PD-1调控2型固有淋巴细胞在不同疾病中的研究进展

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作者 刘春瑶 张登容 +3 位作者 卜婷婷 罗镇颉 龙仙萍 汪松 《中国免疫学杂志》 北大核心 2025年第2期479-483,共5页

免疫失调在肿瘤、感染及过敏性疾病的发展中发挥重要作用。程序性死亡受体-1(PD-1)作为近年来备受关注的共抑制分子,可通过抑制2型固有淋巴细胞(ILC2s)的增殖及活化在各种免疫性疾病中参与免疫调节作用。ILC2s是新近发现的免疫细胞家族... 免疫失调在肿瘤、感染及过敏性疾病的发展中发挥重要作用。程序性死亡受体-1(PD-1)作为近年来备受关注的共抑制分子,可通过抑制2型固有淋巴细胞(ILC2s)的增殖及活化在各种免疫性疾病中参与免疫调节作用。ILC2s是新近发现的免疫细胞家族亚群,通过分泌2型细胞因子参与肿瘤免疫、抗寄生虫感染及组织损伤修复等。PD-1是其主要的免疫抑制分子,在不同免疫性疾病中可调控ILC2s发挥不同免疫调节作用。现就PD-1调控ILC2s在不同疾病中的作用及机制进行综述。 展开更多

关键词 PD-1 ILC2s 细胞因子 免疫抑制

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骨髓间充质干细胞源外泌体调控心肌微血管内皮细胞增殖的机制研究 被引量：9

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作者 李朝富 王艳 +4 位作者 赵然尊 龙仙萍 张巍 陈攀科 石蓓 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第23期2313-2321,共9页

目的探讨缺氧预处理骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)来源的外泌体(exosomes)调控心肌微血管内皮细胞(cardiac microvascular endothelial cells,CMVECs)增殖的机制。方法采用酶消化法联合差速贴壁法培养大... 目的探讨缺氧预处理骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)来源的外泌体(exosomes)调控心肌微血管内皮细胞(cardiac microvascular endothelial cells,CMVECs)增殖的机制。方法采用酶消化法联合差速贴壁法培养大鼠CMVECs,超高速离心法提取常氧及缺氧预处理的BMSCs exosomes,免疫荧光检测CMVECs内化exosomes情况。实验分为4组(n=3):①正常对照组(Control),②去除exosomes后的BMSCs条件培养基的空白对照组(Free-Exos),③常氧外泌体组(Nor-Exos),④缺氧外泌体组(Hypoxia-Exos,外泌体浓度为400μg/μL,与CMVECs共培养24 h)。采用Edu法及流式细胞术细胞周期法检测细胞增殖能力,qRT-PCR检测exosomes和CMVECs各组中miR-214表达变化。抑制exosomes中miR-214后,qRT-PCR检测exosomes及CMVECs中miR-214的表达变化,并观察细胞增殖情况。结果经透射电镜及免疫印迹法验证提取的囊泡状物质为外泌体,并通过免疫荧光分析发现DiI标记的exosomes可被CMVECs内化;Edu及细胞周期结果显示,Hypoxia-Exos组较Nor-Exos组具有更强的促CMVECs增殖能力(P<0.05)。qRT-PCR结果显示,与Nor-Exos组比较,Hypoxic-Exos组中miR-214表达显著升高(P<0.05)。下调Hypoxia-Exos中的miR-214表达后,Edu及细胞周期结果显示Hypoxia-Exos组的促进细胞增殖能力被部分阻断(P<0.05)。结论缺氧预处理骨髓间充质干细胞源exosomes可能通过传递miR-214促进CMVECs增殖效应。 展开更多

关键词 心肌微血管内皮细胞 缺氧预处理 外泌体 骨髓间充质干细胞 免疫荧光分析 细胞周期 免疫印迹法 条件培养基

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银丹心脑通软胶囊对非酒精性脂肪肝的疗效及其机制探讨 被引量：6

