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牛阿卡斑病RT-PCR检测方法的建立 被引量:1
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作者 尚佳富 李明科 +6 位作者 徐婷婷 杨晓伟 刘霞 张立武 曹礼静 倪兴维 赵光伟 《贵州农业科学》 2025年第1期55-61,共7页
【目的】建立牛阿卡斑病(Akabane disease,AKAD)RT-PCR实验室快速检测方法,为该病的临床防控提供技术支撑。【方法】参考前期获得的阿卡斑病毒(Akabane virus,AKAV)S基因序列(OR791104.1),针对其保守区域设计特异性扩增引物,以构建的pMD... 【目的】建立牛阿卡斑病(Akabane disease,AKAD)RT-PCR实验室快速检测方法,为该病的临床防控提供技术支撑。【方法】参考前期获得的阿卡斑病毒(Akabane virus,AKAV)S基因序列(OR791104.1),针对其保守区域设计特异性扩增引物,以构建的pMD-AKAV重组质粒为模板,建立RT-PCR检测方法,并对其扩增条件进行优化,进而对该方法的特异性、敏感性和重复性进行评估,最后将所建方法对实验室保存的19份阳性和279份阴性牛血清临床样本进行符合性检测,验证该方法的准确性。【结果】所建方法的最佳反应条件为95℃预变性3 min;95℃变性15 s,55℃退火15 s,72℃延伸15 s,共37个循环;72℃延伸5 min。对牛蓝舌病病毒、多杀性巴氏杆菌、牛传染性鼻气管炎病毒和牛支原体等病原均为阴性,特异性良好;对阳性质粒检测最低限为2.5×10^(3) copies/μL,灵敏性高;重复性试验显示不同批次样本检测结果均一致,可重复性强;对实验室保存的298份(19份阳性、279份阴性)临床样本进行检测,其结果均与预期一致,符合率100%。【结论】建立的牛阿卡斑病RT-PCR检测方法特异性良好、灵敏性高、可重复性强。 展开更多
关键词 赤羽病 阿卡斑病毒 RT-PCR 检测 防控
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大口黑鲈源豚鼠气单胞菌的分离鉴定及全基因组分析 被引量:3
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作者 王迎平 赵静贤 +13 位作者 尚佳富 郝成森 左妤祺 朱桓奕 冯旭东 徐婷婷 倪兴维 刘霞 杨晓伟 曹蓝云 张立武 谭昌藩 曹礼静 赵光伟 《中国畜牧兽医》 CAS CSCD 北大核心 2024年第4期1706-1716,共11页
【目的】探究患病大口黑鲈的致病菌及其主要生物学特性,为临床疾病防控提供技术支撑。【方法】首先对发病大口黑鲈进行病理组织学观察,进而利用平板划线法分离细菌,通过革兰染色、生化试验和16S rDNA序列测定对分离菌进行鉴定,通过致病... 【目的】探究患病大口黑鲈的致病菌及其主要生物学特性,为临床疾病防控提供技术支撑。【方法】首先对发病大口黑鲈进行病理组织学观察,进而利用平板划线法分离细菌,通过革兰染色、生化试验和16S rDNA序列测定对分离菌进行鉴定,通过致病性试验观察分离菌对小鼠主要脏器造成的病理损伤;而后分别利用PCR方法和Kirby-Bauer(K-B)纸片法对分离菌的常见毒力基因和耐药特征进行检测分析;最后利用二代测序技术绘制其全基因组草图,并通过生物信息学方法对其分子特征进行解析。【结果】自然感染大口黑鲈肝细胞肿大,空泡变性,肠黏膜下层出血,肠壁坏死;于患病黑鲈体内分离到1株优势菌,在血平板上呈乳白色,半透明,直径约1 mm的小菌落,呈β溶血,革兰染色为阴性短杆菌,两端钝圆,经生化试验和16S rDNA测序证实分离菌为豚鼠气单胞菌(Aeromonas caviae),将其命名为SCMS。试验小鼠接种后24 h内死亡率为100%,病理特征与自然感染大口黑鲈相似;SCMS株中共检测到9种毒力基因,分别为Aha、Ahp、Aer、Alt、gcaT、Act、Exu、Ela和eprCAI;药敏试验结果显示,分离菌对大多数四环素类、大环内酯类药物表现耐药或中度敏感;全基因组测序显示,分离菌全长4329602 bp,GC含量为61.5%,基因组信息在GenBank中的登录号为JARFUQ000000000,相似性分析显示分离菌与人源、食品源豚鼠气单胞菌具有高度相似性;病原毒力因子数据库(VFDB)比对显示,分离菌携带多种与黏附、侵入及分泌系统相关的毒力基因;耐药基因数据库(CGE)分析显示,菌株中携带7种耐药基因,部分基因与耐药表型存在不一致的现象。【结论】本试验通过全基因组测序技术解析了1株大口黑鲈源豚鼠气单胞菌的毒力基因和耐药基因,其结果可为大口黑鲈临床疾病防控提供技术支撑。 展开更多
