人脐血间质干细胞移植对脑创伤大鼠行为学和学习、记忆评分的影响 被引量：5

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作者 张鹏 宋来君 +7 位作者 杨波 杜英 关方霞 张智峰 万鼎铭 胡祥 胡平生 李建斌 《郑州大学学报（医学版）》 CAS 北大核心 2006年第2期233-236,共4页

目的研究人脐血间质干细胞(UCB-MSCs)移植对脑创伤大鼠的行为学和学习、记忆评分的影响。方法健康孕妇顺产脐血经分离、培养得到的UCB-MSCs,移植于自由落体撞击法制作的脑创伤模型大鼠受损脑组织内。分别于移植后2d及7d进行大鼠行为学评... 目的研究人脐血间质干细胞(UCB-MSCs)移植对脑创伤大鼠的行为学和学习、记忆评分的影响。方法健康孕妇顺产脐血经分离、培养得到的UCB-MSCs,移植于自由落体撞击法制作的脑创伤模型大鼠受损脑组织内。分别于移植后2d及7d进行大鼠行为学评分,2周和4周行Y迷宫试验。结果移植后2d、7d2组组内行为学评分比较差异有统计学意义(P<0.05);移植后2周学习评分和4周记忆评分2组间差异亦均有统计学意义(P<0.05)。结论UCB-MSCs移植治疗脑创伤大鼠可提高其学习和记忆能力。 展开更多

关键词 脐血 间质干细胞 移植 脑创伤 行为学 大鼠

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免疫抑制并铜绿假单胞菌肺炎小鼠Th17细胞功能的变化及人免疫球蛋白治疗对其的影响 被引量：4

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作者 李鋆璐 邢丽华 +7 位作者 陈渟桑 袁聪聪 赵国强 徐岷 高景 王石磊 李晓燕 曹杰 《华中科技大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2017年第2期185-189,共5页

目的探讨辅助性T细胞17(Th17)的转录调节因子——核孤儿受体γt(RORγt)及主要效应分子白细胞介素-17(IL-17)在免疫抑制并铜绿假单胞菌(PA)肺炎中的变化,以此反映Th17细胞功能变化,以及人免疫球蛋白治疗对其的影响。方法 90只BALB/c小... 目的探讨辅助性T细胞17(Th17)的转录调节因子——核孤儿受体γt(RORγt)及主要效应分子白细胞介素-17(IL-17)在免疫抑制并铜绿假单胞菌(PA)肺炎中的变化,以此反映Th17细胞功能变化,以及人免疫球蛋白治疗对其的影响。方法 90只BALB/c小鼠分为空白组、PA组、免疫抑制组、免疫抑制并PA组及人免疫球蛋白治疗组(分别记为A、B、C、D、E组),每组18只。各组小鼠于造模成功后的4、8及24h处死,观察小鼠大体病理改变,进行肺组织病理学评分,反转录-聚合酶链式反应检测肺组织RORγt mRNA表达,酶联免疫法检测外周血中IL-17表达水平。结果光镜下可见,A、C组小鼠肺组织无明显炎性表现,B、D、E组小鼠肺组织均可见不同程度的组织充血、水肿、炎性细胞浸润、肺泡间隔增宽等炎性改变,均以8h最重,其中D组小鼠肺组织病理评分明显高于其它各组(均P<0.01);B、D、E组小鼠肺组织中RORγt mRNA表达水平较A、C明显上调(均P<0.01),并均以4h达峰值;B、D、E组小鼠外周血中IL-17表达水平较A、C组明显升高(均P<0.01),均于8h达峰值。D组相比于B组,病理评分、RORγt mRNA及IL-17表达水平均增高(均P<0.01),而E组则较B组均降低(均P<0.01)。结论免疫抑制并铜绿假单胞菌肺炎中Th17细胞过度激活,引起过度炎症反应导致组织器官损伤,而人免疫球蛋白可在一定程度上抑制Th17细胞为主的炎症反应,从而减缓此类疾病病情的发展。 展开更多

关键词 免疫抑制 铜绿假单胞菌肺炎 TH17细胞 RORΓT mRNA 白细胞介素-17 人免疫球蛋白

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人脐血间质干细胞在脑创伤大鼠脑内移植后的迁移 被引量：15

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作者 宋来君 张鹏 +6 位作者 杨波 杜英 关方霞 孙剑瑞 万鼎铭 胡祥 胡平生 《郑州大学学报（医学版）》 CAS 北大核心 2006年第2期230-233,共4页

