期刊文献+
共找到5篇文章
< 1 >
每页显示 20 50 100
EC9706和Eca109细胞中雷帕霉素靶蛋白信号通路激活状态观察 被引量:11
1
作者 侯桂琴 范天黎 +4 位作者 鲁照明 刘兰琦 许培荣 薛乐勋 王建人 《郑州大学学报(医学版)》 CAS 北大核心 2007年第2期223-225,共3页
目的:观察低分化的食管鳞癌细胞EC9706和高分化的食管鳞癌细胞Eca109中雷帕霉素靶蛋白(mTOR)信号转导通路的激活状态。方法:采用细胞免疫组织化学方法检测EC9706和Eca109细胞中mTOR及其下游靶分子p70S6K的表达和定位,并采用RT-PCR和West... 目的:观察低分化的食管鳞癌细胞EC9706和高分化的食管鳞癌细胞Eca109中雷帕霉素靶蛋白(mTOR)信号转导通路的激活状态。方法:采用细胞免疫组织化学方法检测EC9706和Eca109细胞中mTOR及其下游靶分子p70S6K的表达和定位,并采用RT-PCR和Westernblot方法分别从mRNA及蛋白水平检测此通路的活性。结果:在2种细胞中mTOR均有表达,且在EC9706细胞中的表达水平高于Eca109(P<0.05);EC9706细胞中mTOR下游靶点的磷酸化水平高于Eca109细胞(P<0.05)。结论:在2种食管鳞癌细胞中,mTOR信号通路均特异性激活;但激活状态与细胞的分化程度有关,细胞分化程度低者通路的激活水平较高。 展开更多
关键词 食管癌 雷帕霉素靶蛋白 p70S6激酶 EC9706细胞 ECA109细胞
在线阅读 下载PDF
SOEing法构建EGFP真核表达载体及其在杜氏盐藻中的表达 被引量:1
2
作者 李杰 闫红霞 +3 位作者 曲东京 刘红涛 鲁照明 薛乐勋 《水生生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第4期546-551,共6页
通过重叠区扩增基因拼接法(Gene splicing by overlap extension,SOEing)构建含有杜氏盐藻(Dunaliella salina)硝酸盐还原酶(NR)基因5′-上游序列(Pnr)and 3′-端序列(Tnr)的EGFP真核表达载体,并将其转化杜氏盐藻。利用改进的SOEing法,... 通过重叠区扩增基因拼接法(Gene splicing by overlap extension,SOEing)构建含有杜氏盐藻(Dunaliella salina)硝酸盐还原酶(NR)基因5′-上游序列(Pnr)and 3′-端序列(Tnr)的EGFP真核表达载体,并将其转化杜氏盐藻。利用改进的SOEing法,将杜氏盐藻NR基因Pnr与报告基因EGFP cDNA融合,并与pEGM-7zf克隆载体连接,顺序将盐藻NR基因Tnr序列与融合片段相连,构建含Pnr-EGFP-Tnr表达盒的盐藻真核表达载体p7NET。电击法转化杜氏盐藻,在盐藻转化株中观察到了EGFP的瞬时表达。此研究为转基因杜氏盐藻研究和成功建立杜氏盐藻生物反应器奠定了实验基础。 展开更多
关键词 杜氏盐藻 重叠区扩增基因拼接法(SOEing) 增强型绿色荧光蛋白(EGFP) 真核表达载体
在线阅读 下载PDF
杜氏盐藻硝酸盐还原酶基因5′上游序列的克隆与序列分析 被引量:1
3
作者 李杰 刘红涛 +3 位作者 鲁照明 李慎柯 宋贤瑞 薛乐勋 《郑州大学学报(医学版)》 CAS 北大核心 2007年第2期219-222,共4页