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作者 胡姗 谷宁 +3 位作者 景松波 马帅 陈文明 石蓓 《中华中医药学刊》 CAS 北大核心 2019年第9期2229-2232,共4页

目的:探讨银丹心脑通软胶囊治疗非酒精性脂肪肝的疗效及其可能机制。方法:非酒精性脂肪肝患者80例,随机分为观察组与对照组,每组40例。所有患者入院后接受基础治疗与药物干预措施。观察组在此基础上口服银丹心脑通软胶囊治疗,对照组患... 目的:探讨银丹心脑通软胶囊治疗非酒精性脂肪肝的疗效及其可能机制。方法:非酒精性脂肪肝患者80例,随机分为观察组与对照组,每组40例。所有患者入院后接受基础治疗与药物干预措施。观察组在此基础上口服银丹心脑通软胶囊治疗,对照组患者口服阿托伐他汀片治疗,治疗周期3个月。比较两组患者治疗后的疗效;血脂、炎症因子、肝功能及过氧化物酶体增殖物激活受体(PPAR)-mRNA表达变化情况。结果:观察组治疗总有效率95.00%,高于对照组的70.00%,差异有统计学意义(P<0.05)。治疗后,观察组患者TC、TG、HDL-C、LDL-C、hs-CRP、IL-6、ALT、AST、CGT的改善值高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。治疗后,观察组患者血清PPAR-mRNA表达量降低,与对照组比较,观察组治疗后血清PPAR-αmRNA表达变化值高于对照组,差异有统计学意义(P>0.05)。结论:银丹心脑通软胶囊治疗非酒精性脂肪肝,其对症状的改善效果较好;患者的血脂、肝功能及炎症因子降低;脂肪肝程度及胰岛素抵抗程度得以改善;下调患者血清PPAR-αmRNA的表达可能是其改善患者胰岛素抵抗,进而治疗非酒精性脂肪肝的作用机制之一。 展开更多

关键词 非酒精性脂肪肝 银丹心脑通软胶囊 肝功能 炎症因子 疗效

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空腹葡萄糖调节受损与10年动脉粥样硬化性心血管疾病风险的相关性研究 被引量：9

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作者 荣季冬 姜顺涛 任微微 《重庆医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第2期180-184,共5页

目的:基于10年动脉粥样硬化性心血管疾病(atherosclerotic cardiovascular disease,ASCVD)风险评估模型,探究空腹葡萄糖调节受损(impaired fasting glucose,IFG)及空腹血糖(fasting blood glucose,FBG)水平与心血管疾病风险的相关性。方... 目的:基于10年动脉粥样硬化性心血管疾病(atherosclerotic cardiovascular disease,ASCVD)风险评估模型,探究空腹葡萄糖调节受损(impaired fasting glucose,IFG)及空腹血糖(fasting blood glucose,FBG)水平与心血管疾病风险的相关性。方法:收集2015年7月至2017年4月在遵义医科大学附属医院心内科门诊、病房就诊的患者及来院体检者中具有FBG测定结果的研究对象362名纳入本研究,其中87名处于IFG状态。IFG根据世界卫生组织1999年发布的糖尿病诊疗指南中的定义进行界定(6.1 mmol/L≤FBG<7.0 mmol/L)。估计的10年ASCVD风险评分使用美国心脏病协会(ACC/AHA)实践指南工作组给出的计算方程进行统计。结果:与糖代谢正常的人群相比,IFG人群具有更高的体质指数、收缩压、FBG、餐后2 h血糖水平及甘油三酯水平(P<0.05)。多元logistic回归分析表明,在校正潜在相关的混杂因素后,与糖代谢正常组人群相比,IFG组与10年ASCVD风险升高(≥7.5%)明显相关[OR:95%CI=4.41(1.78~10.93),P=0.001]。限制性样条曲线表明,FBG与10年ASCVD风险评分密切相关。随着FBG水平的升高,10年ASCVD风险逐渐升高,其中当空腹血糖大于5.7 mmol/L时,10年ASCVD风险明显升高(≥7.5%)。结论:基于最新发布的10年ASCVD风险评估方程,空腹葡萄糖调节受损与心血管疾病风险升高密切相关。 展开更多

