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丝裂霉素C诱导PRK后角膜基质细胞凋亡的实验研究 被引量:1
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作者 李金 王卫群 《眼科研究》 CAS CSCD 北大核心 2008年第8期575-578,共4页
目的探讨丝裂霉素C(MMC)对准分子激光角膜切削术(PRK)后角膜基质细胞凋亡的影响。方法30只兔随机取1只眼行PRK并术中使用0.02%MMC为PRK+MMC组,另1只眼仅行PRK设为PRK组,2只兔设为正常对照组。观察角膜上皮下混浊(haze)程度;采用苏木精-... 目的探讨丝裂霉素C(MMC)对准分子激光角膜切削术(PRK)后角膜基质细胞凋亡的影响。方法30只兔随机取1只眼行PRK并术中使用0.02%MMC为PRK+MMC组,另1只眼仅行PRK设为PRK组,2只兔设为正常对照组。观察角膜上皮下混浊(haze)程度;采用苏木精-伊红染色法、TUNEL法和免疫组织化学法观察角膜细胞。结果术后1周,1、2、3个月角膜haze差异均有统计学意义(P<0.05)。术后1周,1、2、3个月PRK+MMC组与PRK组TUNEL染色、α-SMA阳性细胞数相比,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论术中眼局部应用0.02%MMC溶液可促进活化的角膜基质细胞凋亡,减轻PRK术后haze。 展开更多
关键词 准分子激光角膜切削术 丝裂霉素C 角膜基质细胞 凋亡
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玻璃体腔注气治疗黄斑部视网膜下积血体会 被引量:4
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作者 万光明 李晨晨 +2 位作者 邢杉杉 郭强英 陈仕建 《眼科新进展》 CAS 北大核心 2011年第6期550-551,560,共3页
目的评价玻璃体腔注入全氟丙烷(C3F8)气体治疗黄斑部视网膜下积血的疗效。方法选取黄斑部视网膜下积血患者23例(24眼)均行玻璃体腔注射C3F8气体0.3~0.4mL,注气后保持面向下体位1周以上,观察视力变化及眼底等情况。结果术后1周21眼黄斑... 目的评价玻璃体腔注入全氟丙烷(C3F8)气体治疗黄斑部视网膜下积血的疗效。方法选取黄斑部视网膜下积血患者23例(24眼)均行玻璃体腔注射C3F8气体0.3~0.4mL,注气后保持面向下体位1周以上,观察视力变化及眼底等情况。结果术后1周21眼黄斑区积血明显吸收或移位至黄斑区以外,视力有不同程度的提高,矫正视力由治疗前的眼前手动~0.06提高至0.04~1.00,其中2例(2眼)外伤性黄斑出血视力恢复最好,达1.0和0.8;1眼黄斑区积血明显吸收但视力无提高;1眼形成轻度玻璃体混浊,检眼镜下隐约见黄斑区积血已经完全吸收,视力由0.04提高至0.06;1眼黄斑区积血加重,形成出血性视网膜脱离及玻璃体混浊。术后2周时23眼黄斑区积血明显吸收或移位至黄斑区以外,矫正视力提高至0.06~1.00。结论玻璃体腔注气疗法是治疗黄斑部视网膜下积血的一种简单而有效的方法 ,适宜于黄斑部视网膜下积血面积较小者,尤其对外伤所致黄斑部视网膜下积血效果显著。 展开更多
关键词 黄斑部视网膜下积血 玻璃体腔注射 全氟丙烷
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转化生长因子-β_2在豚鼠形觉剥夺性近视中的表达 被引量:3
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作者 闫磐石 张金嵩 郭浩轶 《眼科研究》 CAS CSCD 北大核心 2007年第3期168-170,共3页
目的观察形觉剥夺性近视(FDM)形成中视网膜转化生长因子-β2(TGF-β2)水平的变化,对FDM的发病机制做进一步的探讨。方法出生3d豚鼠以半透明眼罩遮盖右眼2个月建立FDM模型,左眼作为对照,视网膜检影检测双眼屈光度,A型超声测量双眼眼轴长... 目的观察形觉剥夺性近视(FDM)形成中视网膜转化生长因子-β2(TGF-β2)水平的变化,对FDM的发病机制做进一步的探讨。方法出生3d豚鼠以半透明眼罩遮盖右眼2个月建立FDM模型,左眼作为对照,视网膜检影检测双眼屈光度,A型超声测量双眼眼轴长度。免疫组织化学分析TGF-β2的表达,RT-PCR检测TGF-β2 mRNA的表达。结果形觉剥夺使近视屈光度增加,遮盖眼与对照眼相比差异有统计学意义(P<0·01),遮盖眼视网膜光感受器细胞层TGF-β2蛋白表达减少(P<0·01),TGF-β2mRNA的表达下调。结论TGF-β2参与调控FDM形成。 展开更多
关键词 形觉剥夺性近视 转化生长因子-Β2 豚鼠
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SmacsiRNA慢病毒载体的构建及其对Smac基因沉默效果的鉴定 被引量:1