目的:克隆杜氏盐藻硝酸盐还原酶(NR)基因5′上游序列,并对其进行测序和序列分析。方法:提取杜氏盐藻基因组DNA,经过BamHI、EcoRI、HindⅢ、PstI、SalⅠ及XbalⅠ限制性内切酶分别酶切后,再与相应接头连接,分别构建盐藻步行基因组文库BL... 目的:克隆杜氏盐藻硝酸盐还原酶(NR)基因5′上游序列,并对其进行测序和序列分析。方法:提取杜氏盐藻基因组DNA,经过BamHI、EcoRI、HindⅢ、PstI、SalⅠ及XbalⅠ限制性内切酶分别酶切后,再与相应接头连接,分别构建盐藻步行基因组文库BL、EL、HL、PL、SL和XL。采用巢式(LA)-PCR方法,从上述步行基因组文库中扩增杜氏盐藻NR基因5′上游序列,克隆至pMD18-T,对酶切鉴定正确的克隆进行测序。结果:从HL里扩出约1200bp特异性片断,回收此片段并进行T载体克隆,对阳性克隆测序。该序列的3′端与已知NR基因cDNA5′端序列完全一致。该序列含有多个与转录调控有关的保守序列(如CAAT-box和GAGA-box),含有与EBP、EFII、NF-E1、LV等转录因子以及广谱激活剂Oct-1结合位点相似的核苷酸序列。结论:采用LA-PCR基因组步行方法,从已知cDNA周围未知启动子或其他调控区域中克隆得到的NR基因的5′上游区序列,可能是一种新的杜氏盐藻启动子区序列。 展开更多
关键词 杜氏盐藻 硝酸盐还原酶 基因克隆
在线阅读 下载PDF
Notch1基因C端特征结构域pcDNA3.1-AN真核表达载体的构建
4
作者 鲁照明 王莉莉 +3 位作者 张爱琴 许培荣 刘红涛 薛乐勋 《郑州大学学报(医学版)》 CAS 北大核心 2007年第2期228-230,共3页
目的:扩增人胎盘组织Notch1基因C端特征性结构域ANK和NLS(简称AN),并构建pcDNA3.1-AN真核表达载体。方法:按照GenBank中Notch1序列,设计一对引物,利用RT-PCR方法从人胎盘组织中获取ANcDNA片段,将其克隆至真核表达质粒pcDNA3.1(+)中,构... 目的:扩增人胎盘组织Notch1基因C端特征性结构域ANK和NLS(简称AN),并构建pcDNA3.1-AN真核表达载体。方法:按照GenBank中Notch1序列,设计一对引物,利用RT-PCR方法从人胎盘组织中获取ANcDNA片段,将其克隆至真核表达质粒pcDNA3.1(+)中,构建重组真核表达载体pcDNA3.1-AN。结果:所获得的序列是Notch1特征性的AN结构域。结论:成功构建了pcDNA3.1-AN真核表达载体。 展开更多
关键词 NOTCHL ANK结构域 NLS结构域 PCDNA3.1
在线阅读 下载PDF
杜氏盐藻泛素基因cDNA的克隆及系统进化分析
5
作者 刘玲玲 李杰 +2 位作者 宋贤瑞 梁建阳 薛乐勋 《生物学杂志》 CAS CSCD 2008年第2期19-22,共4页
根据玉米,水稻等物种泛素序列设计一对简并引物。提取杜氏盐藻细胞的总RNA,利用RT-PCR方法扩增盐藻泛素基因的cDNA片断,回收两个长度不同的片断ubi-1和ubi-2,将其克隆到pMD18-T载体上,测序后进行序列分析,为克隆杜氏盐藻泛素基因... 根据玉米,水稻等物种泛素序列设计一对简并引物。提取杜氏盐藻细胞的总RNA,利用RT-PCR方法扩增盐藻泛素基因的cDNA片断,回收两个长度不同的片断ubi-1和ubi-2,将其克隆到pMD18-T载体上,测序后进行序列分析,为克隆杜氏盐藻泛素基因的cDNA序列并进行进化分析。结果ubi-1经测序后得到一个完整拷贝(228bp)和一个不完整的泛素cDNA序列(191bp)。Ubi-2经测序后得到两个拷贝(556bp)和一个不完整的泛素cDNA序列(191bp)。盐藻3个不同拷贝泛素cDNA序列之间存在差异,但所编码氨基酸序列相同。盐藻泛素cDNA序列与其他物种的泛素cDNA序列具有高的同源(70%~85%),所推导的氨基酸序列与其他物种仅存在1~2个氨基酸的差异。进化分析显示,所分离的盐藻泛素基因与两个模式生物果蝇和衣藻的泛素基因共处一个进化支.彼此亲缘关系最近。盐藻泛素基因与其他物种的泛素基因可能来自共同的“祖先”基因,在进化中高度保守。 展开更多
关键词 杜氏盐藻 泛素基因 进化分析
在线阅读 下载PDF
上一页 1 下一页 到第
使用帮助 返回顶部