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免疫磁珠法分离和纯化人胚胎神经干细胞 被引量:8
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作者 杜英 阮丽荣 +5 位作者 李倩如 杨波 赵新利 李红伟 宋来君 张清勇 《郑州大学学报(医学版)》 CAS 北大核心 2003年第1期13-15,共3页
目的:建立有效的人类神经干细胞分离纯化系统和方法。方法:无菌取孕24周流产胎儿的室下区脑组织,制备细胞悬液,用磁性微珠标记的CD133单克隆抗体与细胞孵育,通过磁分选器分离出CD133(+)和CD133(-)细胞,通过体外培养并诱导分化,观察CD13... 目的:建立有效的人类神经干细胞分离纯化系统和方法。方法:无菌取孕24周流产胎儿的室下区脑组织,制备细胞悬液,用磁性微珠标记的CD133单克隆抗体与细胞孵育,通过磁分选器分离出CD133(+)和CD133(-)细胞,通过体外培养并诱导分化,观察CD133阳性细胞和阴性细胞的增殖情况及分化能力。结果:经免疫磁珠分选的室下区脑组织中,CD133(+)细胞占胚胎脑组织细胞的2%左右,该细胞体外扩增能力强,细胞呈球形生长,并易聚集成团,培养5 d、10 d、15 d、20 d进行活细胞计数,细胞增长率分别为1.79%、4.82%、7.21%、14.66%,诱导分化后的细胞经染色鉴定可分化为神经元、神经胶质等多种神经细胞;阴性细胞扩增能力弱,活细胞计数以死细胞数量居多,大约70%,另外一些细胞贴壁分化。结论:免疫磁珠法简便、有效,经免疫磁珠分离的神经干细胞在体外能进一步培养扩增并分化。 展开更多
关键词 神经干细胞 免疫磁珠 细胞分离 细胞纯化
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人胚神经干细胞体外免疫原性测定 被引量:3
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作者 李红伟 杨波 +3 位作者 杜英 孙剑瑞 阮丽蓉 宋来君 《郑州大学学报(医学版)》 CAS 北大核心 2006年第2期258-260,共3页
目的探讨人胚神经干细胞体外免疫原性情况。方法取孕14周流产人胚侧脑室下区细胞,进行分离、培养、鉴定。提取人胚神经干细胞和正常人外周血单核细胞中的RNA,采用RT-PCR法反转录,扩增,电泳,观察目的条带。根据外周血单核细胞培养分4组... 目的探讨人胚神经干细胞体外免疫原性情况。方法取孕14周流产人胚侧脑室下区细胞,进行分离、培养、鉴定。提取人胚神经干细胞和正常人外周血单核细胞中的RNA,采用RT-PCR法反转录,扩增,电泳,观察目的条带。根据外周血单核细胞培养分4组阴性对照组以外周血单核细胞单独培养,实验组为B、C组分别以103ml-1、105ml-1神经干细胞加入外周血单核细胞中共培养,阳性对照组将植物血凝素以0.1mg/L加入外周血单核细胞中共培养。用MTT比色法测定刺激后外周血单核细胞增殖能力。结果RNA反转录后电泳条带显示神经干细胞表达HLA-A、HLA-DRA,MTT比色法细胞活力测定显示B组、C组D(490nm)分别为0.4450±0.0265、0.5675±0.0781,C组与阳性对照组比较差异无统计学意义(P>0.05),B组、C组与阴性对照组比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论人胚侧脑室下区的神经干细胞在体外有一定的免疫原性,可促进外周血单核细胞增殖,移植时需注意免疫排斥问题。 展开更多
关键词 免疫原性 神经干细胞 胚胎 体外
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人B7-2基因修饰的食管癌细胞瘤苗抗肿瘤的免疫效应 被引量:3
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作者 赵国强 汤黎明 +7 位作者 路静 赵军 宋谦 崔自由 杨洪艳 赵继敏 黄幼田 董子明 《郑州大学学报(医学版)》 CAS 北大核心 2005年第4期588-590,共3页
目的:研究人B7-2基因修饰的食管癌细胞作为瘤苗的抗肿瘤作用。方法:将真核荧光表达载体pEGFP-C3-B7-2,通过脂质体转染技术转染人食管癌细胞株EC9706。外周血来源的树突状细胞(DC)负载肿瘤抗原后,与自体T淋巴细胞共培养3d,获得细胞毒性T... 目的:研究人B7-2基因修饰的食管癌细胞作为瘤苗的抗肿瘤作用。方法:将真核荧光表达载体pEGFP-C3-B7-2,通过脂质体转染技术转染人食管癌细胞株EC9706。外周血来源的树突状细胞(DC)负载肿瘤抗原后,与自体T淋巴细胞共培养3d,获得细胞毒性T淋巴细胞(CTL)。用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测CTL对转染和未转染pEGFP-C3-B7-2的人食管癌细胞EC9706的杀伤活性。结果:CTL对转染pEGFP-C3-B7-2的肿瘤细胞的杀伤活性大于转染pEGFP-C3和未转染细胞的杀伤活性(P<0.05)。结论:人B7-2基因修饰的EC9706肿瘤细胞瘤苗,可诱导出明显的抗EC9706细胞的免疫效应。 展开更多
