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1,25-二羟维生素D3对人胃腺癌细胞诱导分化的实验研究 被引量:5
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作者 卢方安 卢娟 +2 位作者 朱志芬 于龙顺 潘龙瑞 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第6期814-817,共4页
目的观察1,25-二羟维生素D3对胃腺癌MGC-803细胞的诱导分化作用。方法1,25-二羟维生素D3(10-6、10-5、10-4mmol.L-1)作用于MGC-803细胞后,应用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法测定细胞增殖能力、平板克隆试验测定细胞集落形成率、流式细胞仪测定... 目的观察1,25-二羟维生素D3对胃腺癌MGC-803细胞的诱导分化作用。方法1,25-二羟维生素D3(10-6、10-5、10-4mmol.L-1)作用于MGC-803细胞后,应用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法测定细胞增殖能力、平板克隆试验测定细胞集落形成率、流式细胞仪测定细胞周期、TRAP-银染法测定端粒酶活性。结果1,25-二羟维生素D3作用24、48、72和96h后胃腺癌细胞生长均明显受抑制,48h后细胞周期出现向G0/G1期移行的特征性动力学改变,端粒酶活性明显受到抑制。细胞集落形成率明显下降(P<0.05)。结论1,25-二羟维生素D3对人胃腺癌细胞有诱导分化作用。 展开更多
关键词 1 25-二羟维生素D 胃腺癌细胞 诱导分化
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骨髓基质干细胞的分离纯化及培养 被引量:5
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作者 阮绪芝 陈霞萍 +1 位作者 严世荣 王卫民 《生物学杂志》 CAS CSCD 2004年第2期25-27,共3页
目的 建立骨髓基质干细胞(MSCs)良好的分离纯化和培养方法。方法 将小鼠骨髓基质干细胞自股骨中分离,应用贴壁选择法结合细胞克隆挑选法进行分离纯化,应用细胞生长因子(EGF和PDGF-BB)刺激法进行MSCs的体外培养和传代,倒置显微镜下观... 目的 建立骨髓基质干细胞(MSCs)良好的分离纯化和培养方法。方法 将小鼠骨髓基质干细胞自股骨中分离,应用贴壁选择法结合细胞克隆挑选法进行分离纯化,应用细胞生长因子(EGF和PDGF-BB)刺激法进行MSCs的体外培养和传代,倒置显微镜下观察分离培养的细胞并照像记录。结果,培养获得了纯化的呈梭形成纤维样细胞的骨髓基质干细胞。在生长因子EGF和PDGF-BB的共同作用下,传代MSCs生长旺盛,形态均一。结论 该方法是简便高效的骨髓基质干细胞的分离纯化和培养方法。 展开更多
关键词 小鼠 骨髓基质干细胞 细胞培养
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EBV-DNA酶全基因扩增克隆和鉴定 被引量:7
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作者 朱振宇 严世荣 +2 位作者 黄迪 陈尚武 马涧泉 《中山医科大学学报》 CSCD 1995年第4期5-8,共4页
根据Bear的EB病毒(EBV)基因全序列,设计包括EBV特异性DNA酶全基因的一对引物,在引物上设计有一个SalⅠ切点,以便于克隆。选用蛋白酶K裂解的Raji细胞DNA为模板,扩增出一条1460bp的特异条带,纯比... 根据Bear的EB病毒(EBV)基因全序列,设计包括EBV特异性DNA酶全基因的一对引物,在引物上设计有一个SalⅠ切点,以便于克隆。选用蛋白酶K裂解的Raji细胞DNA为模板,扩增出一条1460bp的特异条带,纯比后经TaqⅠ酶切形成1198bp和262bp的两个片段,证实该扩增片段即为EBV特异性DNA酶的全基因片段。以JM103为宿主菌,以高效表达质粒PBV221为载体,按常规方法作酶切、连接、转化,最后在含氨中青霉素的培养基上挑取单菌落扩大培养,用快速法少量制备质粒DNA。根据质粒电泳结果粗筛,再行BamHⅠ酶切初步鉴定,确定质粒大小为5117(1451+3666)bp的菌落为阳性克隆。先后用BamHⅠ和TaqⅠ消化阳性重组体,以形成1200bp和3917bp两片段的确定为正向连接重组体。 展开更多
关键词 聚合酶链反应 克隆 分子 DNA酶基因 EB病毒
