8-Br-cAMP和槲皮素对Eca-109细胞DNApolβ基因及相关基因表达的影响 被引量：8

1

作者 李士坤 郑乃刚 +2 位作者 吴景兰 白经修 董子明 《郑州大学学报（医学版）》 CAS 北大核心 2003年第5期663-666,共4页

目的 :探讨 8 Br cAMP及槲皮素等分化诱导剂对Eca 10 9细胞DNApolβ基因及相关基因表达的影响。 方法 :将培养的Eca 10 9细胞分为 3组 :①加 8 Br cAMP组 (Br组 ) ;②加槲皮素组 (Q组 ) ;③不加任何药物对照组 (C组 )。同时培养 4 8h ,... 目的 :探讨 8 Br cAMP及槲皮素等分化诱导剂对Eca 10 9细胞DNApolβ基因及相关基因表达的影响。 方法 :将培养的Eca 10 9细胞分为 3组 :①加 8 Br cAMP组 (Br组 ) ;②加槲皮素组 (Q组 ) ;③不加任何药物对照组 (C组 )。同时培养 4 8h ,将野生型DNApolβ的cDNA ,EGFRcDNA ,野生型 (wt)p5 3cDNA及c myccDNA分别制备了生物素 /地高辛标记的探针进行原位杂交和RNA斑点印迹阵列。另进行POLB ,XRCC1,VEGF及PCNA的免疫组化染色及免疫斑点印迹阵列。结果 :Br组和Q组的DNApolβ ,EGFR ,c myc基因表达下调而wtp5 3基因表达上调。POLB ,XRCC1,PCNA及VEGF免疫斑点印迹减弱。 8 Br cAMP及槲皮素显著下调Eca 10 9细胞的DNApolβ基因表达及相关癌基因表达 ,同时上调抑癌基因的表达。作为POLB的异二聚体XRCC1及恶性细胞生物标志的PCNA及VEGF表达下调。结论 :分化诱导剂下调Eca 10 9细胞DNApolβ基因表达 ,提示Eca 10 9细胞的polβ基因是高表达的 ;功能调整后的polβ通过相关基因表达的改变尤其是wtp5 展开更多

关键词 DNA聚合酶Β 基因表达 ECA-109细胞 8-BR-CAMP 槲皮素 食管鳞状上皮癌

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食管鳞癌和腺癌转录组差异基因综合分析 被引量：4

2

作者 李雨濛 马佳康 +5 位作者 任凯凯 李南 王健 孙金旗 张亚丽 马军 《医学研究生学报》 CAS 北大核心 2019年第7期715-719,共5页

目的食管鳞癌和腺癌在分组特征方面有多大的差异目前并不明确。文中旨在分析食管鳞癌、食管腺癌转录组分子特征的差异性。方法下载TCGA数据库中食管鳞癌和腺癌转录组数据,筛选癌及癌旁组织差异表达的RNA(mRNA、lncRNA、miRNA),构建食管... 目的食管鳞癌和腺癌在分组特征方面有多大的差异目前并不明确。文中旨在分析食管鳞癌、食管腺癌转录组分子特征的差异性。方法下载TCGA数据库中食管鳞癌和腺癌转录组数据,筛选癌及癌旁组织差异表达的RNA(mRNA、lncRNA、miRNA),构建食管鳞癌和腺癌相关的竞争性内源RNA(ceRNA)网络,对重要miRNA进行靶基因预测及GO、KEGG分析,利用生存分析显示食管鳞癌和腺癌共有差异基因。结果ceRNA网络显示:PVT1、LINC00524、miR-204、miR-383、HOXC8、NTRK2等在食管鳞癌和腺癌中均起重要调控作用。miR-204-5p经miRWalk共预测到13227个调控靶基因,在targetscan,miRDB数据库共筛选出232个靶基因。GO功能分析显示38个富集,主要参与细胞-基质粘附的调节、细胞膜投射形态发生、β-连环蛋白结合等过程。KEGG分析显示4个相关通路:Hedgehog信号通路、寿命调节通路、雌激素信号通路、松弛素信号通路。生存分析结果显示,食管鳞癌中与患者生存相关的差异lncRNA包括LINC00261、MLIP-IT1、LINC00504,差异miRNA包括hsa-mir-338,未发现与生存相关的mRNA。食管腺癌中与生存相关的差异lncRNA包括CYP1B1-AS1、HOTAIR,差异mRNA包括IL11、NTRK2、ANGPT2、PBK。食管鳞癌和腺癌共有的差异lncRNA上调占15.4%(150个),下调占26.8%(158个);miRNA上调占24.2%(22个),下调占27.6%(8个);mRNA上调占20.5%(234个),下调占23.7%(418个)。结论食管鳞癌和腺癌存在明显的分子差异,lncRNA、miRNA及mRNA有望为食管癌的治疗和预后预测提供新的靶点与分子标志物。 展开更多