目的研究人脐血间质干细胞(UCB-MSCs)脑内移植后的分布和移行,为细胞移植治疗脑创伤奠定基础。方法健康孕妇顺产脐血经分离、培养得到人UCB-MSCs,并用Hoechst33258标记后备用。自由落体撞击法制作的大鼠脑创伤模型,将已标记的人UCB-MSC... 目的研究人脐血间质干细胞(UCB-MSCs)脑内移植后的分布和移行,为细胞移植治疗脑创伤奠定基础。方法健康孕妇顺产脐血经分离、培养得到人UCB-MSCs,并用Hoechst33258标记后备用。自由落体撞击法制作的大鼠脑创伤模型,将已标记的人UCB-MSCs移植到大鼠的脑损伤区。一段时间后处死大鼠,取脑组织切片,直接在荧光显微镜下观察移植细胞的存活和迁移。结果细胞移植到大鼠脑内能够长时间存活,移植细胞与宿主细胞有很好的相容性,移植后3周细胞发出蓝白色光,沿移植道呈条带状分布,细胞在条带中央较为密集,在条带周围细胞分布逐渐稀疏。移植后6周,损伤组织中可见荧光标记的细胞,细胞分布较3周时稀疏。结论人UCB-MSCs脑内移植后,能够成活并向脑损伤区迁移,与宿主脑组织整合在一起。 展开更多

关键词 脐血 间质干细胞 培养 移植 迁移 大鼠

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人羊膜来源间质干细胞的分离、培养及鉴定 被引量：23

4

作者 李国喜 杨波 +6 位作者 关方霞 杜英 宋来君 张清勇 胡祥 胡平生 徐虹 《郑州大学学报（医学版）》 CAS 北大核心 2006年第2期244-247,共4页

目的：探讨来源于人羊膜间质干细胞（ amniotic-derived mesenchymal stem cells, AD-MSCs）的分离、培养及鉴定。方法：无菌条件下取正常足月剖腹产胎儿的羊膜剪成碎片，加入胰酶37℃消化30min，共2次，然后加入终浓度1．0g／L的胶原酶... 目的：探讨来源于人羊膜间质干细胞（ amniotic-derived mesenchymal stem cells, AD-MSCs）的分离、培养及鉴定。方法：无菌条件下取正常足月剖腹产胎儿的羊膜剪成碎片，加入胰酶37℃消化30min，共2次，然后加入终浓度1．0g／L的胶原酶和0．1g／L的DNA酶，37℃消化60min，收集细胞，用含体积分数为10％胎牛血清（FBS）的DMEM／F12培养基进行培养和纯化。倒置显微镜观察细胞形态，取4～6代的细胞用流式细胞仪分析细胞表面标志，取扩增第3代后的AD-MSCs加人全反式维甲酸（RTRA）和碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）向神经元样细胞诱导分化。结果：来源于羊膜的细胞种植于DMEM／F12培养基中后，可在体外大量扩增并纯化；流式细胞检测显示：CD29、CD44、HLA-ABC阳性表达，CD34、CD45、HLA-DR阴性表达。免疫细胞化学显示AD-MSCs经RTRA和bFGF诱导后表达神经元特异性烯醇化酶，不表达胶质纤维性蛋白。结论：羊膜中存在问质干细胞，其可以在体外培养、扩增、纯化，并可在体外向神经元样细胞分化。 展开更多

关键词 羊膜 间质干细胞 培养 神经元样细胞

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脐血间质干细胞移植对肌萎缩侧索硬化患者神经系统功能的影响 被引量：12

5

作者 杨波 万鼎铭 +7 位作者 曹勇 宋来君 张彤 杜英 许予明 胡祥 徐虹 李建斌 《郑州大学学报（医学版）》 CAS 北大核心 2006年第2期239-241,共3页

目的：探讨脐血间质干细胞移植对肌萎缩侧索硬化（ALS）患者神经系统功能的影响。方法：移植脐血间质干细胞治疗8例ALS患者，选用“神经康复功能评定系统-V2003”软件对治疗前3d、治疗后2～3月ALS患者的肢体运动（Cart-Shephard评分）... 目的：探讨脐血间质干细胞移植对肌萎缩侧索硬化（ALS）患者神经系统功能的影响。方法：移植脐血间质干细胞治疗8例ALS患者，选用“神经康复功能评定系统-V2003”软件对治疗前3d、治疗后2～3月ALS患者的肢体运动（Cart-Shephard评分）、构音障碍（Frenehay评分）、平衡能力（Berg评分）、功能独立性评定（FIM）各方面的功能进行评估。结果：移植治疗前ALS患者Cart-Shephard、Frenehay、Berg、FIM评分与治疗后比较，差异均有统计学意义（P〈0．05）。结论：脐血间质干细胞移植治疗可以显著改善ALS患者的神经系统功能。 展开更多

