EGF和bFGF对脐血单个核细胞τ蛋白及微管相关蛋白-2 mRNA表达的影响 被引量：8

1

作者 鄢文海 曹孟德 +5 位作者 王建枝 刘计荣 龚光明 许燕 韩雪飞 邢莹 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第1期108-112,共5页

目的探讨脐血单个核细胞在细胞因子诱导作用下τ蛋白及微管相关蛋白-2(MAP2)mRNA的表达。方法用密度梯度离心法分离脐血单个核细胞,接种于含20%胎牛血清H-DMEM培养瓶内。以不加任何生长因子的培养为对照组,其余3组分别加入细胞因子EGF+b... 目的探讨脐血单个核细胞在细胞因子诱导作用下τ蛋白及微管相关蛋白-2(MAP2)mRNA的表达。方法用密度梯度离心法分离脐血单个核细胞,接种于含20%胎牛血清H-DMEM培养瓶内。以不加任何生长因子的培养为对照组,其余3组分别加入细胞因子EGF+bFGF、bFGF、EGF,终浓度均为20μg/L。倒置显微镜下观察细胞形态变化,RT-PCR方法检测脐血单个核细胞培养前后τ蛋白及MAP2mRNA,免疫细胞化学方法检测τ蛋白及MAP2阳性细胞。结果培养前,脐血单个核细胞胞体小呈圆形;培养后EGF+bFGF组细胞胞体较大,突起粗而长,EGF组细胞胞体呈梭形,有1-2个长突触,bFGF组细胞胞体较小、有多个细长突起,形似星形细胞,对照组细胞形态类似于bFGF组,但数量较少。RT-PCR检测未培养脐血单个核细胞MAP2mRNA表达阳性而τ蛋白mRNA呈阴性,培养后MAP2mRNA表达增强,τ蛋白mRNA亦呈阳性;免疫细胞化学方法可检测MAP2及τ蛋白阳性细胞在EGF+bFGF组、EGF组、bFGF组、对照组分别为335%、256%、196%、144%和298%、214%、153%、135%。结论脐血单个核细胞中存在的神经元特异性分子,经培养和生长因子调控后表达增强,联合使用bFGF、EGF具有协同作用。 展开更多

关键词 胎血 表皮生长因子 碱性成纤维细胞生长因子 微管相关蛋白质类

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RNAi干扰食管癌EC9706细胞MTA1基因表达对侵袭和迁移的影响 被引量：5

2

作者 杨松华 赵国强 +2 位作者 郑红 赵继敏 董子明 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第6期503-505,共3页

目的采用RNAi抑制食管癌EC9706细胞株MTA1基因的表达,观察对食管癌细胞侵袭和迁移的影响。方法用脂质体包裹转染沉默MTA1表达的siRNA表达载体入食管癌细胞EC9706。定量RT-PCR和免疫印迹分别检测MTA1 mRNA和蛋白表达情况;划痕损伤实验和... 目的采用RNAi抑制食管癌EC9706细胞株MTA1基因的表达,观察对食管癌细胞侵袭和迁移的影响。方法用脂质体包裹转染沉默MTA1表达的siRNA表达载体入食管癌细胞EC9706。定量RT-PCR和免疫印迹分别检测MTA1 mRNA和蛋白表达情况;划痕损伤实验和细胞体外侵袭实验分别测定迁移和侵袭的影响。结果定量RT-PCR检测显示,MTA1基因的表达水平明显降低;转染沉默MTA1的siRNA表达载体组的食管癌细胞划痕未愈合,穿透Matrigel的细胞数量明显减少,与未转染组、转染空载体组和转染无关序列siRNA载体组比较差异有显著性(P<0·05)。结论RNA干扰介导的MTA1基因表达沉寂可有效降低食管癌细胞侵袭和迁移;MTA1基因可能成为肿瘤治疗上有前途的分子靶点。 展开更多

关键词 MTA1 RNA干扰 侵袭 迁移

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细胞色素C和Survivin在结肠腺癌中的表达及临床意义 被引量：10

