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题名人水通道蛋白4胞外区的原核表达及纯化
被引量：3
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作者
张迎娜
高峰
方华
赵雪
张婧
杜英
潘卫东
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机构
郑州大学基础医学院微生物学与免疫学教研室
河南省医药科学研究院神经免疫学研究室
郑州市神经免疫学重点实验室
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出处
《郑州大学学报（医学版）》
CAS
北大核心
2015年第5期601-606,共6页
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基金
国家自然科学基金资助项目30570625
河南省省属科研单位社会公益项目预研专项资金资助项目
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文摘
目的:利用原核表达系统融合表达人水通道蛋白4(AQP4)胞外区,并进行纯化及鉴定。方法:根据大肠埃希菌密码子偏嗜性及后续实验需要设计并人工合成AQP4胞外区序列,退火形成双链后克隆至pET32a(+)载体,构建原核重组表达质粒,转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导表达。表达的融合蛋白经Ni2+亲和层析柱纯化后,进行SDS-PAGE和Western blot鉴定。结果:重组表达质粒经双酶切和测序鉴定构建正确;表达的融合蛋白pET32a(+)-AQP4胞外区相对分子质量约为26 000,可与鼠抗组氨酸单克隆抗体特异性结合,可以可溶性形式存在于上清液中,纯化的融合蛋白纯度达70%以上。结论:成功构建了重组表达质粒pET32a(+)-AQP4胞外区,并成功表达融合蛋白。
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关键词
水通道蛋白4
原核细胞
融合蛋白
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Keywords
aquaporin 4
prokaryotie cell
fusion protein
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分类号
R744.52
[医药卫生—神经病学与精神病学]
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