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骨骼肌卫星细胞纯化及培养的实验研究 被引量:6
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作者 陈从波 姚启盛 +2 位作者 王卫民 王晓康 陈立新 《实用医学杂志》 CAS 2006年第7期760-762,共3页
目的:建立一种骨骼肌卫星细胞纯化及培养方法。方法:取成年雌性SD大鼠前肢肱三头肌,用胶原酶和Dispase进行消化,采用差速贴壁的方法纯化骨骼肌卫星细胞,用含20%胎牛血清的Hams-F10培养基进行培养,α-骨骼肌肌动蛋白(α-sarcometricactin... 目的:建立一种骨骼肌卫星细胞纯化及培养方法。方法:取成年雌性SD大鼠前肢肱三头肌,用胶原酶和Dispase进行消化,采用差速贴壁的方法纯化骨骼肌卫星细胞,用含20%胎牛血清的Hams-F10培养基进行培养,α-骨骼肌肌动蛋白(α-sarcometricactin)免疫细胞化学染色进行细胞鉴定。结果:成功地分离培养了成年大白鼠的骨骼肌卫星细胞。结论:采用差速贴壁的方法可以成功纯化骨骼肌卫星细胞,为将来自体肌卫星细胞移植治疗压力性尿失禁打下了基础。 展开更多
关键词 骨骼细胞 培养的 纯化大鼠
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肝细胞生长因子对ALL小鼠骨髓移植后GVHD和血清Th1/Th2相关细胞因子的影响 被引量:7
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作者 夏云金 高清平 +3 位作者 万楚成 程范军 王为民 郭仁慈 《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 2005年第1期35-38,共4页
为了观察肝细胞生长因子 (HGF)对急性淋巴细胞白血病 (ALL)小鼠异基因骨髓移植 (allo BMT)后GVHD和血清Th1 Th2相关细胞因子的影响 ,BALB c小鼠ALL模型建立后 ,接受 11Gy全身照射 ,将昆明小鼠骨髓移植给该ALL模型小鼠。随机将BALB c小鼠... 为了观察肝细胞生长因子 (HGF)对急性淋巴细胞白血病 (ALL)小鼠异基因骨髓移植 (allo BMT)后GVHD和血清Th1 Th2相关细胞因子的影响 ,BALB c小鼠ALL模型建立后 ,接受 11Gy全身照射 ,将昆明小鼠骨髓移植给该ALL模型小鼠。随机将BALB c小鼠分A、B两组 ,A组移植后 0天至 7天皮下注射HGF ,B组皮下注射PBS。移植后观察A、B两组的GVHD症状和肝、小肠、皮肤的病理学变化 ;移植后第 8天取血检测IFN γ和IL 4水平。结果表明 :A组的GVHD症状积分低于B组 (P <0 .0 5 ) ;A、B两组的IFN γ均高于正常组 (P值分别 <0 0 5和0 0 0 1) ,但A组低于B组 (P <0 .0 1) ;A、B两组的IL 4均低于正常组 (P <0 .0 5 ) ,而A组的IL 4高于B组 (P <0 .0 5 )。结论 :HGF可减轻GVHD的严重程度 ,与HGF有调节Th1 Th2相关细胞因子趋于平衡的作用有关。 展开更多
关键词 肝细胞生长因子 急性淋巴细胞白血病 骨髓移植 GVHD TH1 TH2
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环氧合酶-2抑制剂对梗阻性肾病大鼠肾组织结缔组织生长因子表达的影响 被引量:4
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作者 肖厚勤 丁国华 +6 位作者 张建鄂 张永 王晓勋 刘志祥 张庆红 李涛 乐发国 《实用医学杂志》 CAS 2005年第3期241-245,共5页