3

作者 李维山 左曙光 +1 位作者 鄢文海 宋国华 《实用医学杂志》 CAS 北大核心 2012年第2期226-228,共3页

目的:研究细胞色素C(Cyt-C)和Survivin在结肠腺癌中的表达及其与临床病理特征的关系,并探讨Cyt-C和Survivin在结肠腺癌中的表达的相关性。方法:采用手工组织芯片技术及免疫组织化学技术(S-P法)检测59例结肠腺癌和10例正常结肠组织中Cyt-... 目的:研究细胞色素C(Cyt-C)和Survivin在结肠腺癌中的表达及其与临床病理特征的关系,并探讨Cyt-C和Survivin在结肠腺癌中的表达的相关性。方法:采用手工组织芯片技术及免疫组织化学技术(S-P法)检测59例结肠腺癌和10例正常结肠组织中Cyt-C和Survivin的表达水平。结果:Survivin和Cyt-C在正常结肠中的表达率分别为20.0%和30.0%,在结肠腺癌中的表达率分别为69.5%和78.0%,Survivin蛋白和Cyt-C在结肠腺癌中的表达增加(P<0.05);Cyt-C在结肠癌中的表达和肿瘤细胞的分化程度成正相关(P<0.05);Survivin蛋白在结肠癌中的表达和肿瘤细胞的分化程度成负相关(P<0.05);两者与浸润深度,肿瘤的大小,患者的年龄,淋巴结有无转移均无相关性(P>0.05)。结论:Survivin和Cyt-C在结肠癌中表达增加提示Survivin和Cyt-C对结肠癌的发生发展起着重要作用。 展开更多

关键词 结肠肿瘤 凋亡 SURVIVIN Cyt—C 组织芯片

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RNA干扰靶向沉默polβ基因对人卵巢癌细胞增殖活性及对化疗药物敏感性的影响 被引量：4

4

作者 韩丽萍 刘娟芳 +1 位作者 赵国强 董子明 《中国肿瘤临床》 CAS CSCD 北大核心 2011年第4期197-199,共3页

目的:探讨RNA干扰(RNA interference,RNAi)沉默DNA聚合酶β(polβ)基因的表达后,人卵巢癌细胞HO-8910的增殖活性变化及对化疗药物顺铂敏感性的改变。方法:利用已构建成功的针对polβ基因的siRNA(small interfering RNA,siRNA)重组质粒,... 目的:探讨RNA干扰(RNA interference,RNAi)沉默DNA聚合酶β(polβ)基因的表达后,人卵巢癌细胞HO-8910的增殖活性变化及对化疗药物顺铂敏感性的改变。方法:利用已构建成功的针对polβ基因的siRNA(small interfering RNA,siRNA)重组质粒,转染人卵巢癌细胞HO-8910,通过荧光倒置显微镜观察转染效率;荧光定量PCR检测转染后HO-8910细胞中polβmRNA的表达水平;用MTT法观察检测基因沉默后HO-8910细胞增殖能力变化;台盼蓝染色细胞计数法了解细胞对顺铂敏感性的变化。结果:已构建的靶向polβ基因的siRNA转染人卵巢癌细胞HO-8910后,荧光倒置显微镜下可见大量绿色荧光颗粒表达;荧光定量PCR检测发现,转染后细胞中polβ的mRNA水平表达显著降低(P<0.01);转染后的HO-8910细胞生长速度减慢、增殖活性下降;对顺铂的敏感性提高(P<0.05)。结论:RNAi有效沉默细胞中polβ基因表达,提高了肿瘤细胞对化疗药物顺铂的敏感性、降低了细胞的增殖活性。从而改善卵巢癌患者的预后,为肿瘤的有效干预和治疗开拓新的领域。 展开更多

关键词 DNA聚合酶Β 小干扰RNA HO-8910 顺铂 荧光定量PCR

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K562细胞外泌体诱导特异性CTL生成的研究 被引量：7

5

作者 陈绍倩 杜英 +3 位作者 王鑫 顾巧丽 黄玉敏 董子明 《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 2006年第6期1168-1171,共4页

为了研究人白血病细胞株K562细胞分泌的外泌体(exosomes)及K562细胞总RNA刺激人树突状细胞(DC)分泌的外泌体能否诱导出K562细胞特异性CTL,采用四步离心法提取K562细胞及K562细胞总RNA刺激人树突状细胞的培养上清液中的外泌体,并诱导CTL... 为了研究人白血病细胞株K562细胞分泌的外泌体(exosomes)及K562细胞总RNA刺激人树突状细胞(DC)分泌的外泌体能否诱导出K562细胞特异性CTL,采用四步离心法提取K562细胞及K562细胞总RNA刺激人树突状细胞的培养上清液中的外泌体,并诱导CTL生成,以四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测CTL对K562细胞的杀伤作用。结果显示K562细胞外泌体和K562细胞RNA刺激的DC和外泌体均能明显促进对K562细胞的杀伤活性,与未经外泌体作用的对照组相比有显著性差异(P<0.05)。外泌体作用后对K562细胞的杀伤作用明显比对HL-60细胞的杀伤作用强,其差异有显著性(P<0.05)。结论K562细胞外泌体能够诱导出特异性抗白血病细胞的免疫反应。 展开更多