关键词 空腹葡萄糖调节受损 心血管疾病风险 10年动脉粥样硬化性心血管疾病风险 相关性

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miR-214靶向抑制CaMKⅡ调控H9c2心肌细胞的氧化应激 被引量：4

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作者 王艳 赵然尊 +5 位作者 刘德斌 刘围围 李朝富 王正龙 陈文明 石蓓 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第13期1206-1215,共10页

目的探讨miR-214靶向抑制CaMKⅡ调节缺氧复氧诱导H9c2心肌细胞氧化应激的作用。方法采用大鼠H9c2心肌细胞为研究对象,实验分4组,①正常组:正常培养的心肌细胞;②缺氧复氧组:心肌细胞经缺氧24 h复氧6 h处理;③miR-214模拟物组:心肌细胞转... 目的探讨miR-214靶向抑制CaMKⅡ调节缺氧复氧诱导H9c2心肌细胞氧化应激的作用。方法采用大鼠H9c2心肌细胞为研究对象,实验分4组,①正常组:正常培养的心肌细胞;②缺氧复氧组:心肌细胞经缺氧24 h复氧6 h处理;③miR-214模拟物组:心肌细胞转染miR-214模拟物后予缺氧复氧处理;④miR-214模拟物阴性对照组:心肌细胞转染miR-214模拟物阴性对照后予以缺氧复氧处理。予以CCK-8法检测各组细胞活性,qPCR检测各组细胞miR-214的变化,流式细胞术、TUNEL法及SOD、MDA试剂盒检测各组细胞氧化应激水平及凋亡效应;双荧光素酶报告基因检测miR-214与CaMKⅡ相关性,qPCR和Western blot检测CaMKⅡmRNA和蛋白表达变化。随后用腺病毒转染过表达细胞中CaMKⅡ进行回复实验,并采用上述方法检测细胞氧化应激水平及凋亡状态。结果 CCK-8检测结果显示,与正常组比较,缺氧复氧组心肌细胞活性下降,miR-214模拟物组可明显改善该作用(P<0.05)。qPCR结果显示,与正常组比较,缺氧复氧组miR-214表达下降,而miR-214模拟物组miR-214高表达(P<0.05)。与正常组比较,缺氧复氧组细胞ROS、MDA表达水平及TUNEL阳性细胞数明显增高,SOD表达显著下降(P<0.05);与缺氧复氧组比较,miR-214模拟物组ROS、MDA水平及TUNEL阳性细胞数明显下降,SOD表达明显增高(P<0.05)。经TargetScan检测发现miR-214与CaMKⅡ存在结合位点,双荧光素酶报告基因也验证了在H9c2心肌细胞中miR-214可结合CaMKⅡ。此外,qPCR及Western blot结果显示,与正常组比较,缺氧复氧可致CaMKⅡ在mRNA及蛋白水平表达升高,miR-214可显著抑制缺氧复氧诱导的CaMKⅡ表达。采用腺病毒过表达细胞中CaMKⅡ后,miR-214抗氧化应激及凋亡效应被部分阻断。结论过表达miR-214可通过抑制CaMKⅡ转录后翻译过程,改善H9c2心肌细胞氧化应激水平及凋亡状态。 展开更多

关键词 miR-214 H9C2心肌细胞 活性氧 超氧化物歧化酶 丙二醛 CaMKⅡ

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过表达LncRNA LOC100360491对缺氧复氧诱导H9c2心肌细胞凋亡的影响 被引量：2

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作者 郭鸿浩 邓文文 +3 位作者 龙禹哲 杨双亚 赵永超 石蓓 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第18期1795-1802,共8页