关键词 食管鳞癌 食管腺癌 转录组 分子特征 ceRNA网络 生存分析

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8-Br-cAMP与顺铂对Eca-109细胞DNA polβ,wtp53基因表达及多药耐受蛋白的影响 被引量：4

3

作者 郑乃刚 李士坤 +1 位作者 吴景兰 董子明 《郑州大学学报（医学版）》 CAS 北大核心 2003年第5期657-660,共4页

目的 :比较分化诱导剂 8 Br cAMP与基因毒性药物顺铂对Eca 10 9细胞DNApolβ及wtp5 3基因表达和多药耐受蛋白的影响。方法 :分别制备生物素和地高辛标记的polβ探针和生物素标记的野生型p5 3(wtp5 3)探针 ,并检测各探针灵敏度。将培养... 目的 :比较分化诱导剂 8 Br cAMP与基因毒性药物顺铂对Eca 10 9细胞DNApolβ及wtp5 3基因表达和多药耐受蛋白的影响。方法 :分别制备生物素和地高辛标记的polβ探针和生物素标记的野生型p5 3(wtp5 3)探针 ,并检测各探针灵敏度。将培养的人食管癌Eca 10 9细胞分组如下 :① 8 Br cAMP组 (Br组 ) ;②不加 8 Br cAMP的对照组 (C1组 ) ,①②组同时培养 4 8h ;③顺铂组 (Pt组 ) ;④不加Pt的对照组 (C2组 ) ,③④组同时培养 2 4h。应用原位杂交技术显示各组细胞polβ基因的表达。对①②及③组细胞进行polβ及wtp5 3双信号原位杂交 ,并应用多药耐受蛋白 (MRP)的免疫组化方法检测耐药性。结果 :生物素标记的polβ探针的杂交信号呈兰紫色细颗粒 ,分布于胞质 ;Br组信号弱于C1组 ,P <0 .0 5。Pt组的信号比C2组强 ,P <0 .0 5。Br组的MRP IR弱于C1组 ,P <0 .0 5 ;Pt组的多药耐受蛋白免疫反应性 (MRP IR)强于C2组 ,P <0 .0 5。地高辛标记的polβ探针的杂交信号呈橙色细颗粒 ,生物素标记的wtp5 3探针的杂交信号呈蓝紫色细颗粒 ,均分布于胞质。在双杂交信号细胞内C1组的橙色强于蓝紫色信号 ;而Br组的蓝紫色信号较明显 ,Pt组的橙色信号较C1组更显著 ,3组相比P皆 <0 .0 5。结论 :8 Br cAMP可下调polβ基因表达及耐药性 ,上? 展开更多

关键词 DNA聚合酶Β 8-BR-CAMP 顺铂 WTP53 耐药性 ECA-109细胞 食管癌

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大鼠急性心肌梗死区同种异体骨髓单个核细胞移植观察 被引量：2