关键词 K562细胞 树突状细胞 外泌体 细胞毒T淋巴细胞

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互隔交链孢酚通过PKA-CREB信号通路激活NIH3T3细胞中DNA聚合酶β表达 被引量：3

6

作者 赵继敏 路静 +4 位作者 刘康栋 王瑾瑾 杨洪艳 黄幼田 董子明 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第4期744-748,共5页

目的:探讨互隔交链孢酚(AOH)诱导小鼠胚胎成纤维细胞NIH3T3中DNA聚合酶β(DNA polβ)表达增高的分子信号通路。方法:①15μmol/L AOH作用NIH3T3细胞16 h,利用Western blotting方法检测细胞中DNA polβ的表达,并利用磷酸化CREB抗体检测AO... 目的:探讨互隔交链孢酚(AOH)诱导小鼠胚胎成纤维细胞NIH3T3中DNA聚合酶β(DNA polβ)表达增高的分子信号通路。方法:①15μmol/L AOH作用NIH3T3细胞16 h,利用Western blotting方法检测细胞中DNA polβ的表达,并利用磷酸化CREB抗体检测AOH作用后NIH3T3细胞中CREB信号分子是否被激活。②利用PKA-CREB信号通路特异性抑制剂H89预处理NIH3T3细胞1 h,再加入AOH作用,分别检测磷酸化CREB和DNA polβ表达的变化。结果:①与溶剂对照组相比,AOH诱导NIH3T3细胞中DNA polβ表达明显增高,而且磷酸化CREB蛋白含量也明显增加,差异均显著。②用PKA特异性抑制剂H89预处理,可部分抑制NIH3T3细胞中CREB蛋白的磷酸化,并且降低了AOH引起的NIH3T3细胞中DNA polβ的表达增加。结论:PKA-CREB信号通路在AOH诱导的NIH3T3细胞中DNA polβ表达起重要作用。 展开更多

关键词 链格孢酚 DNA聚合酶Β 蛋白激酶A CAMP反应元件结合蛋白 NIH3T3细胞

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利用慢病毒载体快速建立表达外源基因的哺乳动物细胞系 被引量：2

7

作者 陈平 胡涛 +5 位作者 薛敬礼 杜春燕 章金涛 朱奎成 金树兴 王纯耀 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第7期210-213,共4页

建立稳定表达外源基因的哺乳动物细胞系是一项重要的生物技术,介绍了联合使用慢病毒载体和流式细胞仪分选技术来建立稳定表达绿色荧光蛋白的293T细胞系。结果表明,在1个月左右的时间里即可获得表达绿色荧光蛋白的293T细胞系,阳性细胞率... 建立稳定表达外源基因的哺乳动物细胞系是一项重要的生物技术,介绍了联合使用慢病毒载体和流式细胞仪分选技术来建立稳定表达绿色荧光蛋白的293T细胞系。结果表明,在1个月左右的时间里即可获得表达绿色荧光蛋白的293T细胞系,阳性细胞率高达96.5%,而且建立的细胞系能够稳定传代。因此,联合慢病毒载体和流式细胞仪分选技术的策略对于建立稳定表达外源基因的哺乳动物细胞系快捷和可靠。 展开更多

关键词 慢病毒载体 流式细胞仪分选技术 绿色荧光蛋白 哺乳动物细胞系

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河南贲门癌高发区贲门癌组织浸润淋巴细胞CD4、CD8、γδT和肿瘤细胞P53的表达及意义 被引量：2