目的观测长链非编码RNA(long noncoding RNA,LncRNA)LOC100360491(后简称LOC100360491)对缺氧复氧诱导的H9c2心肌细胞凋亡的影响,探讨其潜在作用机制。方法(1)通过慢病毒转染大鼠H9c2心肌细胞构建过表达及抑制LOC100360491的心肌细胞系... 目的观测长链非编码RNA(long noncoding RNA,LncRNA)LOC100360491(后简称LOC100360491)对缺氧复氧诱导的H9c2心肌细胞凋亡的影响,探讨其潜在作用机制。方法(1)通过慢病毒转染大鼠H9c2心肌细胞构建过表达及抑制LOC100360491的心肌细胞系,分为4组:空白对照组、过表达LOC100360491组、抑制LOC100360491组及空载体组,qRT-PCR检测各组LOC100360491的表达。(2)将慢病毒转染的大鼠H9c2心肌细胞进行缺氧24 h复氧6 h处理以观察LOC100360491对该细胞凋亡的影响,分为5组:空白对照组、缺氧复氧组、过表达LOC100360491组、抑制LOC100360491组及空载体组。采用流式细胞术检测各组细胞凋亡早期磷脂酰丝氨酸外翻与凋亡中期线粒体活性氧释放情况;Western blot检测各组细胞中凋亡效应蛋白procaspase3、cleaved-caspase3、促凋亡蛋白Bax及抗凋亡蛋白Bcl-2的表达。(3)采用qRT-PCR检测各组PAK3及CNNM2基因的表达以探讨LOC100360491的潜在调控机制。结果(1)qRT-PCR结果显示:与空载体组相比,过表达LOC100360491组LOC100360491表达显著上调(P<0.05),抑制LOC100360491组LOC100360491表达显著下调(P<0.05)。表明细胞系构建成功。(2)流式细胞术及Western blot结果显示,与缺氧复氧组相比,过表达LOC100360491组H9c2细胞早期凋亡、活性氧的释放均显著下降(P<0.05),cleaved-caspase3、Bax表达显著下调,Bcl-2表达显著上调(P<0.05);而抑制LOC100360491组则与之相反,但差异无统计学意义。(3)qRT-PCR结果显示:与空白对照组相比,过表达LOC100360491组PAK3表达显著上升(P<0.05),而CNNM2则无明显变化(P>0.05)。抑制LOC100360491组PAK3及CNNM2表达显著下降(P<0.05)。结论LOC100360491可通过线粒体活性氧途径抑制缺氧复氧诱导的大鼠H9c2心肌细胞凋亡的发生,可能与其在转录水平上调控PAK3的表达有关。 展开更多

关键词 长链非编码RNA LncRNA LOC100360491 心肌细胞 缺氧复氧 细胞凋亡

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SCN5A基因突变与遗传性心脏疾病的相关关系 被引量：5

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作者 蒋礼祥 邓文文 +1 位作者 谷宁 石蓓 《生理科学进展》 2021年第5期352-356,共5页

SCN5A基因编码心脏钠离子通道Nav1.5的α亚基,主要与心脏动作电位的快速去极化有关,是最早研究的离子通道之一。SCN5A的突变和众多遗传性心脏疾病的电生理和结构表型有很大的相关性。其功能丧失突变与Brugada综合征、进行性心脏传导障... SCN5A基因编码心脏钠离子通道Nav1.5的α亚基,主要与心脏动作电位的快速去极化有关,是最早研究的离子通道之一。SCN5A的突变和众多遗传性心脏疾病的电生理和结构表型有很大的相关性。其功能丧失突变与Brugada综合征、进行性心脏传导障碍、病窦综合征、特发性心室颤动和心房静止有关,而功能获得突变与长QT综合征3型相关。其他与SCN5A相关的疾病,如心房颤动,婴儿猝死综合征,扩张型心肌病,以及致心律失常性右室心肌病,重叠综合症,都有更复杂的病理生理机制,涉及多种分子表型的变化。随着膜片钳技术和诱导多能干细胞定向分化为心肌细胞(iPSC-CMS)技术的发展,SCN5A基因突变导致遗传性心脏疾病的致病机制已取得较大进展,根据最近的发现,本文主要对近年来SCN5A基因突变导致各种遗传性心脏疾病中的研究进展做一总结。 展开更多