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作者 李云 郑广瑛 蒋瑜 《中华实验眼科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第3期199-204,共6页
背景研究证实半胱氨酸天冬氨酸蛋白水解酶激活剂(Smac)蛋白是肿瘤细胞的促凋亡蛋白,我们先前的研究表明,Smac蛋白在白内障患者LECs中表达量明显高于正常人,因此推测沉默LECs中Smac的表达可抑制LECs的过度凋亡,但如何成功将Smacsi... 背景研究证实半胱氨酸天冬氨酸蛋白水解酶激活剂(Smac)蛋白是肿瘤细胞的促凋亡蛋白,我们先前的研究表明,Smac蛋白在白内障患者LECs中表达量明显高于正常人,因此推测沉默LECs中Smac的表达可抑制LECs的过度凋亡,但如何成功将SmacsiRNA转染进入LECs是研究的关键。目的构建人SmacsiRNA慢病毒载体并对人LECs进行感染,研究慢病毒载体构建方法及其在人晶状体上皮细胞HLE—B3中的干扰效率,利用RNA干扰(RNAi)技术建立Smac低表达的HLE—B3株。方法根据我们前期的工作设计并合成针对Smac基因序列的siRNA序列,将合成的双链DNA以T4噬菌体DNA连接酶与GV118慢病毒载体相连接,转化DH5α感受态细胞,采用PCR筛选阳性克隆,经测序鉴定正确后,感染293T细胞,收集上清液并标定病毒滴度。用重组慢病毒感染HLE—B3细胞,荧光显微镜下观察转染后的阳性HLE—B3细胞数并计算病毒感染复数(MOI)。将常规培养的HLE—B3细胞分为阴性对照组、空质粒组和GV118-Smac—siRNA1组,阴性对照组为常规培养的细胞,空质粒组细胞仅转染不含慢病毒载体的siRNA质粒,GV118-Smac·siRNA1组细胞转染GV118-Smac—siRNA1质粒,采用实时荧光定量PCR检测各组细胞中SmacmRNA的相对表达量。结果构建的重组载体GV118-Smac—siRNAl转化DH5c感受态细胞后阳性克隆产物大小为340bp,空载的克隆产物为299bp,与预期结果相符,测序结果显示合成的Smac—siRNA1与预期目的序列一致。构建的GV118-Smac—siRNA1病毒滴度为3.0x10。TU/m1。感染HLE.B3细胞后荧光显微镜下可见MOI为100时,细胞毒性低且感染效率高,约为82%。阴性对照组、空载质粒组和GV118-Smac—siRNA1质粒组细胞中SmacmRNA相对表达量分别为(101.290±8.349)%、(92.330±6.320)%和(32.540±4.221)%,3个组间总体比较差异有统计学意义(F=32.871,P〈0.01),其中GV118-Smac—siRNA1质粒组细胞中SmacmRNA相对表达量较阴性对照组明显下降,差异有统计学意义(P=0.000),而空载质粒组细胞中SmacmRNA相对表达量略低于阴性对照组,但组间差异无统计学意义(P=0.535)。结论本研究中成功构建了siRNA慢病毒载体GV118-Smac—siRNA1,其转染HLE—B3效率高,该siRNA载体能够有效地抑制人LECs中Smac基因的表达。 展开更多
关键词 线粒体蛋白 凋亡 小干扰RNA 基因载体 慢病毒载体/基因 基因转染技术 晶状体上皮细胞
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重硅油在复杂眼外伤玻璃体切割术中的初步应用 被引量:3
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作者 万光明 陈仕建 《眼科新进展》 CAS 北大核心 2011年第7期645-647,共3页
目的探讨重硅油Densiron-68在复杂眼外伤玻璃体切割术中的应用及疗效。方法 复杂眼外伤患者9例(9眼),所有患眼玻璃体切割术中均可见后极部或下方视网膜裂孔,其中裂孔周围合并明显出血或增生机化者6眼。裂孔紧邻视盘者2眼(分别位于视盘... 目的探讨重硅油Densiron-68在复杂眼外伤玻璃体切割术中的应用及疗效。方法 复杂眼外伤患者9例(9眼),所有患眼玻璃体切割术中均可见后极部或下方视网膜裂孔,其中裂孔周围合并明显出血或增生机化者6眼。裂孔紧邻视盘者2眼(分别位于视盘鼻侧及下方),裂孔位于黄斑区者4眼,下方裂孔3眼(裂孔均大于1.5PD并伴明显增生机化),均行适量激光光凝,并给予Densiron-68注入。观察术后眼部情况,如视网膜复位情况、视力、眼压等。结果 所有患眼术前3d及术后1周时眼压均正常;术后2周时平均眼压为36.53mmHg(1kPa=7.5mmHg),其中5眼应用降眼压药物不能控制眼压,行前房穿刺。术后1周平均矫正视力为0.04,术后2周为0.05,术后4周为0.08,较术前提高。重硅油取出时间为术后16~41d,平均32d;5眼可观察到硅油乳化现象,最早1眼为术后15d。所有患眼视网膜复位均良好。结论 重硅油填充眼极易发生眼压升高,而且重硅油乳化时间出现较早;重硅油的应用应严格控制适应证,仅应用于不能俯卧位的患者。 展开更多