关键词 脐血间质干细胞 肌萎缩侧索硬化 神经系统功能评估

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人CD34^+脐血干细胞移植治疗大鼠脊髓损伤 被引量：5

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作者 马希峰 杨波 +5 位作者 杜英 阮丽荣 徐虹 胡祥 胡平生 王云龙 《郑州大学学报（医学版）》 CAS 北大核心 2006年第2期227-230,共4页

目的探讨人脐血来源的CD34+干细胞治疗脊髓损伤的可行性,为脊髓功能障碍性疾病的临床治疗打下基础。方法用密度梯度离心及免疫磁珠法分离出人CD34+脐血干细胞,在含有B27、碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)、人重组干细胞因子(rhSCF)的营养... 目的探讨人脐血来源的CD34+干细胞治疗脊髓损伤的可行性,为脊髓功能障碍性疾病的临床治疗打下基础。方法用密度梯度离心及免疫磁珠法分离出人CD34+脐血干细胞,在含有B27、碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)、人重组干细胞因子(rhSCF)的营养液中培养,用核荧光染色剂Hoechst33258标记细胞;制作大鼠脊髓横断模型,造成大鼠下肢瘫痪,在脊髓损伤3d移植荧光标记的CD34+脐血干细胞,观察移植后的动物行为变化、脊髓组织形态学变化等。结果脊髓损伤大鼠移植CD34+脐血干细胞5~6d可见瘫痪大鼠的后肢肌力开始恢复,10~15d后可出现爬行,3~4周后后肢活动活跃;对照组瘫痪的肢体未见恢复。脊髓移植区肉眼可见有增生的组织充填,镜下有大量神经胶质原纤维酸性蛋白、神经元特异性烯醇化酶阳性的细胞,移植区Hoechst33258荧光标记阳性细胞增生。结论移植的CD34+脐血干细胞可在移植部位增殖,并使脊髓横断大鼠运动功能恢复,有望成为治疗脊髓损伤的有效手段。 展开更多

关键词 CD34 脐血 脊髓损伤 移植 大鼠

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紫杉醇诱导人肺腺癌多药耐药细胞系的建立及DNA polβ、mdr1、mrp1、GST-πl、rp和topo Ⅱ基因的表达 被引量：4

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作者 王志举 樊红琨 +2 位作者 李敏 赵国强 董子明 《西安交通大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2007年第4期358-363,共6页

目的体外建立人肺腺癌细胞多药耐药细胞系,观察其生物学特性并探讨其细胞内DNA polβ和多药耐药基因mdr1、mrp1、GST-πl、rp和topo Ⅱ的表达及意义。方法以紫杉醇为诱导药,采用间歇逐步增加剂量法建立人肺腺癌多药耐药细胞系A549/TXL20... 目的体外建立人肺腺癌细胞多药耐药细胞系,观察其生物学特性并探讨其细胞内DNA polβ和多药耐药基因mdr1、mrp1、GST-πl、rp和topo Ⅱ的表达及意义。方法以紫杉醇为诱导药,采用间歇逐步增加剂量法建立人肺腺癌多药耐药细胞系A549/TXL20;MTT法检测A549/TXL20对紫杉醇、顺铂、长春新碱、5-氟尿嘧啶和丝裂霉素的耐药指数(RF);细胞克隆形成法测定A549/TXL20对紫杉醇的敏感性;高效液相色谱测定细胞内紫杉醇的浓度;RT-PCR法测定人肺腺癌多药耐药细胞系A549/TXL20中DNA polβ、mdr1、GST-π、mrp1l、rp和topo Ⅱ的基因表达。结果①A549/TXL20形态不规则,较亲本细胞略小,核/浆比增加,倍增时间没有明显变化;②A549/TXL20对紫杉醇的RF为19.3,对顺铂的RF为67.4,对长春新碱、5-氟尿嘧啶、丝裂霉素和顺铂等抗癌药物有不同程度的耐药性;③A549/TXL20对紫杉醇的敏感性降低,其紫杉醇的含量较亲本细胞下降;④A549/TXL20细胞中DNA polβ、mdr1、GST-π、mrp1l、rp的基因表达量分别较A549细胞中的表达量明显增加,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论建立了相对稳定的人肺腺癌多药耐药细胞系A549/TXL20,其耐药机制可能与mdr1、GST-π、mrp1l、rp和DNA polβ基因的高表达有关。 展开更多

