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人端粒酶逆转录酶原核表达载体的构建被引量：2: 1; 作者张巧赵国强 +4 位作者刘红梅宫亚欧丁兰萍薛乐勋杨胜利《郑州大学学报（医学版）》 CAS 北大核心 2005年第3期411-413,共3页; 中图分类号Q782摘要目的:构建人端粒酶逆转录酶原核表达载体pGEX-4T-1-hTERT,并观察融合蛋白的表达。方法:用RTPCR方法从人肝癌组织中扩增出带有EcoRⅠ酶切位点的hTERT基因片段,与pGEMTEasy连接,转化感受态大肠杆菌JM109,经蓝白筛选、PC... 展开更多; 关键词人端粒酶逆转录酶原核表达载体重组质粒; 在线阅读下载PDF 职称材料

融合基因pEGFP-C3-B7．2-hTERT诱导小鼠免疫应答及抑制肝癌移植瘤被引量：1: 2; 作者艾敏杨胜利姜爱华《中国肿瘤生物治疗杂志》 CAS CSCD 2008年第1期51-55,共5页; 目的:构建融合DNA疫苗pEGFP-C3-B7.2-hTERT,观察其诱导小鼠免疫应答的能力和抗小鼠肝癌H22细胞移植成瘤的作用。方法:通过RT-PCR扩增B7.2和hTERTcDNA,以pEGFP-C3为载体构建pEGFP-C3-B7.2-hTERT融合基因质粒,肌肉注射接种C57BL/6小鼠,间... 展开更多; 关键词 DNA疫苗 B7.2 HTERT 免疫应答移植瘤免疫治疗; 在线阅读下载PDF 职称材料

真核荧光蛋白表达载体pEGFP-C3-B7.2-MAGE-1的构建与表达被引量：1: 3; 作者艾敏张巧 +1 位作者赵国强杨胜利《郑州大学学报（医学版）》 CAS 北大核心 2008年第5期943-947,共5页; 目的:构建表达B7.2和MAGE-1的绿色荧光共表达载体pEGFP-C3-B7.2-MAGE-1,并在真核细胞中表达。方法:根据GenBank中的序列,对B7.2、MAGE-1各设计一对两端带有特定限制性酶切位点的引物,分别从乳腺组织、乳癌组织提取总RNA,进行RT-PCR后,... 展开更多; 关键词 B7.2 MAGE-1 真核表达载体肿瘤免疫; 在线阅读下载PDF 职称材料

雄性无毛小鼠睾丸、附睾的发育及组织形态学观察: 4; 作者王纯耀阴志刚 +4 位作者阎爱华薛敬礼宋国英杜春燕史崇敏《郑州大学学报（医学版）》 CAS 北大核心 2007年第1期68-70,共3页; 目的：研究雄性无毛小鼠生殖器官的发育及组织形态学改变。方法：取8—10周龄雄性无毛小鼠5只，昆明种雄性小鼠10只。用天平称取动物体质量后，颈椎脱臼处死，摘取睾丸、附睾、前列腺，并用分析天平称重，根据每只小鼠体质量计算脏器指... 展开更多; 关键词无毛小鼠雄性睾丸附睾前列腺发育; 在线阅读下载PDF 职称材料