目的:探讨环氧合酶-2(COX-2)抑制剂塞来昔布(celecoxib)对梗阻性肾病大鼠模型肾组织结缔组织生长因子(CTGF)和转化生长因子β1(TGF-β1)表达的影响及机制。方法:采用单侧输尿管结扎(UUO)建立梗阻性肾病模型,并随机分为模型组和治疗组,... 目的:探讨环氧合酶-2(COX-2)抑制剂塞来昔布(celecoxib)对梗阻性肾病大鼠模型肾组织结缔组织生长因子(CTGF)和转化生长因子β1(TGF-β1)表达的影响及机制。方法:采用单侧输尿管结扎(UUO)建立梗阻性肾病模型,并随机分为模型组和治疗组,另设假手术组作对照。治疗组每日给予塞来昔布100mg/kg,模型组、假手术组每日给予等体积的生理盐水于造模前1d至造模后14d灌胃,分别于UUO后3d、7d、14d分批处死,逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)检测TGF-β1、CTGF的基因表达,免疫组化技术检测TGF-β1、CTGF、α-SMA、FN的蛋白表达,放免法检测组织内cAMP的水平。结果:与假手术组相比,模型组TGF-β1、CTGF的基因表达显著上调,cAMP的水平下降(P<0.001)。塞来昔布对梗阻肾TGF-β1的表达无显著改变,但能升高组织内cAMP水平,抑制CTGF的表达,纤维化程度减轻。结论:在梗阻性肾病大鼠中TGF-β1、CTGF的表达均显著升高,选择性COX-2抑制剂通过升高组织内clip的水平来抑制TGF-B的下游因子———TGF的表达延缓肾间质纤维化。 展开更多
关键词 CTGF TGF-β1 梗阻性肾病 基因表达 组织内 塞来昔布 结缔组织生长因子 AMP 水平 RT-PCR
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骨髓基质干细胞的分离纯化及培养 被引量:5
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作者 阮绪芝 陈霞萍 +1 位作者 严世荣 王卫民 《生物学杂志》 CAS CSCD 2004年第2期25-27,共3页
目的 建立骨髓基质干细胞(MSCs)良好的分离纯化和培养方法。方法 将小鼠骨髓基质干细胞自股骨中分离,应用贴壁选择法结合细胞克隆挑选法进行分离纯化,应用细胞生长因子(EGF和PDGF-BB)刺激法进行MSCs的体外培养和传代,倒置显微镜下观... 目的 建立骨髓基质干细胞(MSCs)良好的分离纯化和培养方法。方法 将小鼠骨髓基质干细胞自股骨中分离,应用贴壁选择法结合细胞克隆挑选法进行分离纯化,应用细胞生长因子(EGF和PDGF-BB)刺激法进行MSCs的体外培养和传代,倒置显微镜下观察分离培养的细胞并照像记录。结果,培养获得了纯化的呈梭形成纤维样细胞的骨髓基质干细胞。在生长因子EGF和PDGF-BB的共同作用下,传代MSCs生长旺盛,形态均一。结论 该方法是简便高效的骨髓基质干细胞的分离纯化和培养方法。 展开更多
关键词 小鼠 骨髓基质干细胞 细胞培养
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自体骨髓细胞局部移植对外周血管新生作用的影响 被引量:1
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作者 何朝荣 张群林 +6 位作者 贺义 李艳兵 王卫民 王崇全 章正华 易建华 黄从新 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2004年第12期2236-2239,共4页
目的探讨自体骨髓细胞局部移植对肢体缺血的治疗作用。方法14只雄性新西兰兔结扎并离断单侧股动脉及其分支动脉1h后,骨髓细胞局部移植组(n=7)于缺血局部肌肉注射新鲜分离的自体骨髓单个核细胞悬液,对照组(n=7)局部肌肉注射磷酸盐缓冲液... 目的探讨自体骨髓细胞局部移植对肢体缺血的治疗作用。方法14只雄性新西兰兔结扎并离断单侧股动脉及其分支动脉1h后,骨髓细胞局部移植组(n=7)于缺血局部肌肉注射新鲜分离的自体骨髓单个核细胞悬液,对照组(n=7)局部肌肉注射磷酸盐缓冲液,分别于实验前(0d)、7d和28d进行股部血流动力学检测,于28d时处死动物做组织病理学分析。结果7d和28d时,彩色多谱勒血流显像示骨髓细胞局部移植组血流信号较对照组丰富,且收缩期峰值血流速度与舒张期流速较快(P<005),28d时血管阻力指数、血流量两组间有显著差异(P<005);病理学分析骨髓细胞局部移植组单位面积毛细血管密度显著高于对照组(P<001),毛细血管数目与肌纤维数目的比值两组间显著差异(P<005)。结论自体骨髓细胞局部移植促进外周血管新生,可能成为缺血性外周血管疾病一种新的治疗方法。 展开更多