关键词 SCN5A 基因突变 心脏疾病

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PD-1/PD-L1信号通路在脓毒症不同器官免疫调控中的研究进展 被引量：2

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作者 张登容 刘春瑶 +3 位作者 卜婷婷 罗镇颉 龙仙萍 汪松 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2024年第8期1789-1792,F0003,共5页

脓毒症是宿主对感染的免疫反应失调引起的威胁生命的器官功能障碍,其免疫调控机制复杂,目前尚未阐明。程序性死亡受体-1(PD-1)/程序性死亡受体配体-1(PD-L1)是近年来备受关注的负性共抑制分子。研究表明,PD-1/PD-L1信号通路在脓毒症中... 脓毒症是宿主对感染的免疫反应失调引起的威胁生命的器官功能障碍,其免疫调控机制复杂,目前尚未阐明。程序性死亡受体-1(PD-1)/程序性死亡受体配体-1(PD-L1)是近年来备受关注的负性共抑制分子。研究表明,PD-1/PD-L1信号通路在脓毒症中发挥重要免疫抑制作用,在心、肝、脾、肺、肾中的免疫调控机制存在差异,尚未完全阐明。本文就PD-1/PD-L1在脓毒症不同器官中的免疫调控作用进行综述,以期为脓毒症的研究提供新的方向。 展开更多

关键词 脓毒症 PD-1/PD-L1 免疫调控

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骨髓间充质干细胞源外泌体对大鼠颈动脉球囊损伤后circRNA和microRNA差异表达的影响 被引量：5

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作者 周涵 邓文文 +6 位作者 王冬梅 龙仙萍 蒋礼祥 杨双亚 郭鸿浩 陈文明 石蓓 《医学研究生学报》 CAS 北大核心 2021年第4期341-349,共9页