关键词 人B7-2 绿色荧光蛋白 肿瘤疫苗 免疫效应
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B19 VP2抗原真核表达载体的构建及免疫原性观察 被引量:3
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作者 胡军 戚敏 +2 位作者 张世杰 宋建伟 赵国强 《郑州大学学报(医学版)》 CAS 北大核心 2005年第3期377-379,共3页
目的:探讨以B19VP2基因为靶基因构建的真核表达载体作为基因疫苗的免疫原性。方法:用PCR方法以pGEM1B19为模板扩增出B19VP2目的基因;将其重组入真核表达载体pcDNA3;将重组子pcDNA3VP2及空质粒分别用脂质体包裹接种家兔;ELISA方法检测家... 目的:探讨以B19VP2基因为靶基因构建的真核表达载体作为基因疫苗的免疫原性。方法:用PCR方法以pGEM1B19为模板扩增出B19VP2目的基因;将其重组入真核表达载体pcDNA3;将重组子pcDNA3VP2及空质粒分别用脂质体包裹接种家兔;ELISA方法检测家兔血清中B19VP2抗体产生情况。结果:成功构建了真核表达载体pcDNA3-VP2;其作为基因疫苗接种家兔后可产生滴度较高,持续时间较长的抗体。结论:B19VP2基因可作为B19病毒基因疫苗构建的靶基因。 展开更多
关键词 人微小病毒B19 VP2抗原 免疫 家兔
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中国猕猴CD4^+ CD25^+调节性T细胞抑制抗结核分枝杆菌特异性T淋巴细胞免疫反应 被引量:2
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作者 秦洁 龚光明 +7 位作者 杜英 孙石磊 杨璇 朱沙 轩小燕 刘萍萍 王娜 许予明 《郑州大学学报(医学版)》 CAS 北大核心 2012年第4期472-475,共4页
目的:体外观察中国猕猴CD4+CD25+调节性T细胞(Tregs)对T淋巴细胞产生的抗PPD抗原特异性扩增的影响。方法:分离6只3月内人工感染过结核分枝杆菌卡介苗的雄性中国猕猴外周血单个核细胞(PB-MCs),免疫磁珠法分选纯化出Tregs,并用PKH26红标... 目的:体外观察中国猕猴CD4+CD25+调节性T细胞(Tregs)对T淋巴细胞产生的抗PPD抗原特异性扩增的影响。方法:分离6只3月内人工感染过结核分枝杆菌卡介苗的雄性中国猕猴外周血单个核细胞(PB-MCs),免疫磁珠法分选纯化出Tregs,并用PKH26红标记。将去除Tregs的剩余PBMCs标记上CFSE,然后单独或与纯化的Tregs混合,分别给予结核杆菌纯化蛋白衍生物(PPD)或CD3/CD28单克隆抗体刺激,体外培养7d,用流式细胞术分析含或不含Tregs的PBMCs中CD4+T淋巴细胞、CD8+T淋巴细胞和Vγ2Vδ2T淋巴细胞对PPD抗原和CD3/CD28抗体刺激的反应。结果:PPD不仅能引起CD4+T淋巴细胞、CD8+T淋巴细胞扩增,而且引起Vγ2Vδ2T淋巴细胞也发生扩增。Tregs不仅能抑制CD3/CD28抗体诱导的CD4+T淋巴细胞、CD8+T淋巴细胞和Vγ2Vδ2T淋巴细胞的抗原非特异性扩增,而且还可抑制PPD抗原刺激引起的CD4+T淋巴细胞、CD8+T淋巴细胞和Vγ2Vδ2T淋巴细胞的抗原特异性扩增。结论:中国猕猴Tregs对T淋巴细胞产生的抗结核杆菌特异性免疫反应有负调节作用。 展开更多
关键词 CD4^+CD25^+调节性T细胞 抗结核分枝杆菌 中国猕猴
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郑州市流产或死胎孕妇人微小病毒B19感染情况测定 被引量:2
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作者 靳静 冷弘 +2 位作者 徐慧丹 刘全离 赵国强 《郑州大学学报(医学版)》 CAS 北大核心 2005年第3期383-384,共2页