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pET28a-TAT-LacZ重组子的构建 被引量:3
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作者 严世荣 龚坚 +1 位作者 严洁 邱云城 《遗传》 CAS CSCD 北大核心 2003年第2期141-144,共4页
为了构建高表达pET28a-TAT-LacZ重组子,观察表达的融合蛋白TAT-β-Gal能否穿过生物膜,使用人工合成编码TAT蛋白转导区的DNA片段,插入载体pET28a组氨酸编码区后再连接lacZ基因,组成pET28a-TAT-LacZ重组表达子,转化大肠杆菌,利用组氨酸亲... 为了构建高表达pET28a-TAT-LacZ重组子,观察表达的融合蛋白TAT-β-Gal能否穿过生物膜,使用人工合成编码TAT蛋白转导区的DNA片段,插入载体pET28a组氨酸编码区后再连接lacZ基因,组成pET28a-TAT-LacZ重组表达子,转化大肠杆菌,利用组氨酸亲和层析柱纯化TAT-β-Gal融合蛋白,将融合蛋白加入培养的平滑肌细胞。得到高度纯化的、有活性的TAT-β-Gal融合蛋白,TAT-β-Gal在短时间内进入体外培养平滑肌细胞,成功地构建了高表达pET28a-TAT-LacZ重组子,并在体外培养的细胞中证实TAT-β-Gal融合蛋白穿透生物膜的能力,为肽类、生物大分子药物进入组织细胞内发挥治疗作用提供了理论基础。 展开更多
关键词 pET28a质粒 TAT蛋白转导区 TAT-β-Gal融合蛋白 平滑肌细胞
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人内皮抑素在大肠杆菌中的高效表达及活性研究 被引量:1
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作者 张革 柯细松 +3 位作者 丁爱玲 银巍 杨琨 朱振宇 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2002年第11期1370-1373,共4页
目的 :表达人内皮抑素蛋白 ,制备多克隆抗体 ,检测其生物学活性。方法 :采用PCR法扩增人内皮抑素基因 ,构建pGEX -ES融合表达载体 ,IPTG(异丙基硫代 - β-D半乳糖苷 )诱导表达。初步纯化的内皮抑素包含体蛋白制备兔多克隆抗体 ,Western ... 目的 :表达人内皮抑素蛋白 ,制备多克隆抗体 ,检测其生物学活性。方法 :采用PCR法扩增人内皮抑素基因 ,构建pGEX -ES融合表达载体 ,IPTG(异丙基硫代 - β-D半乳糖苷 )诱导表达。初步纯化的内皮抑素包含体蛋白制备兔多克隆抗体 ,Western -blot检测其在小鼠肝、肾等的表达。亲和纯化的内皮抑素蛋白用内皮细胞抑制实验检测其生物学活性。结果 :诱导表达的人内皮抑素蛋白经凝血酶酶切后 ,分子量约为 2 0kD ,具有抑制内皮细胞生长的活性。制备的多克隆抗体检测出内皮抑素在小鼠肝、肾等组织的表达。结论 展开更多
关键词 内皮抑素 大肠杆菌 抗体 生物学活性 PCR法 实体瘤 单克隆抗体
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黑木耳抗动脉粥样硬化的实验研究 被引量:6
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作者 肖瑛 黄永章 +1 位作者 熊秀敏 孙鹏飞 《同济医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 1990年第5期328-331,共4页
本文观察黑木耳对实验性动脉粥样硬化(AS)家兔AS病变及有关生化指标的影响。实验结果,黑木耳有降低血浆胆固醇(TC)、过氧化脂质(LPO)、血栓素A_2(TXA_2)的含量,提高前列环素/血栓素A_2(PGI_2/TXA_2)比值,减轻AS病变的作用。表明黑木耳... 本文观察黑木耳对实验性动脉粥样硬化(AS)家兔AS病变及有关生化指标的影响。实验结果,黑木耳有降低血浆胆固醇(TC)、过氧化脂质(LPO)、血栓素A_2(TXA_2)的含量,提高前列环素/血栓素A_2(PGI_2/TXA_2)比值,减轻AS病变的作用。表明黑木耳具有抗AS作用。其机理可能是通过降血TC,保护动脉内膜,抑制血小板聚集,并由此抑制TXA_2合成;血TC降低亦可减少脂质过氧化,从而使环氧化酶、TXA_2合成酶活性降低,TXA_2合成减少。黑木耳通过以上途径维系PGI_2/TXA_2平衡,保护血管完整性的内环境相对稳定,对抗动脉粥样硬化的发生。 展开更多
关键词 黑木耳 动脉粥样硬化
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