4

作者 法宪恩 侯剑峰 +4 位作者 王丽霞 张红伟 马军 王海永 张瑞成 《郑州大学学报（医学版）》 CAS 北大核心 2006年第1期83-85,共3页

目的:探讨同种异体骨髓单个核细胞(BM-MNCs)在急性心肌梗死区分化增殖潜能及其修复重建心肌作用,为细胞移植治疗急性心肌梗死提供新种子细胞。方法:健康雄性Wistar大鼠20只,随机分为急性心肌梗死对照组(10只)和急性心肌梗死实验组(10只... 目的:探讨同种异体骨髓单个核细胞(BM-MNCs)在急性心肌梗死区分化增殖潜能及其修复重建心肌作用,为细胞移植治疗急性心肌梗死提供新种子细胞。方法:健康雄性Wistar大鼠20只,随机分为急性心肌梗死对照组(10只)和急性心肌梗死实验组(10只)。用结扎冠状动脉左前降支的方法建立大鼠心肌梗死模型,分别将培养基和制备的BM-MNCs悬液心外膜下植入梗死心肌周围,移植术后4周,观察心肌梗死区及其周边区组织形态学特点、心肌梗死面积变化。结果:移植术后4周,实验组与对照组相比心肌梗死面积缩小(P<0.01);实验组心肌梗死区内有BrdU标记阳性的BM-MNCs移植细胞存活,向心肌源性细胞分化并且诱导了大量的新生毛细血管。结论:同种异体BM-MNCs在细胞水平完成了对心肌梗死区再心肌化和再血管化过程,是治疗急性心肌梗死的理想种子细胞。 展开更多

关键词 骨髓单个核细胞 心肌梗死 细胞移植 同种异体 大鼠

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同一细胞非放射性双原位杂交信号显示技术 被引量：2

5

作者 郑乃刚 王峰 +3 位作者 吴景兰 李士坤 张莹 董子明 《郑州大学学报（医学版）》 CAS 北大核心 2003年第5期661-662,共2页

目的 :探讨同一细胞内双原位杂交信号的显示技术。方法 :以地高辛标记的polβ探针加生物素标记的表皮生长因子受体 (EGFR)探针或生物素标记的wtp5 3探针对人食管癌Eca 10 9细胞同时进行原位杂交后 ,以anti Dig AP孵育 ,以AP Red为底物显... 目的 :探讨同一细胞内双原位杂交信号的显示技术。方法 :以地高辛标记的polβ探针加生物素标记的表皮生长因子受体 (EGFR)探针或生物素标记的wtp5 3探针对人食管癌Eca 10 9细胞同时进行原位杂交后 ,以anti Dig AP孵育 ,以AP Red为底物显色 ,杂交信号呈桔红色或桔黄色细颗粒。继之以SA AP孵育后以NBT/BCIP底物显色 ,杂交信号呈蓝紫色颗粒。结果 :在同一细胞内可见桔黄色和蓝紫色颗粒双杂交信号。结论 :应用非放射性双杂交信号的原位杂交技术可观察单个细胞内 展开更多

关键词 双杂交信号 原位杂交技术 非放射性 地高辛标记 食管癌

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尿素酶试验检测幽门螺杆菌 被引量：1

6

作者 张玉林 蒋笑平 +2 位作者 虎建恩 李靖若 段芳龄 《郑州大学学报（医学版）》 CAS 北大核心 2004年第1期133-134,共2页

关键词 尿素酶 幽门螺杆菌 细菌培养 PCR法 胶体金免疫渗滤法

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宫颈癌相关新癌基因hWAPL的原核表达和免疫原性分析 被引量：1

7

作者 曹春霞 马军 +3 位作者 寻萌 薛欣 陈萍 楚雍烈 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第6期562-564,共3页

目的:构建hWAPL原核表达载体,诱导hWAPL蛋白表达并制备其多克隆抗体。方法:RT-PCR技术扩增hWAPL cDNA片段,连接到pMD18-T载体,测序正确后亚克隆入原核表达载体pET28a并转化BL21菌株,用SDS-PAGE电泳鉴定重组菌的诱导表达情况,制备hWAPL... 目的:构建hWAPL原核表达载体,诱导hWAPL蛋白表达并制备其多克隆抗体。方法:RT-PCR技术扩增hWAPL cDNA片段,连接到pMD18-T载体,测序正确后亚克隆入原核表达载体pET28a并转化BL21菌株,用SDS-PAGE电泳鉴定重组菌的诱导表达情况,制备hWAPL蛋白并免疫BALB/c小鼠,ELISA法测定其抗体效价,Western blot鉴定表达hWAPL蛋白的免疫原性。结果:①经PCR、双酶切鉴定和测序,证实hWAPL正确插入pMD18-T载体,序列正确。②经IPTG诱导的pET28a-hWAPL重组菌表达出相对分子质量(Mr)约为25000的蛋白,与预期蛋白Mr相符。③免疫小鼠后测得的平均抗体效价为1∶3200。④Western blot结果显示Mr约25000处有反应蛋白条带。结论:pET28a载体能够表达hWAPL蛋白,表达蛋白具有良好的免疫原性,其免疫小鼠后获得的多克隆抗体具有高效价和特异性。 展开更多