目的:了解郑州市流产或死胎孕妇人微小病毒B19的感染情况。方法:采用ELISA和PCR方法分别检测郑州市237例正常孕妇及29例不明原因流产或死胎孕妇血清中B19IgG、B19IgM和B19DNA表达情况。结果:29例流产或死胎孕妇B19IgG、B19IgM和B19DNA... 目的:了解郑州市流产或死胎孕妇人微小病毒B19的感染情况。方法:采用ELISA和PCR方法分别检测郑州市237例正常孕妇及29例不明原因流产或死胎孕妇血清中B19IgG、B19IgM和B19DNA表达情况。结果:29例流产或死胎孕妇B19IgG、B19IgM和B19DNA阳性率分别为51.7%(15/29)、6.9%(2/29)和13.8%(4/29),237例正常孕妇B19IgG、B19IgM和B19DNA阳性率分别30.4%(72/237)、1.3%(3/237)和2.5%(6/237),差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:郑州市孕妇中存在人微小病毒B19的感染,可能导致不明原因流产或死胎。 展开更多
关键词 人微小病毒B19 孕妇 流产 死胎 郑州市
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郑州市B19病毒分离株全基因的克隆及序列测定
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作者 赵国强 宋建伟 +2 位作者 戚敏 张世杰 陈宗德 《郑州大学学报(医学版)》 CAS 北大核心 2005年第3期385-387,共3页
目的:克隆和测定在郑州市得到的B19病毒分离株全基因序列。方法:采用聚合酶链反应(PCR)技术从1例B19阳性的流产患者血清中分段扩增B19病毒全基因,获得7个互相重叠的片段,分别长814bp(1~814),849bp(753~1601),663bp(1523~2185),738bp(... 目的:克隆和测定在郑州市得到的B19病毒分离株全基因序列。方法:采用聚合酶链反应(PCR)技术从1例B19阳性的流产患者血清中分段扩增B19病毒全基因,获得7个互相重叠的片段,分别长814bp(1~814),849bp(753~1601),663bp(1523~2185),738bp(2124~2861),1011bp(2790~3800),1014bp(3747~4760),914bp(4681~5594)。将其分别克隆入T载体,进行测序分析。结果:郑州市B19病毒分离株全基因长5594个核苷酸,有3个开放读码框架(ORF)。第1个ORF位于615~2630位核苷酸,编码672个氨基酸,第2个ORF位于2623~4968位核苷酸,编码782个氨基酸,第3个ORF位于3304~4968位核苷酸,编码555个氨基酸。在该基因中4种碱基在基因组中所占比例为:A,29.58%(1655/5594),T,26.52%(1484/5594),G,22.88%(1280/5594),C,21.02%(1175/5594)。郑州B19病毒分离株基因序列与GenBank中NC_000883高度同源;存在10个碱基改变,只有1个引起氨基酸改变(3752位C→G导致Ser→Cys)。结论:郑州B19病毒分离株和NC_000883属同一基因型。 展开更多
关键词 B19 聚合酶链反应 序列分析
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细胞因子诱导人脐血间充质干细胞分化过程中细胞巢蛋白、神经丝亚单位和端粒酶逆转录酶mRNA的表达 被引量:11
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作者 邢莹 秦洁 +6 位作者 曹孟德 韩雪飞 鄢文海 陈宗德 刘计荣 许燕 龚光明 《郑州大学学报(医学版)》 CAS 北大核心 2005年第2期250-253,共4页
目的:观察细胞因子EGF和bFGF联合诱导人脐血间充质干细胞(MSCs)向神经细胞分化过程中细胞 巢蛋白(nestin)、神经丝亚单位M(NF M)和端粒酶逆转录酶(hTERT)mRNA的变化。方法:采集健康自然分娩产 妇脐血,密度梯度离心分离单个核细胞(MN... 目的:观察细胞因子EGF和bFGF联合诱导人脐血间充质干细胞(MSCs)向神经细胞分化过程中细胞 巢蛋白(nestin)、神经丝亚单位M(NF M)和端粒酶逆转录酶(hTERT)mRNA的变化。方法:采集健康自然分娩产 妇脐血,密度梯度离心分离单个核细胞(MNCs),PBS洗涤2次后重悬于含体积分数20%胎牛血清的DMEM/F12 中,接种于T 75培养瓶内(细胞密度为1×106ml-1),一组加入细胞因子EGF和bFGF,终浓度各为10μg/L,另一 组不加细胞因子,剩余细胞用液氮冻存。培养24h倾去全部液体以除去未贴壁细胞,以后每3d全量换液1次,倒 置显微镜下观察细胞形态。分别收集培养1d、4d、7d、14d贴壁细胞和冻存细胞,采用RT -PCR方法检测nestin、 NF M、hTERTmRNA的表达。结果:未培养的脐血MNCs(内含MSCs)nestin、NF M、hTERTmRNA均表达阳性。培 养后nestin、hTERTmRNA表达下降,至第7d已不能检出;而NF MmRNA的表达随培养时间延长而增强。与对照 组相比,细胞因子组NF MmRNA表达较高,nestin、hTERTmRNA表达的下降趋势延迟。结论:细胞因子EGF和 bFGF在联合诱导脐血MSCs分化为神经细胞的过程中,能下调hTERTmRNA的表达。 展开更多