关键词 人肺腺癌细胞系 多药耐药 紫杉醇 DNA聚合酶Β

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脐血间质干细胞移植对肌萎缩侧索硬化患者血浆和脑脊液中谷氨酸浓度的影响 被引量：7

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作者 曹勇 杨波 +7 位作者 宋来君 杜英 关方霞 张智峰 孙剑瑞 胡祥 胡平生 李建斌 《郑州大学学报（医学版）》 CAS 北大核心 2006年第2期236-238,共3页

目的观察脐血间质干细胞(UCB-MSCs)移植对肌萎缩侧索硬化(ALS)患者血浆及脑脊液谷氨酸(Glu)浓度的影响。方法治疗组8例ALS患者采用静脉滴注结合腰椎脊髓蛛网膜下腔注射UCB-MSCs悬液,行UCB-MSCs移植治疗。应用柱前衍生反相高效液相色谱... 目的观察脐血间质干细胞(UCB-MSCs)移植对肌萎缩侧索硬化(ALS)患者血浆及脑脊液谷氨酸(Glu)浓度的影响。方法治疗组8例ALS患者采用静脉滴注结合腰椎脊髓蛛网膜下腔注射UCB-MSCs悬液,行UCB-MSCs移植治疗。应用柱前衍生反相高效液相色谱法分别测定对照组(非神经系统疾病组)和治疗组不同治疗时间血浆和脑脊液中Glu的浓度。结果与治疗前相比,治疗组治疗后3周、3个月血浆、脑脊液Glu浓度降低(P<0.05),但均高于对照组(P<0.05);治疗后3周与3个月相比,治疗组血浆、脑脊液Glu浓度差异无统计学意义(P>0.05)。结论脐血间质干细胞移植治疗能够降低ALS患者血浆、脑脊液中Glu浓度。 展开更多

关键词 脐血间质干细胞 肌萎缩侧索硬化 谷氨酸

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神经生长因子对神经干细胞增殖的影响 被引量：5

9

作者 孙剑瑞 杨波 +6 位作者 杜英 宋来君 关方霞 胡祥 胡平生 徐虹 王云龙 《郑州大学学报（医学版）》 CAS 北大核心 2006年第2期241-244,共4页

目的观察不同剂量神经生长因子(NGF)对体外培养的神经干细胞(NSCs)增殖的影响。方法取人胚胎组织脑室区/脑室下区(VZ/SVZ)组织分离神经干细胞,培养于DMEM/F12+B27细胞基础培养液中,加入碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)作为阳性对照组;实... 目的观察不同剂量神经生长因子(NGF)对体外培养的神经干细胞(NSCs)增殖的影响。方法取人胚胎组织脑室区/脑室下区(VZ/SVZ)组织分离神经干细胞,培养于DMEM/F12+B27细胞基础培养液中,加入碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)作为阳性对照组;实验组培养液中分别加入NGF至终浓度的50μg/L、20μg/L、10μg/L、5μg/L、2μg/L;培养液无添加成分作为阴性对照组。用MTT比色分析法测定细胞增殖能力,倒置显微镜下观察细胞增殖情况。结果3dMTT比色显示,50μg/LNGF组细胞增殖较其他各组低(P<0.05);培养10d时细胞活力测定表明各组细胞均有一定程度的增殖,10μg/LNGF组与阳性对照组比较差异无统计学意义,与阴性对照组比较差异有统计学意义。结论在一定浓度范围内NGF能明显促进神经干细胞的增殖。 展开更多

关键词 神经生长因子 神经干细胞 增殖

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不同途径羊膜间充质干细胞移植治疗大鼠脑外伤 被引量：3

10

作者 王公平 杨波 +5 位作者 关方霞 杜英 常克亮 宋来君 胡祥 曾光伟 《中南大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2008年第10期926-930,共5页