关键词 hWAPL 原核表达 多克隆抗体 宫颈癌

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胃腺癌中ceRNA网络的构建和miR-204-5p、HOXC8基因的表达及其相关性检测 被引量：3

8

作者 王蕾 任凯凯 +5 位作者 马佳康 陈小华 张萌迪 李丹丹 李晓娜 马军 《郑州大学学报（医学版）》 CAS 北大核心 2019年第5期737-740,共4页

目的:构建胃腺癌竞争性内源RNA(ceRNA)网络,并观察miR-204-5p和HOXC8 mRNA之间的相关性。方法:利用生物信息学方法和TCGA转录组数据库筛选胃腺癌差异基因,构建ceRNA网络,检测了miR-204-5p和HOXC8 mRNA在胃腺癌组织和SGC7901细胞株中的表... 目的:构建胃腺癌竞争性内源RNA(ceRNA)网络,并观察miR-204-5p和HOXC8 mRNA之间的相关性。方法:利用生物信息学方法和TCGA转录组数据库筛选胃腺癌差异基因,构建ceRNA网络,检测了miR-204-5p和HOXC8 mRNA在胃腺癌组织和SGC7901细胞株中的表达,并分析了两基因间的相互关系。结果:成功构建胃腺癌ceRNA网络,miR-204-5p是重要节点基因,并预测到其靶基因HOXC8;在32例胃腺癌中检测到miR-204-5p低表达,HOXC8高表达,两者呈负相关关系;上调胃腺癌SGC7901细胞中miR-204-5p的表达可以抑制HOXC8 mRNA的表达。结论:miR-204-5p和HOXC8可能是潜在的胃腺癌诊断指标,两者可能存在ceRNA调控关系。 展开更多

关键词 胃腺癌 竞争性内源RNA网络 miR-204-5p HOXC8

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食管鳞状细胞癌组织中Galectin-9和MMP-2蛋白的表达及与预后的关系 被引量：5

9

作者 郭素平 马军 +3 位作者 唐芙爱 鲁迪 段芳龄 郭琦 《郑州大学学报（医学版）》 CAS 北大核心 2012年第6期749-752,共4页

目的:探讨食管鳞状细胞癌(简称食管鳞癌)组织中Galectin-9和MMP-2蛋白的表达及与预后的关系。方法:制备组织芯片,应用免疫组化SP法检测63例食管鳞癌及其癌旁正常食管黏膜组织中Galectin-9和MMP-2蛋白的表达,分析2种蛋白的表达与临床病... 目的:探讨食管鳞状细胞癌(简称食管鳞癌)组织中Galectin-9和MMP-2蛋白的表达及与预后的关系。方法:制备组织芯片,应用免疫组化SP法检测63例食管鳞癌及其癌旁正常食管黏膜组织中Galectin-9和MMP-2蛋白的表达,分析2种蛋白的表达与临床病理指标和预后的关系。结果:食管鳞癌组织中Galectin-9蛋白的阳性表达率为62.5%,低于癌旁正常食管黏膜组织的89.3%(χ2=11.529,P<0.001),其表达与肿瘤的分化程度有关(P=0.001),且阳性表达者生存期更长(P=0.013)。食管鳞癌组织中MMP-2蛋白的阳性表达率为67.9%,高于癌旁正常食管黏膜组织的35.7%(χ2=9.633,P=0.001),其表达与肿瘤浸润深度、TNM分期、淋巴结转移有关(P均<0.05),且阳性表达者生存期较短(P=0.036)。结论:食管鳞癌组织中Galectin-9低表达,MMP-2高表达;检测二者可用于判断食管鳞癌预后。 展开更多

关键词 食管肿瘤 鳞状细胞癌 组织芯片 半乳糖凝集素-9 基质金属蛋白酶-2 预后

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侵袭及非侵袭性KYSE150细胞的体外分离及p75NTR的表达 被引量：3