关键词 EGF bFGF 脐血 间充质干细胞 端粒酶逆转录酶 巢蛋白 神经丝亚单位M
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常压氧疗对大鼠脑缺血再灌注后脑组织Caspase-9及Caspase-3 mRNA表达的影响 被引量:12
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作者 陈素艳 张振香 +5 位作者 高峰 张迎娜 王鹏 王云璐 王岚 高冰 《郑州大学学报(医学版)》 CAS 北大核心 2014年第2期203-206,共4页
目的:观察不同含量常压氧(NBO)对急性脑缺血再灌注大鼠脑组织Caspase-9及Caspase-3 mRNA表达的影响。方法:选取制作脑缺血再灌注损伤模型成功的120只SPF级雄性SD大鼠,分为低、中、高含量NBO组和空气组,在持续吸氧或空气3、6、12、24、48... 目的:观察不同含量常压氧(NBO)对急性脑缺血再灌注大鼠脑组织Caspase-9及Caspase-3 mRNA表达的影响。方法:选取制作脑缺血再灌注损伤模型成功的120只SPF级雄性SD大鼠,分为低、中、高含量NBO组和空气组,在持续吸氧或空气3、6、12、24、48、72 h时,各组分别随机抽取5只大鼠处死,断头取脑,用荧光定量PCR检测Caspase-9及Caspase-3 mRNA的表达水平。结果:空气组和低、中、高含量NBO组Caspase-9及Caspase-3 mRNA的表达在48 h达到高峰,之后开始下降(P均<0.05),且各时间点NBO组均低于空气组(P均<0.05)。结论:NBO可以下调急性脑缺血再灌注后脑组织Caspase-9及Caspase-3 mRNA的表达。 展开更多
关键词 常压氧 脑缺血再灌注 CASPASE-9 CASPASE-3 凋亡 大鼠
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PTEN基因表达对EC9706细胞增殖、侵袭、凋亡能力的影响 被引量:13
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作者 黄丽艳 王娜 +4 位作者 汤黎明 许燕 黄幼田 杨红艳 董子明 《郑州大学学报(医学版)》 CAS 北大核心 2013年第1期16-20,共5页
目的:观察PTEN基因表达水平的变化对食管癌EC9706细胞增殖、侵袭、凋亡能力的影响。方法:构建2个靶向PTEN的siRNA载体及1个PTEN表达载体,分别转染EC9706细胞。实验分沉默1组、沉默2组、siRNA载体对照组、PTEN表达组、表达载体对照组和... 目的:观察PTEN基因表达水平的变化对食管癌EC9706细胞增殖、侵袭、凋亡能力的影响。方法:构建2个靶向PTEN的siRNA载体及1个PTEN表达载体,分别转染EC9706细胞。实验分沉默1组、沉默2组、siRNA载体对照组、PTEN表达组、表达载体对照组和未转染组。RT-PCR、Westernblot法检测转染后各组细胞PTEN基因mRNA和蛋白表达水平。采用CCK-8试验、软琼脂克隆形成实验、流式细胞术和Transwell试验分别检测各组细胞增殖、克隆形成能力、细胞凋亡率及侵袭能力。结果:与未转染组比较,沉默1组、沉默2组PTENmRNA和蛋白表达量均降低,PTEN表达组PTENmRNA相对表达量升高(F=25.762,P<0.001);与未转染组比较,PTEN表达组细胞软琼脂克隆形成数和穿透细胞数均降低,细胞凋亡率增加(F=50.752、29.981、32.193,P均<0.001)。结论:上调PTEN的表达水平可以有效抑制EC9706细胞的增殖、克隆形成和侵袭转移能力,同时促进细胞凋亡。 展开更多
关键词 PTEN EC9706 细胞增殖 细胞侵袭 凋亡 食管癌
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双歧杆菌、酪酸梭菌及谷氨酰胺对慢性应激模型小鼠肠黏膜屏障的影响 被引量:11
