目的:通过构建FoxO1表达和干扰慢病毒载体,建立细胞内FoxO1-KLF2-S1P1信号通路调控研究模型,观察FoxO1过表达、干扰表达在Jurkat细胞内对其下游分子表达及功能的影响。方法:构建FoxO1表达和干扰表达慢病毒载体,分别感染Jurkat细胞,采用...目的:通过构建FoxO1表达和干扰慢病毒载体,建立细胞内FoxO1-KLF2-S1P1信号通路调控研究模型,观察FoxO1过表达、干扰表达在Jurkat细胞内对其下游分子表达及功能的影响。方法:构建FoxO1表达和干扰表达慢病毒载体,分别感染Jurkat细胞,采用荧光定量PCR、Western blot和流式细胞术检测S1P1、CD62L、CCR7、CD69 mRNA水平和蛋白分子的表达。结果:FoxO1过表达组于感染后120 h FoxO1、KLF2、S1P1和CD62L mRNA水平显著增高(P<0.05),FoxO1、FoxO1-p和KLF2胞浆蛋白水平增高,S1P1^+细胞和CD62L^+细胞比率增高(P<0.05),CCR7^+细胞和CD69^+细胞未见显著改变(P>0.05)。FoxO1干扰组于转染后120 h FoxO1、KLF2、S1P1和CD62L mRNA水平降低(P<0.05),FoxO1、FoxO1-p和KLF2胞浆蛋白水平低于对照组,S1P1^+细胞百分比增多(P<0.05),但S1P1^+细胞和CD62L^+细胞在72 h时减少(P<0.05)。结论:FoxO1表达和干扰慢病毒载体转染Jurkat细胞并调节KLF2、S1P1和CD62L等分子的表达,为开展细胞内FoxO1-KLF2-S1P1信号通路调控和细胞相关功能的研究打下了基础。展开更多
文摘目的:通过构建FoxO1表达和干扰慢病毒载体,建立细胞内FoxO1-KLF2-S1P1信号通路调控研究模型,观察FoxO1过表达、干扰表达在Jurkat细胞内对其下游分子表达及功能的影响。方法:构建FoxO1表达和干扰表达慢病毒载体,分别感染Jurkat细胞,采用荧光定量PCR、Western blot和流式细胞术检测S1P1、CD62L、CCR7、CD69 mRNA水平和蛋白分子的表达。结果:FoxO1过表达组于感染后120 h FoxO1、KLF2、S1P1和CD62L mRNA水平显著增高(P<0.05),FoxO1、FoxO1-p和KLF2胞浆蛋白水平增高,S1P1^+细胞和CD62L^+细胞比率增高(P<0.05),CCR7^+细胞和CD69^+细胞未见显著改变(P>0.05)。FoxO1干扰组于转染后120 h FoxO1、KLF2、S1P1和CD62L mRNA水平降低(P<0.05),FoxO1、FoxO1-p和KLF2胞浆蛋白水平低于对照组,S1P1^+细胞百分比增多(P<0.05),但S1P1^+细胞和CD62L^+细胞在72 h时减少(P<0.05)。结论:FoxO1表达和干扰慢病毒载体转染Jurkat细胞并调节KLF2、S1P1和CD62L等分子的表达,为开展细胞内FoxO1-KLF2-S1P1信号通路调控和细胞相关功能的研究打下了基础。
