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重症肌无力患者胸腺组织CMTM8、CKLF1及相关趋化因子的表达 被引量:2
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作者 李倩如 杜英 +3 位作者 赵航 高峰 张清勇 张钦宪 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第4期354-356,共3页
目的:比较重症肌无力(MG)患者与非自身免疫对照组胸腺组织CMTM8、CKLF1、相关趋化因子及受体的表达,为揭示MG胸腺异常及其发生机制提供理论依据。方法:用基因芯片筛选差异表达的趋化因子基因,采用RT-PCR和实时荧光定量PCR方法分别检测... 目的:比较重症肌无力(MG)患者与非自身免疫对照组胸腺组织CMTM8、CKLF1、相关趋化因子及受体的表达,为揭示MG胸腺异常及其发生机制提供理论依据。方法:用基因芯片筛选差异表达的趋化因子基因,采用RT-PCR和实时荧光定量PCR方法分别检测正常胸腺和MG胸腺中CMTM8 mRNA的表达,用免疫组织化学方法对CKLF1蛋白的表达和分布进行检测。结果:增生型MG胸腺组织中CMTM8 mRNA的表达明显高于正常人胸腺(2-△△Ct=8.3),差异有统计学意义;CKLF1蛋白在正常胸腺、MG胸腺中的均有广泛的表达,阳性细胞主要为胸腺基质细胞;CXCR6、CCL2、CCL8、CX3CL1、CXCL10和CCR1在MG患者胸腺表达水平显著低于对照组;CCL22、CCL3、CXCL12、CCR5、CCR7和CCR9基因在MG患者胸腺表达水平显著高于对照组。结论:CMTM8及多种趋化因子基因在增生型MG胸腺的表达明显高于对照组胸腺,可能在MG患者T细胞异常发育的某些阶段起重要作用。 展开更多
关键词 重症肌无力 胸腺 CMTM8 趋化因子
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T7启动子介导体外构建Nucleostem in特异性短发夹状干扰RNA 被引量:4
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作者 岳保红 朱晓燕 +5 位作者 孙玲 赵小强 陈艳丽 王清霞 刘帅 张钦宪 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第6期731-735,共5页
目的体外构建合成针对Nuc leostem in(核干细胞因子,NS)基因的短发夹状干扰RNA(shRNA),用于进一步研究以该基因为靶目标、RNA干扰(RNA interference,RNA i)为手段的白血病基因治疗可行性。方法从Nuc leostem in基因的三个变异体cDNA共... 目的体外构建合成针对Nuc leostem in(核干细胞因子,NS)基因的短发夹状干扰RNA(shRNA),用于进一步研究以该基因为靶目标、RNA干扰(RNA interference,RNA i)为手段的白血病基因治疗可行性。方法从Nuc leostem in基因的三个变异体cDNA共同序列中筛选出2个3′端为AA的21个碱基片段作为shRNA合成的对应序列,9个碱基的5′-UCUCUUGAA-3′作为Loop环。以23个碱基的5-′GGATC-CTAATACGACTCACTATA-3′作为T7启动子(T7 Promoter)序列,构建shRNA的体外合成双链DNA模板,一条链5′端无AA,顺序为启动子、shRNA正义信息链、Loop环、shRNA反义信息链,共70个碱基;另一条是该链的互补链,5′端带有AA,共72个碱基。在T7 RNA聚合酶(T7 RNA polym erase)作用下合成shRNA,纯化后通过凝胶电泳比较灰度值确定shRNA浓度;shRNA作用于HL-60细胞,通过观察细胞形态变化和NS-mRNA抑制率验证干扰效果。结果体外合成的两条shRNA电泳无降解和弥散现象,浓度分别为5.24μmol.L-1和3.35μmol.L-1;干扰HL-60细胞48 h后,细胞密度和聚集程度下降,细胞之间大小相差悬殊,经shRNA-NS-2作用的HL-60细胞一部分由圆形变成了梭形并有明显的伪足;与对照组相比NS-mRNA抑制率分别达到37.82%和71.88%。结论体外成功构建和合成了两条针对Nu-c leostem in基因的shRNA,且抑制该基因表达的作用明显,shRNA-NS-2使HL-60细胞形态发生了改变。所合成的shR-NA-NS-2可作为进一步研究该基因和探索白血病的基因治疗的工具。 展开更多
关键词 T7启动子 核干细胞因子 体外构建 DNA模板 短发夹状干扰RNA
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重症肌无力CD45RA、CD45RO胸腺细胞亚群及相关细胞因子表达分析 被引量:3
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作者 李倩如 杜英 +3 位作者 赵航 高峰 张清勇 张钦宪 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第11期1066-1067,1071,共3页