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作者 王玉玉 张军 +3 位作者 郑鹏远 李付广 刘志强 陈东晖 《郑州大学学报(医学版)》 CAS 北大核心 2014年第2期153-157,共5页
目的:探讨双歧杆菌、酪酸梭菌和谷氨酰胺对慢性应激模型小鼠肠黏膜屏障的影响。方法:60只Balb/c小鼠随机分为正常对照组、模型对照组、双歧杆菌干预组、酪酸梭菌干预组、谷氨酰胺干预组、联合干预组6组。采用避水实验构建小鼠应激模型。... 目的:探讨双歧杆菌、酪酸梭菌和谷氨酰胺对慢性应激模型小鼠肠黏膜屏障的影响。方法:60只Balb/c小鼠随机分为正常对照组、模型对照组、双歧杆菌干预组、酪酸梭菌干预组、谷氨酰胺干预组、联合干预组6组。采用避水实验构建小鼠应激模型。ELISA法测定小鼠血清D-乳酸、二胺氧化酶(DAO)含量,评价小鼠肠道通透性;RT-PCR和Western blot法测定小肠、结肠组织中ZO-1、Occludin mRNA和蛋白的表达。结果:模型对照组小鼠血浆D-乳酸和DAO含量明显高于正常对照组小鼠;双歧杆菌、酪酸梭菌、谷氨酰胺及联合干预后,小鼠血清D-乳酸和DAO含量较模型对照组明显下降,且联合干预组下降最明显(F=5.950,13.214,P<0.001)。模型对照组小鼠小肠、结肠组织中ZO-1、Occludin mRNA和蛋白表达量较正常对照组显著降低;各干预组小肠、结肠组织中的ZO-1、Occludin mRNA和蛋白表达均较模型对照组显著升高,联合干预组的表达量最高(小肠:F=741.007,511.112,291.083,607.764,P<0.001;结肠:F=527.769,411.688,1 244.748,583.786,P<0.001)。结论:在慢性应激条件下,小鼠肠道功能紊乱、通透性增高,双歧杆菌联合谷氨酰胺可以有效缓解上述症状。 展开更多
关键词 双歧杆菌 酪酸梭菌 谷氨酰胺 肠黏膜屏障 小鼠 慢性应激
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旋毛虫河南株TspE1基因克隆及多态性分析 被引量:6
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作者 崔晶 王中全 +2 位作者 王会智 张荣光 赵国强 《郑州大学学报(医学版)》 CAS 北大核心 2002年第3期295-300,共6页
目的:构建旋毛虫河南株成囊前期幼虫编码相对分子质量为31 000的蛋白抗原结构基因(TspE1)的重组质粒(pUC18-TspE1),测定TspE1基因序列,分析旋毛虫河南株的基因多态性。方法:根据TspE1基因已知序列设计合成一对引物,采用RT-PCR技术获取... 目的:构建旋毛虫河南株成囊前期幼虫编码相对分子质量为31 000的蛋白抗原结构基因(TspE1)的重组质粒(pUC18-TspE1),测定TspE1基因序列,分析旋毛虫河南株的基因多态性。方法:根据TspE1基因已知序列设计合成一对引物,采用RT-PCR技术获取旋毛虫成囊前期幼虫目的基因,PCR产物经纯化后用BamHI、HindⅢ进行双酶切,定向克隆人 pUC18质粒,转化大肠杆菌JM109;重组质粒用 BamHI+HindⅢ 酶切及 PCR扩增鉴定。用 Sanger双脱氧链终止法进行 DNA序列测定,应用 DNASIS软件进行同源性比较。结果:RT-PCR扩增获得成囊前期幼虫TspE1基因(871 bp),EcoR I 酶切鉴定正确;筛选出 7个阳性克隆,对目的基因的测序结果显示旋毛虫河南株TspE1基因有5种类型,但都与GenBank中的TspE1基因序列及由其推测的氨基酸序列不完全相同。结论:应用RT-PCR技术扩增出旋毛虫河南株成囊前期幼虫编码相对分子质量为31 000的抗原结构基因.证实TspE1基因在成囊前期幼虫已有表达,结果还提示旋毛虫河南株可能存在有基因多态性。 展开更多
关键词 旋毛虫 成囊前期幼虫 反转录-聚合酶链反应 DNA序列测定 遗传多态性 河南株
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重症肌无力患者胸腺细胞凋亡障碍与Fas表达异常的关系 被引量:7
13
作者 杜英 张清勇 +3 位作者 阮丽荣 梁长春 李倩如 何炜 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2003年第5期450-453,共4页