关键词 重硅油 玻璃体切割术 眼外伤
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Smac对人晶状体上皮细胞增生的抑制作用及促凋亡作用 被引量:7
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作者 孔德倩 郑广瑛 +2 位作者 李莉 刘玥 蔡芳菲 《中华实验眼科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2017年第3期233-238,共6页
背景 晶状体后囊膜混浊(PCO)是囊外白内障摘出术后的主要并发症,其发病机制与晶状体上皮细胞(LECs)的增生、移行和上皮-间质转化(EMT)有关,探讨相关的预防和靶向治疗措施至关重要。目的 探讨Smac对人LECs增生和凋亡的作用及防... 背景 晶状体后囊膜混浊(PCO)是囊外白内障摘出术后的主要并发症,其发病机制与晶状体上皮细胞(LECs)的增生、移行和上皮-间质转化(EMT)有关,探讨相关的预防和靶向治疗措施至关重要。目的 探讨Smac对人LECs增生和凋亡的作用及防治PCO的生物学作用。方法 对HLE-B3细胞株及Smac过表达人LECs株进行培养,将培养的HLE-B3细胞分为PBS组、空质粒转染组和siRNA-Smac3转染组,分别将PBS、空质粒载体和带有增强型绿色荧光蛋白(GFP)的siRNA-Smac3质粒转染细胞24 h,计算siRNA-Smac3质粒转染率。在细胞培养液中分别添加不同质量浓度(5、10、20和50 μg/ml)TGF-β2或200 μmol/L H2O2以建立PCO模型或氧化应激凋亡模型。将细胞分为PBS组、TGF-β2组和Smac过表达+TGF-β2组,采用细胞计数试剂盒-8(CCK-8)法检测细胞增生活力;将细胞分为PBS组、H2O2组和siRNA-Smac+H2O2组,采用流式细胞仪检测各组细胞凋亡率;分别采用实时定量PCR和Western blot法检测培养的细胞中Smac、caspase-3及增生细胞核抗原(PCNA)mRNA及蛋白的相对表达量。结果 siRNA-Smac3质粒转染细胞后GFP阳性细胞达80%以上,荧光定量PCR筛选出最佳干扰质粒为siRNA-Smac3。siRNA-Smac3转染组GFP阳性细胞率为(72.32±2.31)%,明显高于空质粒载体组的(4.91±0.24)%,差异有统计学意义(t=116.342,P〈0.001)。LECs中Smac mRNA相对表达量为35.21±4.11,高于空质粒载体组的15.24±2.48,差异有统计学意义(t=215.47,P〈0.05)。20 μg/ml TGF-β2作用后PBS组、TGF-β2组和Smac过表达+TGF-β2组的细胞增生率分别为(98.4±1.7)%、(98.9±0.1)%和(64.2±3.1)%,Smac过表达+TGF-β2组明显低于TGF-β2组,差异有统计学意义(P〈0.05)。PBS组、H2O2组和siRNA-Smac+H2O2组细胞凋亡率分别为(2.9±1.2)%、(45.1±4.5)%和(27.5±1.8)%,siRNA-Smac+H2O2组细胞凋亡率明显低于H2O2组,差异有统计学意义(P〈0.05)。荧光定量PCR结果显示,PBS组、H2O2组和siRNA-Smac+H2O2组caspase-3 mRNA相对表达量分别为0.321±0.103、0.715±0.112和0.479±0.209,siRNA-Smac+H2O2组细胞中caspase-3 mRNA相对表达量明显低于H2O2组,差异有统计学意义(P〈0.05);PBS组、TGF-β2组和Smac过表达+TGF-β2组细胞中PCNA mRNA相对表达量分别为0.299±0.013、0.645±0.102和0.490±0.209,与TGF-β2组比较,Smac过表达+TGF-β2组细胞中PCNA mRNA相对表达量明显下降,差异有统计学意义(P〈0.05)。Western blot结果显示,caspase-3蛋白在siRNA-Smac+H2O2组和H2O2组相对表达量为0.712±0.012和0.973±0.051,siRNA-Smac+H2O2组细胞中caspase-3蛋白的相对表达量明显低于H2O2组,差异有统计学意义(t=132.52,P〈0.05);PCNA在Smac过表达+TGF-β2组和TGF-β2组,相对表达量为0.782±0.212,相对表达量为1.126±0.251,Smac+TGF-β2组PCNA蛋白相对表达量显著低于TGF-β2组,差异有统计学意义(P〈0.05)。结论 Smac基因抑制人LECs株HLE-B3细胞系的增生并促进细胞的凋亡,其可能用于防治PCO。 展开更多
关键词 SMAC 凋亡 增生 后发性白内障 晶状体上皮细胞 小干扰RNA
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