关键词 大口黑鲈 豚鼠气单胞菌 全基因组测序 毒力基因 耐药基因
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副猪嗜血杆菌与PCV3混合感染的实验室诊断及分析 被引量:5
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作者 赵自亮 田宇森 +6 位作者 庄鸿琨 李婕 朱桓奕 刘霞 杨晓伟 张立武 赵光伟 《中国动物检疫》 CAS 2022年第12期18-25,共8页
为确定重庆市某患病猪场的致病原并探究其生物学特性及分子进化特性,首先利用PCR方法对组织病料进行检测,结果发现副猪嗜血杆菌(Hps)和圆环病毒3型(PCV3)两种病原场为阳性。然后进行细菌分离,通过形态、培养特征和16S rDNA测序对分离菌... 为确定重庆市某患病猪场的致病原并探究其生物学特性及分子进化特性,首先利用PCR方法对组织病料进行检测,结果发现副猪嗜血杆菌(Hps)和圆环病毒3型(PCV3)两种病原场为阳性。然后进行细菌分离,通过形态、培养特征和16S rDNA测序对分离菌株进行鉴定,并分析其血清型、药物敏感性、耐药基因以及生长曲线等主要生物学特性。经鉴定确定致病菌株为Hps血清5型,分离菌株对头孢他啶、苯唑西林、新霉素、卡那霉素、氯霉素、米诺环素、多黏菌素B和四环素表现为耐药,共检测到9种耐药基因;对PCV3通过分段扩增、拼接获得完整的基因组序列,通过生物学软件分析其基因结构以及基因型,经测序分析发现PCV3基因组全长2 000 bp,GC含量为50.45%,基因型为PCV3a,与广西MH823221株和美国最早报道的KT869077株具有较高的亲缘关系。本研究确定了患病猪的致病原及其主要生物学特性及分子进化特性,为临床有效防控Hps和PCV3混合感染提供了依据。 展开更多
关键词 副猪嗜血杆菌 PCV3 混合感染 生物学特性
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胚蛋注射技术对家禽生长的促进作用 被引量:5
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作者 唐雪 王枭鸿 +3 位作者 綦才 黄丽 李帅军 冯昊南 《家禽科学》 2020年第2期53-58,共6页
胚蛋注射技术是指将外源性营养物质注射到家禽的胚蛋中。本文详细介绍了胚蛋注射技术对家禽生长的多种促进作用,并展望胚蛋注射技术未来的发展趋势。
关键词 胚蛋注射 家禽 营养 生长发育
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猪繁殖与呼吸综合征病毒北美经典株感染导致仔猪腹泻的诊断、治疗
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作者 曹礼静 张立武 《猪业科学》 2023年第1期81-83,共3页
0前言在实际生产中,腹泻是引起仔猪死亡的主要原因,饲养管理不善、细菌、病毒、寄生虫感染等均能引起仔猪腹泻。仔猪腹泻是多因一果,如无实验室检测确诊病因和采取针对性的治疗方案,将造成较高死亡率。2022年6月,四川省南充市某养殖场外... 0前言在实际生产中,腹泻是引起仔猪死亡的主要原因,饲养管理不善、细菌、病毒、寄生虫感染等均能引起仔猪腹泻。仔猪腹泻是多因一果,如无实验室检测确诊病因和采取针对性的治疗方案,将造成较高死亡率。2022年6月,四川省南充市某养殖场外购27日龄仔猪1356头,该批仔猪在进场后6 d开始零星发病,主要临床症状为消瘦、精神沉郁、发烧、食欲减退、拉稀糊样至水状粪便、被毛被粪便污染(图1)。 展开更多
关键词 猪繁殖与呼吸综合征病毒 仔猪腹泻 寄生虫感染 食欲减退 粪便污染 实验室检测 临床症状 多因一果
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