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3种方法提取胸腺组织蛋白双向电泳纯化结果比较
被引量：
4
1
作者
王桂叶
高峰
+5 位作者
李静孟
方华
张清勇
王玉玲
张建立
赵明理
《郑州大学学报（医学版）》
CAS
北大核心
2007年第4期660-662,共3页
目的:选择合适的胸腺组织蛋白质提取和纯化方法。方法:分别采用组织裂解液法、丙酮沉淀法和蛋白纯化试剂3种方法提取7例重症肌无力患者胸腺组织蛋白质,上样量为1mg蛋白,以17cmpI3～10固相pH梯度胶条做第一向等电聚焦,SDS-PAGE垂直电泳...
目的:选择合适的胸腺组织蛋白质提取和纯化方法。方法:分别采用组织裂解液法、丙酮沉淀法和蛋白纯化试剂3种方法提取7例重症肌无力患者胸腺组织蛋白质,上样量为1mg蛋白,以17cmpI3～10固相pH梯度胶条做第一向等电聚焦,SDS-PAGE垂直电泳为第二向进行双向电泳(2-DE),考马斯亮蓝染色,图像分析软件分析电泳图谱。结果:利用蛋白纯化试剂法提取的胸腺组织蛋白2-DE凝胶图像纵条纹、横条纹以及背景都明显减少,获得蛋白点数量较其他2种方法增加(P均<0.05)。结论:采用蛋白纯化试剂法提取胸腺组织蛋白,能够获得较好2-DE凝胶图像,为胸腺组织蛋白质组学的研究打下基础。
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关键词
双向电泳
蛋白纯化
胸腺
组织裂解法
丙酮沉淀法
蛋白质纯化试剂法
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职称材料
重症肌无力胸腺组织蛋白质组双向电泳方法的建立
被引量：
2
2
作者
高峰
杨继要
+3 位作者
崔新征
郭亮
杜英
张清勇
《郑州大学学报（医学版）》
CAS
北大核心
2007年第1期22-26,共5页
目的:建立和优化重症肌无力(MG)胸腺组织蛋白质组双向电泳技术方法。方法:提取MG患者(n=3)增生型胸腺组织蛋白,以固相pH梯度胶条做第一向等电聚焦电泳,SDS聚丙烯酰胺凝胶垂直电泳为第二向。在以上过程中分别对蛋白提取、等电聚焦程序(A...
目的:建立和优化重症肌无力(MG)胸腺组织蛋白质组双向电泳技术方法。方法:提取MG患者(n=3)增生型胸腺组织蛋白,以固相pH梯度胶条做第一向等电聚焦电泳,SDS聚丙烯酰胺凝胶垂直电泳为第二向。在以上过程中分别对蛋白提取、等电聚焦程序(A、B、C、D)和凝胶染色方法等各个实验环节进行控制和优化,利用PDQuest7.1.1软件分析获得的二维凝胶图像。结果:①采用一步法提取胸腺组织蛋白质,第一向等电聚焦采用7cmIPG胶条,聚焦程序选择B,硝酸银染色。3例标本重复4次,共获12幅二维凝胶图像。随机选取1例标本的2幅图像,利用软件对2幅中的蛋白点进行匹配,匹配率为82.1%;3份样品共12幅凝胶图像的对比,获得3个共同存在的标志蛋白点,相对分子质量和等电点分别为:A点(82700,7.0)、B点(50700,5.76)和C点(33300,5.02)。②进一步优化上述实验条件,选择1例标本,采用两步法提取胸腺组织蛋白质,选用17cmIPG胶条,聚焦采用程序D,考马斯亮蓝染色,获得的二维凝胶图像与一步法(其他条件相同)比较。一步法可检测到蛋白质点326个,两步法可检测到562个蛋白点。结论:①建立了MG胸腺组织蛋白质组提取的方法。采用两步法可以更有效地提取胸腺组织蛋白质组。②利用优化后的实验方法,获得了MG胸腺组织蛋白二维凝胶图像,为开展MG胸腺组织蛋白质组学研究打下了基础。
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关键词
重症肌无力
胸腺
蛋白质组
双向电泳
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职称材料
正常和肿瘤组织中ZNF165 mRNA的表达及其自发性抗体检测
被引量：
1
3
作者
杨小昂
路浩
+3 位作者
董学员
孙爱民
程豪为
陈慰峰
《郑州大学学报（医学版）》
CAS
北大核心
2007年第4期641-645,共5页
目的:分析正常和肿瘤组织中ZNF165的表达及其在肝癌患者体内诱导产生的自发性体液免疫反应。方法:采用RT-PCR和定量PCR方法检测16种正常和4种肿瘤(肝癌、胃癌、结肠癌、肺癌)组织中ZNF165mRNA及表达丰度;将ZNF165基因在原核细胞中进行...