8

作者 江亚南 范宗民 +2 位作者 王苒 任景丽 王立东 《实用医学杂志》 CAS 北大核心 2012年第13期2193-2195,共3页

目的:探讨河南贲门癌高发区贲门癌组织浸润淋巴细胞CD4、CD8、γδT和肿瘤细胞P53的表达变化特征、相关性及贲门癌组织浸润淋巴细胞CD4、CD8和γδT的表达与贲门癌临床病理的相关性。方法:采用组织病理学方法分析40例贲门癌的组织病理... 目的:探讨河南贲门癌高发区贲门癌组织浸润淋巴细胞CD4、CD8、γδT和肿瘤细胞P53的表达变化特征、相关性及贲门癌组织浸润淋巴细胞CD4、CD8和γδT的表达与贲门癌临床病理的相关性。方法:采用组织病理学方法分析40例贲门癌的组织病理学诊断并采用免疫组化卵白素-生物素-过氧化物酶复合物法分析其浸润淋巴细胞CD4、CD8、γδT的表达状况和肿瘤细胞P53的表达状况。结果:40例贲门癌组织,P53染色阳性率是75.0%,30例P53阳性贲门癌组织中,P53阳性肿瘤细胞数为99±22。CD8和γδT阳性淋巴细胞数在P53阳性组明显高于P53阴性组(P<0.05);而CD4阳性淋巴细胞数在P53阳性组低于P53阴性组(P>0.05);P53阳性肿瘤细胞与CD8阳性淋巴细胞呈正相关(P<0.05)。CD4、CD8、γδT阳性淋巴细胞在不同性别、不同年龄、不同分化、不同分期及有无淋巴结转移的贲门癌浸润淋巴细胞中的表达差异均无显著性(P>0.05)。结论:贲门癌患者中P53蛋白可能作为肿瘤抗原引起以CD8+T淋巴细胞为主的特异性免疫反应,为P53作为贲门癌患者免疫治疗的一个靶点提供了理论依据。贲门癌组织浸润T淋巴细胞亚群类型与贲门癌临床特征(中低分化、肿瘤中晚期、有无淋巴结转移)均无相关性。 展开更多

关键词 胃肿瘤 贲门癌 CD4 CD8 ΓΔT P53 河南

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转录因子8在食管癌细胞EC1的表达及其对EC1细胞迁移侵袭的影响

9

作者 江亚南 张艳艳 +4 位作者 杨洪艳 田芳 马俊芬 刘康栋 董子明 《实用医学杂志》 CAS 北大核心 2013年第10期1552-1555,共4页

目的:研究食管癌细胞EC1中转录因子8(transcription factor 8,TCF8)的表达对EC1细胞迁移侵袭的影响。方法:通过共聚焦显微镜观察EC1细胞中TCF8的表达;吡咯烷二硫代氨基甲酸盐(pyrrolidinedithiocarbamate,PDTC)作用于EC1细胞24 h后,West... 目的:研究食管癌细胞EC1中转录因子8(transcription factor 8,TCF8)的表达对EC1细胞迁移侵袭的影响。方法:通过共聚焦显微镜观察EC1细胞中TCF8的表达;吡咯烷二硫代氨基甲酸盐(pyrrolidinedithiocarbamate,PDTC)作用于EC1细胞24 h后,Western blot法检测NF-κBp65、TCF8和E-cadherin蛋白表达变化,划痕损伤和transwell实验检测对细胞转移和侵袭的影响。结果:TCF8表达于EC1细胞核,PDTC可以导致EC1细胞中NF-κBp65、TCF8表达降低,而E-cadherin表达增高;PDTC组细胞迁移距离和穿过的细胞数明显低于对照组。结论:食管癌细胞EC1中表达TCF8,下调TCF8可上调E-cadherin,抑制EC1细胞的迁移侵袭,为阐明食管癌侵袭转移的分子机制提供理论依据,为临床治疗提供分子靶点。 展开更多

关键词 食管肿瘤 转录因子8 EC1细胞 细胞迁移 细胞侵袭

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T淋巴瘤TCR β链独特型DNA疫苗诱发小鼠体液免疫反应

10

作者 张明智 李继昌 +1 位作者 陈长英 董子明 《郑州大学学报（医学版）》 CAS 北大核心 2002年第3期284-287,共4页

目的:研究T淋巴瘤TCRβ链独特型DNA疫苗诱发小鼠体液免疫反应。方法:大剂量提取质粒,将BALB/c小鼠随机分为 pcDNA3．1组、pcDNA3．1/TCR Vβ8组、pcDNA3．1/TCR Vβ8＋IL－2组、pcDNA3．1/TCRVβ8＋CPG+脂质体组和全硫代CPG组共5组(每组... 目的:研究T淋巴瘤TCRβ链独特型DNA疫苗诱发小鼠体液免疫反应。方法:大剂量提取质粒,将BALB/c小鼠随机分为 pcDNA3．1组、pcDNA3．1/TCR Vβ8组、pcDNA3．1/TCR Vβ8＋IL－2组、pcDNA3．1/TCRVβ8＋CPG+脂质体组和全硫代CPG组共5组(每组6只),双侧股四头肌内注射疫苗免疫,于第0、2、4周各免疫1次,共3次。每次免疫前及免疫开始后至第8周,取鼠血,应用间接免疫荧光法检测小鼠抗体生成情况。结果:pcDNA3．1/TCR Vβ8组、pcDNA3．l/TCR Vβ8+CpG+脂质体组、pcDNA3.1/TCR Vβ8+IL－2组小鼠血清中均产生了特异性抗独特型抗体,抗体滴度在第4周开始增高,第6周时达到高峰。在同一取血时间,pcDNA3．1/TCRVβ8+CPG＋脂质体组和 pcDNA3．1/TCR Vβ8+IL－2组小鼠抗体滴度均高于 pcDNA3．l/TCR Vβ8组(P＜0.001)。结论:DNA重组质粒pcDNA3．1/TCR Vβ8可诱导小鼠产生特异性抗淋巴瘤细胞的独特型抗体;IL－2、CPG和脂质体增强了 TCR Vβ8基因疫苗诱导的体液免疫反应。 展开更多