目的 :探讨重症肌无力 (MG)胸腺细胞凋亡异常、Fas表达异常在自身免疫应答形成中的作用。方法 :用手术切除的MG患者的胸腺 ,制备胸腺提取液和胸腺细胞悬液 ,用MTT比色法测定胸腺细胞的增殖 ;用DNA电泳及细胞形态学观察细胞凋亡 ;用流式... 目的 :探讨重症肌无力 (MG)胸腺细胞凋亡异常、Fas表达异常在自身免疫应答形成中的作用。方法 :用手术切除的MG患者的胸腺 ,制备胸腺提取液和胸腺细胞悬液 ,用MTT比色法测定胸腺细胞的增殖 ;用DNA电泳及细胞形态学观察细胞凋亡 ;用流式细胞仪检测细胞表面Fas的表达 ,用RT PCR结合单链多态构象性分析 (SSCP) ,探讨Fas基因的转录及可能存在的Fas基因突变。结果 :MG患者的胸腺提取液 ,能抑制正常胸腺细胞增殖 ,但不能抑制MG患者胸腺细胞增殖。在地塞米松作用下 ,正常人及患者胸腺细胞的增殖均可被抑制 ,细胞增殖抑制率分别为 5 8.33%和 5 4 .2 6 %。MG患者胸腺细胞的DNA电泳可见梯状条带 ,并且胸腺细胞上Fas的表达百分率增加 [(2 0 .38± 6 .0 7) % ],与空白对照组 [(12 .4 3±4 .32 ) % ]相比较P <0 .0 5。对MG患者胸腺细胞FasmRNA进行RT PCR SSCP分析 ,部分MG患者出现异常电泳条带。结论 :MG患者胸腺细胞的凋亡及Fas分子表达均异常 ,而且存在Fas基因突变 ,提示与本病的发生发展有关。 展开更多
关键词 重症肌无力 胸腺细胞 细胞凋亡 Fas表达异常
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PTEN与食管鳞状细胞癌上皮-间质转化的关系 被引量:6
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作者 王志强 轩小燕 +3 位作者 张红燕 高远 曾庆汝 李珊珊 《临床与实验病理学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第6期662-666,共5页
目的探讨食管鳞癌组织和癌旁正常黏膜组织中PTEN表达与上皮-间质转化的关系。方法采用免疫组织化学技术检测95例食管鳞癌组织和癌旁正常黏膜组织中的PTEN、E-cadherin和vimentin蛋白的表达。结果食管鳞癌组织中PTEN、E-cadherin和vimen... 目的探讨食管鳞癌组织和癌旁正常黏膜组织中PTEN表达与上皮-间质转化的关系。方法采用免疫组织化学技术检测95例食管鳞癌组织和癌旁正常黏膜组织中的PTEN、E-cadherin和vimentin蛋白的表达。结果食管鳞癌组织中PTEN、E-cadherin和vimentin阳性表达率分别为49.5%、40.0%、58.9%,与癌旁正常组织(89.5%、76.8%、29.4%)相比具有明显差异(P<0.05)。食管鳞癌组织中PTEN蛋白与E-cadherin蛋白表达呈正相关(r=0.362,P=0.001),而与vimentin蛋白表达呈负相关(r=-0.208,P=0.018)。结论 PTEN的缺失表达伴随E-cadherin的表达下调和vimentin的表达上调。PTEN可能与食管鳞癌的上皮间质转化有关,并与食管鳞癌的发生及浸润转移相关。 展开更多
关键词 食管肿瘤 鳞状细胞癌 PTEN蛋白 E-CADHERIN VIMENTIN 免疫组织化学
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重组人生长激素对人巨噬细胞分泌IL-1、IL-6和TNF-α的影响 被引量:9
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作者 丁培杰 段长恩 +1 位作者 张世杰 赵国强 《郑州大学学报(医学版)》 CAS 北大核心 2011年第5期684-686,共3页
目的:观察重组人生长激素(rhGH)对人巨噬细胞分泌IL-1、IL-6和TNF-α的影响。方法:以粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子体外诱导从人外周血中分离的单个核细胞,使其分化为巨噬细胞,并用流式细胞术鉴定;诱导获得细胞分为6组,分别用1mg/L脂多糖... 目的:观察重组人生长激素(rhGH)对人巨噬细胞分泌IL-1、IL-6和TNF-α的影响。方法:以粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子体外诱导从人外周血中分离的单个核细胞,使其分化为巨噬细胞,并用流式细胞术鉴定;诱导获得细胞分为6组,分别用1mg/L脂多糖和0、1、4、20及50μg/L的rhGH培养4、8和12h,采用ELISA法测定各组巨噬细胞上清液中IL-1、IL-6和TNF-α的分泌情况。结果:诱导的细胞经鉴定为巨噬细胞。不同质量浓度的rh-GH均可促进所诱导的巨噬细胞分泌IL-1、IL-6和TNF-α;随培养时间的延长,各组巨噬细胞以上细胞因子的分泌量增加。结论:rhGH对人单核巨噬细胞分泌IL-1、IL-6和TNF-α有促进作用,提示其可能参与免疫调节作用。 展开更多
