再生。 展开更多
关键词 热应激预处理 热休克蛋白70 冷冻保存损伤 异体神经移植 神经再生
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