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题名T细胞可诱导共刺激分子配体胞外段基因的克隆与表达
被引量：1
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作者
汲翔
郭勋
范丹丹
康巧珍
袁维堂
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机构
郑州大学第一附属医院肛肠外科
郑州大学生命科学学院
郑州大学河南省医药科学研究院肿瘤研究所
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出处
《郑州大学学报（医学版）》
CAS
北大核心
2020年第2期233-236,共4页
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基金
国家自然科学基金项目(81671542)。
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文摘
目的:克隆T细胞可诱导共刺激分子配体胞外段(ICOSL-N)基因,构建pET22b-ICOSL-N-Ig原核表达载体,实现ICOSL-N与IgG4体外融合表达。方法:设计并合成T细胞ICOSL-N和IgG4基因特异性引物,RT-PCR法从小鼠脾脏中克隆出ICOSL-N,PCR重叠延伸技术将ICOSL-N与IgG4基因融合,构建原核表达载体pET22b-ICOSL-N-Ig,转化E.coli BL21(DE3)工程菌,筛选鉴定阳性克隆,IPTG诱导阳性重组子,SDS-PAGE法鉴定融合蛋白ICOSL-N-Ig的表达。结果:融合基因ICOSL-N-Ig的PCR扩增产物大小约1425 bp,符合理论值;原核表达载体pET22b-ICOSL-N-Ig经酶切、PCR和测序鉴定结果符合预期;在诱导后的菌体中检测出大小为53800的蛋白诱导条带,且与目标蛋白的大小一致。结论:成功克隆ICOSL-N基因,实现ICOSL-N在E.coli BL21(DE3)工程菌中与IgG4的融合表达。
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关键词
T细胞可诱导共刺激分子
可诱导共刺激分子配体
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Keywords
inducible T-cell co-stimulator
inducible co-stimulator ligand
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分类号
Q812
[生物学—生物工程]
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