关键词 生长激素 IL-1 IL-6 TNF-Α 巨噬细胞
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加味四君子汤对阿司匹林致大鼠胃黏膜损伤的修复作用 被引量:18
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作者 罗予 张燕 杜楠楠 《郑州大学学报(医学版)》 CAS 北大核心 2011年第1期77-79,共3页
目的:观察加味四君子汤对阿司匹林致大鼠胃黏膜损伤的修复作用。方法:50只雄性Wistar大鼠,10只作为正常对照,余40只灌服阿司匹林300mg/kg,5h后分为4组:造模验证组(以裸眼可见胃黏膜出现溃疡长径≥10mm或黏膜出血为造模成功)、自然恢复[... 目的:观察加味四君子汤对阿司匹林致大鼠胃黏膜损伤的修复作用。方法:50只雄性Wistar大鼠,10只作为正常对照,余40只灌服阿司匹林300mg/kg,5h后分为4组:造模验证组(以裸眼可见胃黏膜出现溃疡长径≥10mm或黏膜出血为造模成功)、自然恢复[生理盐水15mL/(kg.d)灌胃6d]组、加味四君子汤[15mL/(kg.d)灌胃6d]组和思密达[0.6g/(kg.d)灌胃5d]组。给药完成后的第1天,摘眼球取血标本测定血清IL-1β和TNF-α,脱臼处死后取胃黏液测定一氧化氮合酶(NOS)。结果:5组血清IL-1β和TNF-α以及胃黏液中NOS水平比较,差异均有统计学意义(F=8.341、18.232和14.562,P均<0.05)。与正常对照组比较,造模验证和自然恢复组IL-1β、TNF-α和NOS水平升高(P<0.05);加味四君子汤和思密达组则无明显变化(P>0.05)。结论:加味四君子汤对阿司匹林造成的胃黏膜损伤有修复作用。 展开更多
关键词 胃黏膜损伤 加味四君子汤 阿司匹林 大鼠
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乙醇对兔骨髓间充质干细胞6种神经递质mRNA表达的影响 被引量:6
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作者 王义生 张振 +2 位作者 张鑫 赵国强 李月白 《郑州大学学报(医学版)》 CAS 北大核心 2011年第3期357-360,共4页
目的:探讨乙醇对骨髓间充质干细胞(BMSCs)中神经生长因子(NGF)、成纤维细胞生长因子(FGF)、降钙素相关基因肽受体(CGRPR)、血管活性肠肽受体(VIPR)、P物质受体(SPR)及过氧化物酶体增殖子活化受体-γ(PPARγ)表达的影响。方法:收集第3代... 目的:探讨乙醇对骨髓间充质干细胞(BMSCs)中神经生长因子(NGF)、成纤维细胞生长因子(FGF)、降钙素相关基因肽受体(CGRPR)、血管活性肠肽受体(VIPR)、P物质受体(SPR)及过氧化物酶体增殖子活化受体-γ(PPARγ)表达的影响。方法:收集第3代兔BMSCs,随机分为2组,实验组加入终浓度为0.09mol/L的乙醇,对照组正常培养,于培养的第4、7天,采用荧光定量PCR测定2组细胞中上述基因mRNA的表达。结果:第4和7天,实验组BMSCs中FGF、CGRPR、VIPR、NGF和SPR的mRNA表达均较对照组降低(第4天:t=5.327、34.773、12.036、28.660和22.584,P均<0.01;第7天:t=4.664、44.965、8.461、12.809和35.163,P均<0.01),PPARγmRNA表达增高(t=31.107和36.775,P均<0.001)。结论:乙醇可以抑制兔BMSCs中成骨相关神经递质或其受体的表达,促进PPARγ的表达,从而参与酒精性股骨头坏死的发病。 展开更多
关键词 乙醇 股骨头坏死 骨髓间充质干细胞 神经递质
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体外诱导大鼠骨髓间充质干细胞向神经细胞分化 被引量:7
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作者 许予明 秦洁 +5 位作者 邢莹 张博爱 龚光明 宋波 陈宗德 张苏明 《郑州大学学报(医学版)》 CAS 北大核心 2004年第2期269-271,共3页