hTERT片段真核表达质粒的构建被引量：1: 5; 作者刘红梅赵国强杨胜利《郑州大学学报（医学版）》 CAS 北大核心 2004年第3期458-460,共3页; 目的 :构建人端粒酶逆转录酶 (hTERT)片段的真核表达质粒 ,方法 :从肿瘤组织中提取总RNA ,采用RT PCR法扩增hTERT基因并克隆入PGEM TEasy载体中 ,然后再亚克隆于pcDNA3.1真核表达载体 ,用PCR扩增及限制性酶切法筛选重组真核表达质粒 ,并... 展开更多; 关键词 HTERT 克隆表达载体; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名人端粒酶逆转录酶原核表达载体的构建被引量：2: 1; 作者张巧赵国强刘红梅宫亚欧丁兰萍薛乐勋杨胜利; 机构郑州大学公共卫生学院劳动卫生学教研室郑州大学基础医学院微生物学与免疫学教研室郑州大学基础医学院食管癌研究室郑州大学细胞生物学研究室; 出处《郑州大学学报（医学版）》 CAS 北大核心 2005年第3期411-413,共3页; 基金教育部"十五"211工程重点学科建设项目(教重办2002第2号); 文摘中图分类号Q782摘要目的:构建人端粒酶逆转录酶原核表达载体pGEX-4T-1-hTERT,并观察融合蛋白的表达。方法:用RTPCR方法从人肝癌组织中扩增出带有EcoRⅠ酶切位点的hTERT基因片段,与pGEMTEasy连接,转化感受态大肠杆菌JM109,经蓝白筛选、PCR扩增等筛选阳性菌落,用EcoRⅠ酶切获取目的片段,并与EcoRⅠ酶切过的pGEX4T-1质粒连接,重组子转化BL21感受态大肠杆菌,PCR扩增筛选出阳性菌落。基因测序并用Omega2.0软件比较分析重组质粒中hTERT基因片段与GenBank中的已知序列的同源性。通过诱导pGEX4T1融合蛋白表达,用抗hTERT多抗对融合蛋白进行Westernblot鉴定,薄层凝胶光密度扫描测定融合蛋白表达量。结果:PCR扩增等方法证实,人端粒酶逆转录酶原核表达载体pGEX-4T-1-hTERT构建成功,其中hTERT基因片段与GenBank中相应基因同源性为98.73%,氨基酸序列同源性为99.68%。Westernblot检出GST-hTERT融合蛋白,其表达量达28.4%。结论:成功构建了pGEX-4T-1-hTERT原核重组质粒并获得高度表达。; 关键词人端粒酶逆转录酶原核表达载体重组质粒; Keywords human telomerase reverse transcriptase prokaryotic expression vector recombinant plasmid; 分类号 Q782 [生物学—分子生物学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名融合基因pEGFP-C3-B7．2-hTERT诱导小鼠免疫应答及抑制肝癌移植瘤被引量：1: 2; 作者艾敏杨胜利姜爱华; 机构濮阳市人民医院检验科郑州大学基础医学院食管癌研究室; 出处《中国肿瘤生物治疗杂志》 CAS CSCD 2008年第1期51-55,共5页; 基金河南省自然科学基金资助项目(No0411042400)~~; 文摘目的:构建融合DNA疫苗pEGFP-C3-B7.2-hTERT,观察其诱导小鼠免疫应答的能力和抗小鼠肝癌H22细胞移植成瘤的作用。方法:通过RT-PCR扩增B7.2和hTERTcDNA,以pEGFP-C3为载体构建pEGFP-C3-B7.2-hTERT融合基因质粒,肌肉注射接种C57BL/6小鼠,间隔7d,共3次,以注射接种pEGFP-C3-B7.2、pEGFP-C3-hTERT、pEGFP-C3和PBS为对照。检测免疫小鼠脾淋巴细胞CTL杀伤活性、脾细胞培养上清IL-2和IFN-γ水平、外周血淋巴细胞亚群变化及血清中抗hTERT抗体水平。将融合基因pEGFP-C3-B7.2-hTERT免疫已负荷肝癌细胞H22/hTERT或H22/B7.2的小鼠,观察小鼠成瘤时间、生存时间。结果:琼脂糖凝胶电泳、酶切及序列测定证实,成功构建了融合基因质粒pEGFP-C3-B7.2-hTERT。融合基因免疫小鼠的脾淋巴细胞对B7.2-hTERT阳性靶细胞的杀伤活性明显高于各对照组(P<0.01),每只pEGFP-C3-B7.2-hTERT免疫小鼠都产生了抗体,免疫鼠外周血CD4+、CD8+T细胞和脾细胞培养上清中Th1类细胞因子IFN-γ、IL-2水平较各对照组明显升高(均P<0.01)。pEGFP-C3-B7.2-hTERT融合基因质粒免疫已负荷肝癌细胞H22/hTERT或H22/B7.2的小鼠后,小鼠60d未成瘤,其他各组22d时所有小鼠均已成瘤,60d时均死亡。结论:DNA疫苗pEGFP-C3-B7.2-hTERT在体内能诱导出明显的B7.2-hTERT特异性的抗肿瘤免疫应答,且能抑制体内已经存在的少量肿瘤细胞的成瘤。; 关键词 DNA疫苗 B7.2 HTERT 免疫应答移植瘤免疫治疗; Keywords DNA vaccine B7. 2 hTERT immunoresponsiveness transplanted tumor immunotherapy; 分类号 R730.54 [医药卫生—肿瘤] R735.7 [医药卫生—肿瘤]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名真核荧光蛋白表达载体pEGFP-C3-B7.2-MAGE-1的构建与表达被引量：1: 3; 作者艾敏张巧赵国强杨胜利; 机构郑州大学基础医学院微生物学与免疫学教研室郑州大学公共卫生学院卫生毒理学教研室郑州大学基础医学院食管癌研究室; 出处《郑州大学学报（医学版）》 CAS 北大核心 2008年第5期943-947,共5页; 文摘目的:构建表达B7.2和MAGE-1的绿色荧光共表达载体pEGFP-C3-B7.2-MAGE-1,并在真核细胞中表达。方法:根据GenBank中的序列,对B7.2、MAGE-1各设计一对两端带有特定限制性酶切位点的引物,分别从乳腺组织、乳癌组织提取总RNA,进行RT-PCR后,将两扩增产物分别克隆在pGEM-T载体,经测序证实碱基序列无误后,双酶切pGEM-T载体,回收目的片段,将两目的片段亚克隆至真核绿色荧光蛋白共表达载体(pEGFP-C3)上,并转染真核细胞,观察其在真核细胞中表达。结果及结论:pEGFP-C3-B7.2-MAGE-1真核表达载体经酶切及基因序列分析验证,PCR扩增片段与选择的目的片段序列相符,pEGFP-C3-B7.2-MAGE-1真核表达载体构建成功。该表达载体转染EC9706细胞后,用免疫荧光显微镜观察和RT-PCR分析,该重组载体能够在真核细胞中广泛表达。; 关键词 B7.2 MAGE-1 真核表达载体肿瘤免疫; Keywords B7.2 MAGE-1 vector construction tumor immunity; 分类号 Q782 [生物学—分子生物学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名雄性无毛小鼠睾丸、附睾的发育及组织形态学观察: 4; 作者王纯耀阴志刚阎爱华薛敬礼宋国英杜春燕史崇敏; 机构郑州大学实验动物中心郑州大学基础医学院食管癌研究室郑州大学基础医学院细胞生物学与医学遗传学教研室; 出处《郑州大学学报（医学版）》 CAS 北大核心 2007年第1期68-70,共3页; 基金河南省科技攻关基金资助项目0624410043; 文摘目的：研究雄性无毛小鼠生殖器官的发育及组织形态学改变。方法：取8—10周龄雄性无毛小鼠5只，昆明种雄性小鼠10只。用天平称取动物体质量后，颈椎脱臼处死，摘取睾丸、附睾、前列腺，并用分析天平称重，根据每只小鼠体质量计算脏器指数。所有组织切片后行HE染色，在光学显微镜下观察睾丸曲细精管、生精细胞及间质细胞的形态和数量及附睾组织结构。结果：雄性无毛小鼠睾丸、附睾及前列腺脏器指数与昆明种小鼠相比差异无统计学意义。但睾丸组织学存在曲细精管细胞层次减少，粗线期初级精母细胞减少，胞核结构模糊。附睾及前列腺组织未见明显异常。结论：雄性无毛小鼠睾丸组织学改变可能是导致繁种、育种困难的原因之一。; 关键词无毛小鼠雄性睾丸附睾前列腺发育; Keywords hairless mice male testis epididymis prostate gland development; 分类号 R-332 [医药卫生]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名hTERT片段真核表达质粒的构建被引量：1: 5; 作者刘红梅赵国强杨胜利; 机构郑州大学基础医学院食管癌研究室郑州大学基础医学院微生物学与免疫学教研室; 出处《郑州大学学报（医学版）》 CAS 北大核心 2004年第3期458-460,共3页; 文摘目的 :构建人端粒酶逆转录酶 (hTERT)片段的真核表达质粒 ,方法 :从肿瘤组织中提取总RNA ,采用RT PCR法扩增hTERT基因并克隆入PGEM TEasy载体中 ,然后再亚克隆于pcDNA3.1真核表达载体 ,用PCR扩增及限制性酶切法筛选重组真核表达质粒 ,并以DNA测序鉴定。结果 :PCR扩增及限制性酶切法证实重组真核表达质粒的构建成功。测序表明 ,hTERT基因片段与GenBank公布的相应基因同源性比较 ,核苷酸序列的同源性为 98.73% ,氨基酸序列的同源性为 99.6 8%。结论 :成功构建了hTERT真核表达质粒。; 关键词 HTERT 克隆表达载体; Keywords hTERT clone expression vector; 分类号 R730.3 [医药卫生—肿瘤]; 在线阅读下载PDF 职称材料