关键词 T淋巴瘤 TCR 独特型 重组质粒 DNA疫苗 免疫反应 动物实验

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互隔交链孢霉素对NIH/3T3细胞的基因损伤及DNA聚合酶β表达的影响 被引量：3

11

作者 马艳英 张晓艳 +1 位作者 王瑾瑾 赵继敏 《实用医学杂志》 CAS 北大核心 2015年第10期1574-1577,共4页

目的:研究互隔交链孢霉素(altenuene,ALT)对NIH/3T3细胞的基因损伤作用及对DNA聚合酶β(DNA polymeraseβ,DNApolβ)表达的影响,探讨互隔交链孢霉(Alternaria alternate)致癌机制。方法 :用单细胞凝胶电泳检测不同浓度的ALT对NIH/3T3细... 目的:研究互隔交链孢霉素(altenuene,ALT)对NIH/3T3细胞的基因损伤作用及对DNA聚合酶β(DNA polymeraseβ,DNApolβ)表达的影响,探讨互隔交链孢霉(Alternaria alternate)致癌机制。方法 :用单细胞凝胶电泳检测不同浓度的ALT对NIH/3T3细胞的基因损伤作用;以半定量RT-PCR及Western-blot方法分别检测DNApolβ在基因及蛋白水平的表达。结果:10.0、20.0、50.0μmol/L的ALT作用于NIH/3T3细胞后,细胞尾长及尾部DNA含量均增加,一定浓度的ALT作用于细胞后DNApolβ在基因及蛋白水平表达均上调,与溶剂对照组相比,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:ALT可引起NIH/3T3细胞基因损伤,且有剂量依赖性,并可导致DNApolβ的表达上调。 展开更多

关键词 互隔交链孢霉素 DNApolβ 单细胞凝胶电泳

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13种巴基斯坦草药对PC12细胞保护作用的研究

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作者 梁岚 孙丽华 +7 位作者 徐淑萍 杨艳艳 赵明耀 Ahsana Dar Iqbal Choudhary Dr.Bina Dr.Shaheen 刘新民 《世界科学技术-中医药现代化》 2011年第4期634-640,共7页

目的:选择13种巴基斯坦传统草药,观察其对PC12细胞增殖的影响,并探讨其对H2O2、谷氨酸诱导PC12细胞损伤的保护作用,为寻找神经细胞保护作用新药提供实验依据。方法:体外培养PC12细胞,应用不同浓度的H2O2、GLU,分别建立神经细胞损伤模型... 目的:选择13种巴基斯坦传统草药,观察其对PC12细胞增殖的影响,并探讨其对H2O2、谷氨酸诱导PC12细胞损伤的保护作用,为寻找神经细胞保护作用新药提供实验依据。方法:体外培养PC12细胞,应用不同浓度的H2O2、GLU,分别建立神经细胞损伤模型,采用MTT法检测细胞存活率。结果:虎爪豆、诃子等能明显促进PC12细胞增殖作用(P<0.05);在H2O2 150μmol.L-1损伤模型中,药物组和模型组相比,罗勒、仙人掌、芦笋、灯油藤、诃子等能显著减轻H2O2的细胞损伤作用(P<0.05);在GLU 30mmol.L-1诱导PC12细胞损伤,与模型组比较,凤仙花、仙人掌、虎爪豆、诃子等均显示出损伤保护作用(P<0.05)。其中,诃子不仅能促进PC12细胞增殖,且在两种PC12细胞损伤模型中均具有较强的损伤保护作用。结论:具有促进PC12细胞增殖的药物为诃子、罗勒、虎爪豆;具有对抗H2O2损伤作用的药物有:诃子、凤仙花、仙人掌、芦笋、灯油藤、罗勒;具有减弱GLU诱导PC12细胞损伤的药物为:虎爪豆、诃子、凤仙花、仙人掌、芦笋、甘草;诃子在3种模型中均表现出较强的细胞损伤保护作用。本研究结果为神经退行性疾病药物的开发和选择提供了初步的实验依据。 展开更多

关键词 PC12细胞 H2O2 谷氨酸 巴基斯坦草药

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