目的:探讨成年大鼠骨髓间充质干细胞(MSC)向神经细胞体外定向诱导分化的条件。方法:从正常SD大鼠骨髓中分离获取MSC,体外培养扩增纯化后传代于塑料培养皿中,采用丁羟茴醚(BHA)和二甲亚砜(DMSO)对传至3~5代的细胞进行体外诱导分化,采用... 目的:探讨成年大鼠骨髓间充质干细胞(MSC)向神经细胞体外定向诱导分化的条件。方法:从正常SD大鼠骨髓中分离获取MSC,体外培养扩增纯化后传代于塑料培养皿中,采用丁羟茴醚(BHA)和二甲亚砜(DMSO)对传至3~5代的细胞进行体外诱导分化,采用免疫细胞化学对诱导后的细胞进行鉴定。结果:诱导1 h、2 h、3 h后有部分细胞表达神经干细胞标志蛋白nestin,且随诱导时间延长呈下降趋势;诱导5 h后,大部分细胞具有典型神经元形态,表达神经元标志物-神经元特异性烯醇化酶(NSE),少部分细胞呈星型胶质细胞状,表达胶质细胞标志物-胶质纤维酸性蛋白(GFAP)。结论:骨髓间充质干细胞可以在体外培养扩增并诱导成为神经元样细胞和星型胶质样细胞。 展开更多
关键词 骨髓间充质干细胞 细胞培养 神经细胞 分化
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外周血T淋巴细胞的培养、纯化及鉴定 被引量:8
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作者 李付广 李沛 +1 位作者 靳静 董子明 《郑州大学学报(医学版)》 CAS 北大核心 2006年第4期605-607,共3页
目的:建立外周血T淋巴细胞初步纯化方法。方法:取健康人外周血单个核细胞(PBMCs),在低剂量IL2维持下,利用细胞培养淘汰法筛选纯化T淋巴细胞,用流式细胞术检测淋巴细胞培养过程中细胞表面标志的改变。结果:用流式细胞术检测发现:B淋巴细... 目的:建立外周血T淋巴细胞初步纯化方法。方法:取健康人外周血单个核细胞(PBMCs),在低剂量IL2维持下,利用细胞培养淘汰法筛选纯化T淋巴细胞,用流式细胞术检测淋巴细胞培养过程中细胞表面标志的改变。结果:用流式细胞术检测发现:B淋巴细胞于第1周时基本死亡,第3周时完全消失;NK细胞于第1周时明显增加,第4周时大部分死亡;第4周时,所培养的细胞绝大多数为T淋巴细胞。T淋巴细胞亚群的整体变化趋势为:随着培养时间的延长,CD4+百分数稍增加,CD8+百分数明显增加,CD4+/CD8+比值明显降低,CD3+CD16+CD56+百分数明显增加。结论:在IL2维持下,人PBMCs培养4周时,收获培养细胞为初步纯化的T淋巴细胞。 展开更多
关键词 T淋巴细胞 流式细胞术 细胞培养 纯化
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EGF和bFGF联合诱导人脐血MSCs向神经细胞分化过程中端粒酶活性的变化 被引量:6
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作者 秦洁 曹孟德 +6 位作者 许予明 邢莹 陈宗德 鄢文海 韩雪飞 许燕 龚光明 《郑州大学学报(医学版)》 CAS 北大核心 2004年第6期956-960,共5页
目的 :检测重组人表皮生长因子 (EGF)和碱性成纤维生长因子 (bFGF)联合诱导人脐血间充质干细胞(MSCs)向神经细胞分化过程中端粒酶活性的变化 ,以探讨人脐血MSCs的增殖性和安全性 ,为其临床应用提供实验和理论依据。方法 :采集健康自然... 目的 :检测重组人表皮生长因子 (EGF)和碱性成纤维生长因子 (bFGF)联合诱导人脐血间充质干细胞(MSCs)向神经细胞分化过程中端粒酶活性的变化 ,以探讨人脐血MSCs的增殖性和安全性 ,为其临床应用提供实验和理论依据。方法 :采集健康自然分娩产妇志愿捐献的脐血 ,密度梯度离心分离单个核细胞 ,接种于含体积分数为2 0 %胎牛血清的DMEM/F12中 ,对照组不加细胞因子 ,实验组加入EGF和bFGF ,终浓度均为 10 μg/L ,剩余细胞用液氮冻存。培养 2 4h后倾去全部液体以去除未贴壁细胞 ,以后每 3d全量换液 1次。分别收集培养 1d、4d、7d、10d、14d、2 1d的贴壁细胞和冻存细胞 ,将细胞密度调整一致 ,采用反转录 -多聚酶链反应 (RT -PCR)方法检测脐血MSCs培养前后各时间段的巢蛋白 (nestin)和神经丝亚单位M(NF -M)mRNA表达 ;采用端粒重复序列扩增 -酶联免疫吸附实验 (TRAP -ELISA)法检测人脐血MSCs向神经细胞分化过程中的端粒酶活性变化。结果 :RT -PCR检测发现 ,未培养的脐血细胞nestin、NF -MmRNA均呈阳性表达 ;培养后NF -MmRNA的表达随培养时间延长而增强(P <0 .0 1) ;实验组与对照组相比 ,细胞因子能明显促进NF -MmRNA的表达 (P <0 .0 1)。而nestinmRNA的表达随培养时间延长而下降 (P <0 .0 1) ,至第 7d已不能检出 ; 展开更多
关键词 脐血 间充质干细胞 神经分化 端粒酶
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