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题名幽门螺杆菌hp1188基因的原核表达
被引量：2
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作者
韩飞
杨致邦
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机构
重庆三峡中心医院微免科
重庆医科大学基础医学院:病原生物学教研室
神经科学研究中心
基础医学实验教学中心病原生物学与免疫学实验室
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出处
《重庆医科大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2010年第6期822-825,共4页
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基金
重庆市教委项目(渝教科2003-7-3)
重庆市科委攻关项目(CSTC
2005EA5020)
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文摘
目的:重组表达幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,H.pylori)hp1188基因,为研究该基因所编码蛋白在H.pylori的黏附过程中的作用奠定基础。方法:以H.pylori标准株NCTC11637基因组DNA为模板,PCR扩增hp1188基因片段,克隆至质粒pQE-30中获得重组质粒pQE30-hp1188,经DNA测序确认后将重组质粒转化大肠杆菌DH5α,IPTG诱导表达。Ni2+-NTA树脂亲和层析纯化表达蛋白,SDS-PAGE检测表达,Westernblot鉴定相应抗原表位。结果:扩增的hp1188基因片段全长810bp,与基因文库中的hp1188基因同源性达98%。SDS-PAGE显示表达产物相对分子量约为30600Dalton,与预期相符;大肠杆菌裂解液中表达产物接近可溶性蛋白总量的一半,但沉淀中仍能检测到表达蛋白。目标蛋白纯化后均一性接近90%,Westernblot证实与多克隆抗体有良好结合能力。结论:成功克隆了hp1188基因,并在大肠杆菌DH5α中获得高效表达。
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关键词
幽门螺杆菌
hp1188基因
表达
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Keywords
Helicobacter pylori
hp1188 gene
Expression
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分类号
Q78
[生物学—分子生物学]
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