目的:分析正常和肿瘤组织中ZNF165的表达及其在肝癌患者体内诱导产生的自发性体液免疫反应。方法:采用RT-PCR和定量PCR方法检测16种正常和4种肿瘤(肝癌、胃癌、结肠癌、肺癌)组织中ZNF165mRNA及表达丰度;将ZNF165基因在原核细胞中进行蛋白表达,亲和层析法纯化重组ZNF165蛋白。Westernblot方法对ZNF165在82例肝癌患者体内诱导的自发性抗体进行检测。结果:正常组织中ZNF165mRNA只在睾丸组织表达,肝癌、胃癌、结肠癌和肺癌组织中ZNF165mRNA阳性率分别为52.4%、42.8%、42.8%和21.4%。定量PCR结果显示ZNF165mRNA以高水平在肝癌组织与睾丸组织中表达,而在配对的癌旁组织与其他正常组织中仅存在很低水平的表达(P均<0.01)。82例肝癌患者血清中4例与ZNF165蛋白出现免疫反应,阳性率4.9%;36例正常人血清均为阴性。结论:ZNF165是一个新的肿瘤-睾丸抗原基因,它在机体内可诱导体液免疫反应,有可能作为肿瘤免疫治疗的候选抗原。
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关键词
ZNF165重组蛋白
肿瘤-睾丸抗原
原核表达
自发性抗体
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职称材料
题名
3种方法提取胸腺组织蛋白双向电泳纯化结果比较
被引量：
4
1
作者
王桂叶
高峰
李静孟
方华
张清勇
王玉玲
张建立
赵明理
机构
郑州大学
第一附属医院血液科
郑州大学河南省医学科学研究所
郑州大学
第二附属医院胸外科
河南
中
医学
院第一附属医院胸外科
出处
《郑州大学学报（医学版）》
CAS
北大核心
2007年第4期660-662,共3页
基金
国家自然科学基金资助项目30570625
文摘
目的:选择合适的胸腺组织蛋白质提取和纯化方法。方法:分别采用组织裂解液法、丙酮沉淀法和蛋白纯化试剂3种方法提取7例重症肌无力患者胸腺组织蛋白质,上样量为1mg蛋白,以17cmpI3～10固相pH梯度胶条做第一向等电聚焦,SDS-PAGE垂直电泳为第二向进行双向电泳(2-DE),考马斯亮蓝染色,图像分析软件分析电泳图谱。结果:利用蛋白纯化试剂法提取的胸腺组织蛋白2-DE凝胶图像纵条纹、横条纹以及背景都明显减少,获得蛋白点数量较其他2种方法增加(P均<0.05)。结论:采用蛋白纯化试剂法提取胸腺组织蛋白,能够获得较好2-DE凝胶图像,为胸腺组织蛋白质组学的研究打下基础。
关键词
双向电泳
蛋白纯化
胸腺
组织裂解法
丙酮沉淀法
蛋白质纯化试剂法
Keywords
two-dimensional electrophoresis
protein refining
thymic
tissue lysate method
acetone precipitation method
2-DE cleanup kit method
分类号
R [医药卫生]
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职称材料
题名
重症肌无力胸腺组织蛋白质组双向电泳方法的建立
被引量：
2
2
作者
高峰
杨继要
崔新征
郭亮
杜英
张清勇
机构
郑州大学河南省医学科学研究所
郑州大学
基础
医学
院组织学与胚胎学教研室
郑州大学
第二附属医院普胸外科
郑州大学
基础
医学
院微生物学与免疫学教研室
出处
《郑州大学学报（医学版）》
CAS
北大核心
2007年第1期22-26,共5页
基金
国家自然科学基金资助项目30570625
河南省科研院所专项基金资助项目0441130303
文摘