目的:通过不同途径移植羊膜间充质干细胞治疗脑损伤大鼠,比较脑损伤大鼠行为学的改善,为脑损伤治疗选择有效的移植途径。方法:制作80只Wistar大鼠脑损伤模型,分为对照组与治疗组。对照组为单纯脑损伤大鼠,共20只;治疗组分为尾静脉移植... 目的:通过不同途径移植羊膜间充质干细胞治疗脑损伤大鼠,比较脑损伤大鼠行为学的改善,为脑损伤治疗选择有效的移植途径。方法:制作80只Wistar大鼠脑损伤模型,分为对照组与治疗组。对照组为单纯脑损伤大鼠,共20只;治疗组分为尾静脉移植组(A组)、侧脑室移植组(B组)、脑损伤区移植组(C组),每组20只,均给与植入人羊膜间充质干细胞,采用NSS评分法评定治疗效果。结果:脑损伤区移植组大鼠行为学改善与其他各组相比,差异有统计学意义(P<0.05);侧脑室移植组分别与尾静脉移植组及对照组相比,差异有统计学意义(P<0.05);而尾静脉移植组与对照组相比,差异无统计学意义(P>0.05)。结论:脑损伤区移植羊膜间充质干细胞是治疗脑损伤大鼠的有效途径。 展开更多

关键词 羊膜间充质干细胞 移植 大鼠 脑损伤

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系统性红斑狼疮患者外周血单个核细胞中转化生长因子-β1和结缔组织生长因子mRNA表达水平的研究 被引量：1

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作者 李冬芹 代永霞 +4 位作者 张洁 尹光文 李付广 杨桂枝 王芳 《临床皮肤科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第2期80-82,共3页

目的探讨转化生长因子β1(TGF-β1)和结缔组织生长因子(CTGF)在系统性红斑狼疮(SLE)发病机制中的作用及临床意义。方法:采集SLE患者外周血单个核细胞(PBMCs)提取总RNA,利用SYBR Green Ⅰ实时反转录荧光定量PCR的方法,以β肌动蛋白(β-ac... 目的探讨转化生长因子β1(TGF-β1)和结缔组织生长因子(CTGF)在系统性红斑狼疮(SLE)发病机制中的作用及临床意义。方法:采集SLE患者外周血单个核细胞(PBMCs)提取总RNA,利用SYBR Green Ⅰ实时反转录荧光定量PCR的方法,以β肌动蛋白(β-actin)为内对照基因,检测每组中TGF-β1和CTGF mRNA的相对表达水平。结果:①活动期SLE患者PBMCs中TGF-β1和CTGF表达显著高于非活动期及正常对照组,CTGF在正常对照组和非活动期SLE患者的表达无明显差异;②肾损害组SLE患者TGF-β1和CTGF表达明显高于无肾损害组和正常对照组;③未治疗组SLE患者TGF-β1的表达高于治疗组和正常对照组。经糖皮质激素治疗后TGF-β1表达水平明显下降,而CTGF在治疗组和未治疗组的表达无差异。结论:TGF-β1和CTGF在SLE发病和发展过程中起重要作用,检测PBMCs中TGF-β1和CTGF的表达可作为疾病活动、病情判断的指标之一,检测PBMCs中TGF-β 1的表达可作为观察治疗效果的指标之一。 展开更多

关键词 红斑狼疮 系统性 单个核细胞 外周血 转化生长因子Β1 结缔组织生长因子

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人增生型胸腺组织中重症肌无力相关蛋白鉴定

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作者 高峰 路浩 +3 位作者 崔新征 郭亮 杜英 张清勇 《郑州大学学报（医学版）》 CAS 北大核心 2007年第6期1065-1069,共5页

目的:筛选出增生型胸腺组织中的重症肌无力(MG)相关蛋白,并对其作出鉴定。方法:利用已经建立的胸腺组织蛋白质组双向电泳技术获得分离良好的SDS-PAGE凝胶,将凝胶中的蛋白点电泳转移到硝酸纤维素膜上,分别以异体MG患者血清、正常人血清... 目的:筛选出增生型胸腺组织中的重症肌无力(MG)相关蛋白,并对其作出鉴定。方法:利用已经建立的胸腺组织蛋白质组双向电泳技术获得分离良好的SDS-PAGE凝胶,将凝胶中的蛋白点电泳转移到硝酸纤维素膜上,分别以异体MG患者血清、正常人血清和自身免疫病患者血清为第一抗体,进行免疫印迹试验;然后,在参考凝胶上挖取MG组特异显色点所对应的蛋白质点,经胶内胰蛋白酶消化,对所得多肽混合物进行基质辅助激光解析电离飞行时间质谱分析,得到肽质量指纹图谱(PMF)数据,登录网站http://www.matrixscience.com,用Mascot程序检索NCBInr数据库,鉴定蛋白质。结果:免疫印迹试验共获得5个MG特异显色点,编号为2、4、6、7、9;经质谱分析得到5个蛋白质PMF图谱,经数据库检索鉴定,这些蛋白分别为:异肽酶T、核因子p97、亚铁血红素结合蛋白2、肿瘤翻译受控蛋白1和角蛋白10。结论:利用免疫印迹试验筛选和质谱分析,成功鉴定出增生型胸腺组织中的5个MG相关蛋白,为进一步探讨这些蛋白在MG发生发展中的作用奠定了基础。 展开更多