目的骨髓间充质干细胞(BMSCs)能够在多种心血管疾病病理过程中发挥重要作用,但其对支架内再狭窄的影响有待进一步研究。文中旨在探讨BMSCs源外泌体对大鼠颈动脉球囊损伤后新生内膜增殖的影响及circRNA和microRNA表达变化。方法采用差速... 目的骨髓间充质干细胞(BMSCs)能够在多种心血管疾病病理过程中发挥重要作用,但其对支架内再狭窄的影响有待进一步研究。文中旨在探讨BMSCs源外泌体对大鼠颈动脉球囊损伤后新生内膜增殖的影响及circRNA和microRNA表达变化。方法采用差速超速离心法提取大鼠BMSCs源外泌体,并使用Western blot及透射电镜对其进行鉴定。采用球囊损伤大鼠颈动脉的方法建立血管内膜增生动物模型,将36只成年雄性SD大鼠随机分为:假手术组、损伤组、外泌体组(400μL);假手术组大鼠只分离颈左总动脉血管,其余各组大鼠的左颈总动脉均行球囊损伤,外泌体组行球囊损伤后立即原位注射400μL BMSCs源外泌体并用微型血管夹夹闭血管5 min。采用HE染色检测内膜增生情况,DCFH-DA染色检测血管活性氧(ROS)释放情况。采用circRNA和microRNA芯片筛查差异表达的circRNA和microRNA,并以每组3个样本对其中显著差异的8个circRNA和7个microRNA进行qRT-PCR验证,并筛选出BMSCs源外泌体处理后差异表达的circRNA和microRNA;生物信息学方法预测差异microRNA的靶基因,并进行GO分析和KEGG通路分析,构建circRNA-microRNA-mRNA共表达网络,对其潜在分子机制进行探讨。结果透射电镜及Western blot验证提取的囊泡状物质为外泌体;HE染色结果显示:损伤组较假手术组新生内膜增殖明显,其内膜/中膜面积比(1.902±0.217)较假手术组(1.000±0.000)显著增加(P<0.05);外泌体组较损伤组新生内膜增殖程度有所减低,其内膜/中膜面积比(0.982±0.067)较损伤组明显减低(P<0.05)。DCFH-DA染色结果显示:与假手术组DCFHA红色荧光强度(4.730±0.104)相比,损伤组(16.800±0.380)明显增强(P<0.05);与损伤组相比,外泌体组DCFHA红色荧光强度(12.810±0.094)明显减弱(P<0.05)。circRNA芯片显示差异性表达的circRNA共1683个(Fold change≥2,P<0.05)。与假手术组相比,损伤组中上调的有631个,下调的有1052个。microRNA芯片显示有差异microRNA共44个(Fold change≥2,P<0.05),且均在损伤组上调。GO分析和KEGG分析表明,microRNA的预测靶基因参与了细胞生物学进程正向调控、细胞间紧密连接、激酶活性等方面有关,并在MAPK信号通路、Ras信号通路、Hippo信号通路等等中富集。结合芯片和qRT-PCR结果,筛选出BMSCs源外泌体处理后损伤颈动脉组织中差异表达明显的有circRNA_004976、circRNA_008565、circRNA_017449以及miR-20a-5p、miR-146a-5p、miR-21-5p(P<0.05)。结论BMSCs源外泌体可以抑制大鼠颈动脉球囊损伤后内膜增生,其潜在机制可能与circRNA_004976、circRNA_008565以及miR-20a-5p、miR-21-5p等分子调控细胞增殖、迁移有关。 展开更多

关键词 外泌体 骨髓间充质干细胞 circRNA MICRORNA 颈动脉球囊损伤模型

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骨髓源性生长因子对高糖诱导H9c2细胞焦亡的改善作用 被引量：3

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作者 张玉 王艳 +5 位作者 赵然尊 仇治梅 龙仙萍 李朝富 陈文明 石蓓 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第10期923-929,共7页

目的探讨骨髓源性生长因子(myeloid-derived growth factor,Mydgf)是否通过调控NLRP3改善高糖诱导的心肌细胞焦亡。方法培养大鼠心肌细胞株H9c2,实验分为4组:(1)正常组(normal,Nor)为正常培养的H9c2细胞;(2)高糖组(high glucose,HG)予以... 目的探讨骨髓源性生长因子(myeloid-derived growth factor,Mydgf)是否通过调控NLRP3改善高糖诱导的心肌细胞焦亡。方法培养大鼠心肌细胞株H9c2,实验分为4组:(1)正常组(normal,Nor)为正常培养的H9c2细胞;(2)高糖组(high glucose,HG)予以50 mmol/L葡萄糖干预H9c2细胞24 h;(3)Mydgf组采用25 ng/mL重组Mydgf蛋白处理细胞12 h,随后以50 mmol/L葡萄糖干预H9c2细胞24 h;(4)Necrosulfonamide组(NSA)采用32μmol/L NSA处理细胞0.5 h,然后予50 mmol/L葡萄糖干预H9c2细胞24 h。Western blot法检测H9c2细胞中天冬氨酸蛋白水解酶剪切体-1(cleaved Caspase-1)、凋亡相关斑点样蛋白(ACS)、炎症复合体(NLRP3)及成孔蛋白gasdermin D(GSDMD)的表达水平。ELISA法检测细胞培养液中IL-1β和IL-18的分泌量。CCK-8法检测Mydgf及NLRP3对H9c2细胞活力的影响。将携带NLRP3的增强型绿色荧光蛋白(enhanced green fluorescent protein,EGFP)慢病毒载体(NLRP3-EGFP)及空病毒载体(EGFP)分别转染至H9c2细胞,做回复实验,检测焦亡相关指标变化。结果Western blot结果显示,HG组焦亡相关蛋白cleaved Caspase-1、ACS、NLRP3、GSDMD表达量较正常组明显增高(P<0.05),Mydgf处理后,焦亡相关蛋白的表达受到明显抑制(P<0.05),但抑制效率低于NSA组(P<0.05)。ELISA检测结果表明炎症相关指标IL-1β和IL-18在HG组中表达增高(P<0.05),而在Mydgf组中表达下降(P<0.05),NSA组明显下降(P<0.05)。CCK-8法检测结果表明<25 ng/mL的Mydgf对H9c2细胞活力无明显影响,>25 ng/mL的Mydgf明显降低H9c2细胞活力(P<0.05)。与对照组相比,过表达NLRP3使HG条件下的细胞活力明显下降。EGFP慢病毒转染NLRP3至H9c2细胞中,RT-qPCR及Western blot结果发现EGFP组中NLRP3的mRNA及蛋白表达与正常组差异无统计学意义(P>0.05),而NLRP3-EGFP组中NLRP3的mRNA及蛋白表达均显著增高(P<0.05)。回复实验的Western blot结果显示,在高糖环境中,与Mydgf组相比,Mydgf+NLRP3-EGFP组中焦亡相关蛋白NLRP3、ASC、cleaved Caspase-1表达显著增加(P<0.05);ELISA检测结果也表明IL-1β和IL-18表达较Mydgf组明显增高(P<0.05)。结论Mydgf可能通过抑制NLRP3来改善高糖诱导的心肌细胞焦亡。 展开更多