目的:建立和优化重症肌无力(MG)胸腺组织蛋白质组双向电泳技术方法。方法:提取MG患者(n=3)增生型胸腺组织蛋白,以固相pH梯度胶条做第一向等电聚焦电泳,SDS聚丙烯酰胺凝胶垂直电泳为第二向。在以上过程中分别对蛋白提取、等电聚焦程序(A、B、C、D)和凝胶染色方法等各个实验环节进行控制和优化,利用PDQuest7.1.1软件分析获得的二维凝胶图像。结果:①采用一步法提取胸腺组织蛋白质,第一向等电聚焦采用7cmIPG胶条,聚焦程序选择B,硝酸银染色。3例标本重复4次,共获12幅二维凝胶图像。随机选取1例标本的2幅图像,利用软件对2幅中的蛋白点进行匹配,匹配率为82.1%;3份样品共12幅凝胶图像的对比,获得3个共同存在的标志蛋白点,相对分子质量和等电点分别为:A点(82700,7.0)、B点(50700,5.76)和C点(33300,5.02)。②进一步优化上述实验条件,选择1例标本,采用两步法提取胸腺组织蛋白质,选用17cmIPG胶条,聚焦采用程序D,考马斯亮蓝染色,获得的二维凝胶图像与一步法(其他条件相同)比较。一步法可检测到蛋白质点326个,两步法可检测到562个蛋白点。结论:①建立了MG胸腺组织蛋白质组提取的方法。采用两步法可以更有效地提取胸腺组织蛋白质组。②利用优化后的实验方法,获得了MG胸腺组织蛋白二维凝胶图像,为开展MG胸腺组织蛋白质组学研究打下了基础。
关键词
重症肌无力
胸腺
蛋白质组
双向电泳
Keywords
myasthenia gravis
thymus
proteome
two-dimensional eleetrophoresis
分类号
R655.7 [医药卫生—外科学]
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职称材料
题名
正常和肿瘤组织中ZNF165 mRNA的表达及其自发性抗体检测
被引量：
1
3
作者
杨小昂
路浩
董学员
孙爱民
程豪为
陈慰峰
机构
郑州大学河南省医学科学研究所
北京
大学
医学
部免疫学系
出处
《郑州大学学报（医学版）》
CAS
北大核心
2007年第4期641-645,共5页
基金
国家自然科学基金资助项目30340011
文摘
目的:分析正常和肿瘤组织中ZNF165的表达及其在肝癌患者体内诱导产生的自发性体液免疫反应。方法:采用RT-PCR和定量PCR方法检测16种正常和4种肿瘤(肝癌、胃癌、结肠癌、肺癌)组织中ZNF165mRNA及表达丰度;将ZNF165基因在原核细胞中进行蛋白表达,亲和层析法纯化重组ZNF165蛋白。Westernblot方法对ZNF165在82例肝癌患者体内诱导的自发性抗体进行检测。结果:正常组织中ZNF165mRNA只在睾丸组织表达,肝癌、胃癌、结肠癌和肺癌组织中ZNF165mRNA阳性率分别为52.4%、42.8%、42.8%和21.4%。定量PCR结果显示ZNF165mRNA以高水平在肝癌组织与睾丸组织中表达,而在配对的癌旁组织与其他正常组织中仅存在很低水平的表达(P均<0.01)。82例肝癌患者血清中4例与ZNF165蛋白出现免疫反应,阳性率4.9%;36例正常人血清均为阴性。结论:ZNF165是一个新的肿瘤-睾丸抗原基因,它在机体内可诱导体液免疫反应,有可能作为肿瘤免疫治疗的候选抗原。
关键词
ZNF165重组蛋白
肿瘤-睾丸抗原
原核表达
自发性抗体
Keywords
recombinant ZNF165 protein
cancer-testis antigen
prokaryotic expression
spontaneous antibody
分类号
R735.7 [医药卫生—肿瘤]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
3种方法提取胸腺组织蛋白双向电泳纯化结果比较
王桂叶
高峰
李静孟
方华
张清勇
王玉玲
张建立
赵明理
《郑州大学学报（医学版）》
CAS
北大核心
2007
4
在线阅读
下载PDF
职称材料
2
重症肌无力胸腺组织蛋白质组双向电泳方法的建立
高峰
杨继要
崔新征
郭亮
杜英
张清勇
《郑州大学学报（医学版）》
CAS
北大核心
2007
2
在线阅读
下载PDF
职称材料
3
正常和肿瘤组织中ZNF165 mRNA的表达及其自发性抗体检测
杨小昂
路浩
董学员
孙爱民
程豪为
陈慰峰
《郑州大学学报（医学版）》
CAS
北大核心
2007
1
在线阅读
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职称材料
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