关键词 重症肌无力 胸腺 蛋白质组

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碱性成纤维细胞生长因子真核荧光表达载体的构建

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作者 许予明 马兴荣 +4 位作者 宋波 秦洁 唐洲平 赵国强 张苏明 《郑州大学学报（医学版）》 CAS 北大核心 2004年第4期578-581,共4页

目的 :构建可在真核细胞中表达碱性成纤维细胞生长因子 (basicfibroblastgrowthfactor,bFGF)的真核表达载体 ,为进一步开展bFGF基因治疗缺血性脑血管疾病奠定基础。方法 :①采用线栓法建立SD大鼠大脑中动脉局灶性脑缺血模型 ,取缺血灶... 目的 :构建可在真核细胞中表达碱性成纤维细胞生长因子 (basicfibroblastgrowthfactor,bFGF)的真核表达载体 ,为进一步开展bFGF基因治疗缺血性脑血管疾病奠定基础。方法 :①采用线栓法建立SD大鼠大脑中动脉局灶性脑缺血模型 ,取缺血灶周围脑组织经逆转录聚合酶链反应 (RT PCR)扩增bFGF基因 ;②将bFGFDNA克隆到pGEM TEasy质粒 ,经菌落PCR和HindⅢ和EcoRI双酶切鉴定 ;③然后将bFGFDNA亚克隆到pEGFP N3质粒 ;通过抗性基因筛选阳性克隆 ,经菌落PCR、酶切和测序鉴定。结果 :菌落PCR、酶切和DNA序列鉴定均证实插入片段与GenBank报道的bFGF基因序列一致。结论 :经RT 展开更多

关键词 碱性成纤维细胞生长因子 逆转录聚合酶链反应 荧光真核表达载体

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CLPTM1L与miR-494靶向关系的双荧光素酶报告实验验证 被引量：4

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作者 张仁 张圣洁 +2 位作者 张学研 李彤 臧文巧 《郑州大学学报（医学版）》 CAS 北大核心 2015年第3期430-433,共4页

目的:确定miR-494与CLPTM1L的靶向关系。方法:采用生物信息学方法预测miR-494与CLPTM1L基因的结合位点。采用PCR技术扩增CLPTM1L基因3'UTR片段,并克隆至pmir GLO载体,构建野生型及突变型重组双荧光素酶报告质粒。将培养的293T细胞分... 目的:确定miR-494与CLPTM1L的靶向关系。方法:采用生物信息学方法预测miR-494与CLPTM1L基因的结合位点。采用PCR技术扩增CLPTM1L基因3'UTR片段,并克隆至pmir GLO载体,构建野生型及突变型重组双荧光素酶报告质粒。将培养的293T细胞分为4组,分别共转染miR-494或阴性对照和pmir GLO-CLPTM1L-W 3'UTR或pmir GLOCLPTM1L-M 3'UTR,检测4组细胞中荧光素酶活性。结果:酶切和测序证实成功构建了野生型及突变型重组双荧光素酶报告质粒pmir GLO-CLPTM1L-W 3'UTR和pmir GLO-CLPTM1L-M 3'UTR;与共转染miR-494 mimics和突变型CLPTM1L3'UTR质粒的293T细胞中荧光素酶活性(1.056 4±0.163 4)、共转染阴性对照序列和突变质粒的293T细胞中荧光素酶活性(0.961 3±0.177 9)或野生型质粒的293T细胞中荧光素酶活性(0.983 4±0.001 2)相比,共转染miR-494 mimics和野生型CLPTM1L 3'UTR质粒的293T细胞中荧光素酶活性(0.651 6±0.136 4)明显降低(F=4.476,P=0.040),其他3组间比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论:CLPTM1L与miR-494存在靶向关系。 展开更多

关键词 miR-494 CLPTM1L 双荧光素酶报告系统

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