目的:探讨胸腺细胞异常分化与重症肌无力发生的关系。方法:采用基因芯片对多种白细胞介素、干扰素及其受体mRNA表达进行分析,采用流式细胞术测定胸腺细胞CD45RA、CD45RO的表达率,采用免疫组化对胸腺组织切片CD45RA、CD45RO表达及分布进... 目的:探讨胸腺细胞异常分化与重症肌无力发生的关系。方法:采用基因芯片对多种白细胞介素、干扰素及其受体mRNA表达进行分析,采用流式细胞术测定胸腺细胞CD45RA、CD45RO的表达率,采用免疫组化对胸腺组织切片CD45RA、CD45RO表达及分布进行检测。结果:MG患者IL-1R、IL-4R、IFNγR1、IFNγR2、IL-6、IL-8表达水平显著低于对照组;IL-10RB表达水平显著高于对照组;IL-1、IL-2、IL-4、IL-10、IL-7、IFN-α、IFN-β、IFN-γ表达水平在MG和对照组均很低,无显著差异;MG患者CD56+胸腺细胞百分率(0.56±0.33)显著低于对照组(1.78±0.69),MG患者CD45RO+、CD1a+细胞显著高于对照组。免疫组化和RT-PCR也有相同结果。结论:MG患者胸腺细胞发育过程中CD45RO+细胞向CD45RA+T细胞转变存在异常。 展开更多
关键词 白细胞介素 CD45RA CD45RO 重症肌无力 胸腺
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T淋巴瘤TCR β链独特型DNA疫苗在小鼠骨骼肌中的基因及蛋白表达 被引量:1
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作者 张明智 李继昌 +2 位作者 姜祖光 陈长英 乐晓萍 《郑州大学学报(医学版)》 CAS 北大核心 2002年第3期280-283,共4页
目的:检测T淋巴瘤TCR β链独特型DNA疫苗的基因表达。方法:大剂量提取质粒,将BALB/c鼠随机分为 pcDNA3.l组、pcDNA3.1/TCR Vβ8组、pcDNA3.1/TCR Vβ8+IL-2组、pcDNA3.l/TCR Vβ8+CpG+脂质体组和全硫代CpG组共5组(每组6只),双侧... 目的:检测T淋巴瘤TCR β链独特型DNA疫苗的基因表达。方法:大剂量提取质粒,将BALB/c鼠随机分为 pcDNA3.l组、pcDNA3.1/TCR Vβ8组、pcDNA3.1/TCR Vβ8+IL-2组、pcDNA3.l/TCR Vβ8+CpG+脂质体组和全硫代CpG组共5组(每组6只),双侧股四头肌内注射疫苗免疫,于第0、2、4周各免疫1次,共3次。接种疫苗后 5 d,用 RT-PCR法检测重组质粒mRNA表达。接种疫苗后 7 d应用免疫组化检测重组质粒蛋白表达。结果:pcDNA3.1/TCR Vβ8组、pcDNA3.l/TCR Vβ8+IL-2组、pcDNA3.l/TCR Vβ8+CpG+脂质体组小鼠骨骼肌中均显示mRNA和蛋白表达,而pcDNA3.1组和全硫代CpG组未见mRNA和蛋白表达。结论:T淋巴瘤TCRβ链独特型DNA疫苗在小鼠骨骼肌中有效地表达了基因产物。 展开更多
关键词 T淋巴瘤 TCR 独特型 重组质粒 DNA疫苗 基因表达 动物实验
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利用Epi Info核查Access数据库 被引量:1
5
作者 平智广 刘莉 《中国卫生统计》 CSCD 北大核心 2009年第3期302-304,共3页
关键词 ACCESS数据库 INFO EPI 录入质量 统计分析 核查方法 数据资料 原始资料
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急性淋巴细胞白血病患者微卫星DNA杂合性缺失检测
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作者 孙玲 孙慧 +3 位作者 张绍林 邹典斌 乐晓萍 朱晓燕 《郑州大学学报(医学版)》 CAS 北大核心 2002年第3期292-295,共4页
目的:探讨微卫星DNA杂合性缺失与急性淋巴细胞白血病(ALL)的相关性。方法:ALL患者72例,其中T-ALL 9例,B-ALL 55例,慢性粒细胞性白血病(慢粒)急淋变 8例,应用 PCR-变性聚丙烯酰胺凝胶电泳-银染技术,检测 ATM基因 DllS2179位点、BRCA2基... 目的:探讨微卫星DNA杂合性缺失与急性淋巴细胞白血病(ALL)的相关性。方法:ALL患者72例,其中T-ALL 9例,B-ALL 55例,慢性粒细胞性白血病(慢粒)急淋变 8例,应用 PCR-变性聚丙烯酰胺凝胶电泳-银染技术,检测 ATM基因 DllS2179位点、BRCA2基因 D13S260位点和 D13S25位点在 B-ALL、T-ALL和慢粒急淋变患者的微卫星杂合性缺失(LOH)。结果:72例ALL患者中.3位点总LOH频率为26.4%。D11S2179、D13S260和D13S25 3位点LOH的发生频率分别为15.3%、12.5%和5.5%。B-ALL患者3个位点平均LOH发生率为12.7%。在D11S2179和 D11S260 2位点同时发生 LOH频率为 9.1%。9例 T-ALL患者未发现 LOH。8例慢粒急淋变患者只在D11S2179位点检测到3例LOH(37.1%),其他2位点未见异常。结论:ATM基因、BRCA2基因和D13S25位点微卫星的LOH与B-ALL的发病存在相关性;而ATM基因遗传不稳定性可能参与慢粒急淋变过程。 展开更多
关键词 微卫星DNA 杂合性缺失 急性淋巴细胞血病 BRCA2基因 白血病
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利用Epi Info进行条件logistic回归分析
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作者 平智广 刘莉 郭雄 《中国卫生统计》 CSCD 北大核心 2010年第4期426-427,共2页
关键词 条件LOGISTIC回归分析 多分类logistic回归 INFO EPI 统计分析方法 病例对照研究 SPSS软件 分类变量
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