关键词 骨髓移植 新生血管化 病理性 缺血
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骨髓间充质干细胞体外分化过程中端粒酶活性表达及意义 被引量:1
6
作者 何朝荣 刘先军 +3 位作者 严世荣 张群林 刘雪琴 王晓勋 《实用医学杂志》 CAS 2003年第8期851-853,共3页
目的 :探讨体外诱导兔骨髓间充质干细胞分化为内皮细胞及其扩增过程中端粒酶活性的表达及其意义。方法 :联合应用密度梯度离心和贴壁培养法分离骨髓间充质干细胞 ,继而诱导其向内皮细胞方向分化并传代培养。用TRAPezeELISA法和TRAP银染... 目的 :探讨体外诱导兔骨髓间充质干细胞分化为内皮细胞及其扩增过程中端粒酶活性的表达及其意义。方法 :联合应用密度梯度离心和贴壁培养法分离骨髓间充质干细胞 ,继而诱导其向内皮细胞方向分化并传代培养。用TRAPezeELISA法和TRAP银染法分别检测骨髓间充质干细胞体外诱导分化前后端粒酶活性。结果 :兔骨髓间充质干细胞体外培养时具有快速增殖能力 ,在特定环境中诱导分化细胞具有内皮细胞特征 ;增殖前的骨髓间充质干细胞端粒酶活性低水平表达 ,一旦经过诱导分化其端粒酶活性表达上调 ,在 5代内其端粒酶活性不因细胞传代而下降或消失。结论 :骨髓间充质干细胞在体外有限扩增和诱导分化时保持端粒酶活性 ,维持组织干细胞特性 ,为内皮祖细胞的临床研究奠定理论基础。 展开更多
关键词 骨髓间充质干细胞 细胞分化 内皮细胞 端粒酶
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脱氧核酶抑制人脐动脉平滑肌细胞增殖
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作者 周明 王玮 +3 位作者 王崇全 党书毅 王卫民 王晓勋 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第12期2334-2337,共4页
目的:观察增殖细胞核抗原(PCNA)基因特异性的10-23脱氧核酶(DNAZYME)对人脐动脉平滑肌细胞(HUASMC)增殖的影响。方法:设计合成针对PCNA基因起始密码AUG的DNAZYME,应用脂质体转染法将其转人体外培养的HUASMC。检测DNAZYME干预HUASMC 2 D... 目的:观察增殖细胞核抗原(PCNA)基因特异性的10-23脱氧核酶(DNAZYME)对人脐动脉平滑肌细胞(HUASMC)增殖的影响。方法:设计合成针对PCNA基因起始密码AUG的DNAZYME,应用脂质体转染法将其转人体外培养的HUASMC。检测DNAZYME干预HUASMC 2 D后[3H]-TDR的掺入量;通过四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法分析HUASMC的增殖;采用流式细胞仪检测细胞周期。结果:1.0 ΜMOL/L DNAZYME干预HUASMC 2 D后,[3H]-TDR 的掺入量低于对照组(P<0.05)。1.0ΜMOL/L的DNAZYME和反义寡聚核苷酸(ASODN)组处理2、3和5 D后,MTT比色吸光度值低于对照组(均P<0.01)。DNAZYME对细胞增殖的抑制呈剂量依赖性。细胞干预2 D后,DNAZYME、ASODN 和对照组的C0/G1期细胞的比率分别为73.8%、54.7%和41.1%。结论:针对PCNA的DNAZYME能有效抑制HUASMC 的体外增殖。 展开更多
关键词 DNA 催化性 增殖细胞核抗原 平滑 血管 细胞周期
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