	题名	作者	出处	发文年	被引量	操作
1	人端粒酶逆转录酶原核表达载体的构建	张巧赵国强刘红梅宫亚欧丁兰萍薛乐勋杨胜利	《郑州大学学报（医学版）》 CAS 北大核心	2005	2	在线阅读下载PDF 职称材料
2	融合基因pEGFP-C3-B7．2-hTERT诱导小鼠免疫应答及抑制肝癌移植瘤	艾敏杨胜利姜爱华	《中国肿瘤生物治疗杂志》 CAS CSCD	2008	1	在线阅读下载PDF 职称材料
3	真核荧光蛋白表达载体pEGFP-C3-B7.2-MAGE-1的构建与表达	艾敏张巧赵国强杨胜利	《郑州大学学报（医学版）》 CAS 北大核心	2008	1	在线阅读下载PDF 职称材料
4	雄性无毛小鼠睾丸、附睾的发育及组织形态学观察	王纯耀阴志刚阎爱华薛敬礼宋国英杜春燕史崇敏	《郑州大学学报（医学版）》 CAS 北大核心	2007	0	在线阅读下载PDF 职称材料
5	hTERT片段真核表达质粒的构建	刘红梅赵国强杨胜利	《郑州大学学报（医学版）》 CAS 北大核心	2004	1	在线阅读下载PDF 职称材料