10

作者 张丽荣 郭长青 +4 位作者 李印 马军 高红伟 曹新广 于泳 《郑州大学学报（医学版）》 CAS 北大核心 2008年第4期631-633,共3页

目的:体外分离人食管鳞状细胞癌(ESCC)KYSE150细胞系侵袭和非侵袭性细胞亚系,比较2种细胞亚系p75NTR的表达。方法:用涂有Matrigel的Transwell小室对KYSE150进行体外侵袭实验,回收侵袭性和非侵袭性细胞,用免疫细胞化学SP法检测2者p75NTR... 目的:体外分离人食管鳞状细胞癌(ESCC)KYSE150细胞系侵袭和非侵袭性细胞亚系,比较2种细胞亚系p75NTR的表达。方法:用涂有Matrigel的Transwell小室对KYSE150进行体外侵袭实验,回收侵袭性和非侵袭性细胞,用免疫细胞化学SP法检测2者p75NTR的表达情况。结果:镜下观察,2种细胞亚系形态无明显差异。侵袭性细胞亚系p75NTR表达较非侵袭性细胞亚系显著增高,差异有统计学意义(P<0.01)。结论:用涂有Matrigel的Tanswell可成功分离及回收侵袭性和非侵袭性KYSE150细胞;可能存在ESCC干细胞。 展开更多

关键词 食管肿瘤 鳞状细胞癌 侵袭 细胞分离 P75NTR

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ADAMTS9-AS1-SEMA3G通路对胰腺癌组织中免疫细胞的影响 被引量：1

11

作者 马佳康 任凯凯 +3 位作者 蔺小艳 侯明宇 周博 马军 《医学研究生学报》 CAS 北大核心 2020年第2期169-173,共5页

目的影响胰腺癌中免疫细胞浸润的机制尚未明确。文章旨在研究胰腺癌中影响免疫浸润相关的lncRNA-mRNA调控通路。方法利用TCGA以及GEO基因表达数据筛选共同的差异lncRNAs,并对筛选出的差异lncRNAs进行生存分析、靶基因预测、GO、KEGG富... 目的影响胰腺癌中免疫细胞浸润的机制尚未明确。文章旨在研究胰腺癌中影响免疫浸润相关的lncRNA-mRNA调控通路。方法利用TCGA以及GEO基因表达数据筛选共同的差异lncRNAs,并对筛选出的差异lncRNAs进行生存分析、靶基因预测、GO、KEGG富集分析、免疫浸润分析以及基因集富集分析(GSEA),找到免疫浸润相关通路。结果 ADAMTS9-AS1高表达的胰腺癌患者较低表达患者有更高的生存率(P=0.010)。ADAMTS9-AS1相关性较强的差异mRNA,GO富集结果共筛选到356个条目,结果与免疫相关,如白细胞-细胞黏附、肿瘤坏死因子超家族细胞因子产生的调控等;KEGG结果共筛选到9个通路,分别为金黄色葡萄球菌感染、细胞周期、补体和凝血级联、卵母细胞减数分裂、孕酮介导的卵母细胞成熟、破骨细胞分化、类风湿关节炎、百日咳以及人T细胞白血病病毒1感染。对照IMMPORT数据库中2498个肿瘤免疫相关基因,发现SEMA3G为免疫相关基因,且与ADAMTS9-AS1相关性最高(r=0.657,P<0.05)。ADAMTS9-AS1及SEMA3G的表达与免疫细胞浸润呈正相关(P<0.05)。GSEA富集分析结果显示ADAMTS9-AS1也可能与柠檬酸盐循环、脂肪酸代谢、甘氨酸、丝氨酸和苏氨酸代谢、溶酶体、过氧化物酶体、丙酸盐代谢、蛋白酶体、丙酮酸盐代谢、核糖体、缬氨酸-亮氨酸和异亮氨酸降解通路相关。结论 ADAMTS9-AS1-SEMA3G与胰腺癌的预后和免疫浸润水平相关,可为后续的基因验证实验和免疫研究提供理论依据。 展开更多

关键词 胰腺癌 长链非编码RNA 免疫浸润 通路 生存

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