关键词 骨髓源性生长因子 H9C2细胞 细胞焦亡 NLRP3 糖尿病性心肌病

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骨髓间充质干细胞源外泌体对大鼠颈动脉球囊损伤后lncRNAs表达的影响 被引量：3

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作者 龙禹哲 郭鸿浩 +3 位作者 杨双亚 陈文明 邓文文 石蓓 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第23期2320-2329,共10页

目的探讨骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)源外泌体(exosomes)对大鼠颈动脉球囊损伤后内膜增生的调控作用及其长链非编码RNA(long non-coding RNAs,lncRNAs)表达的影响。方法采用差速超速离心法提取大鼠BMSC... 目的探讨骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)源外泌体(exosomes)对大鼠颈动脉球囊损伤后内膜增生的调控作用及其长链非编码RNA(long non-coding RNAs,lncRNAs)表达的影响。方法采用差速超速离心法提取大鼠BMSCs源外泌体,并通过Western blot和透射电镜对其进行鉴定。SD大鼠分为3组:(1)假手术组(只分离左颈总动脉血管);(2)损伤组(左颈总动脉采用球囊损伤);(3)外泌体组(建立大鼠颈动脉球囊损伤模型后原位注射0.25μg/μL外泌体400μL),14 d后采用HE染色观测颈动脉内膜/中膜面积比(intima/media,I/M)、免疫组化检测PCNA表达、Western blot检测血管内膜增殖及表型转化相关指标的变化。采用lncRNA-mRNA共表达谱芯片表达变化及其生物信息学分析筛查假手术组和损伤组大鼠颈动脉组织中差异表达的lncRNAs和mRNAs,对其潜在分子机制进行探讨。采用qRT-PCR检测各组颈动脉组织中候选lncRNAs的表达。结果电镜结果显示BMSCs源外泌体呈现"茶杯垫样"改变,Western blot结果显示所提取的外泌体中CD63、Alix、HSP70蛋白表达阳性。与损伤组相比,经BMSCs源外泌体处理后大鼠颈动脉I/M显著减少(P<0.05),增殖相关蛋白PCNA、Cyclin D1表达下调(P<0.05)。lncRNA-mRNA共表达谱芯片检测结果,与假手术组相比,损伤组有1083个lncRNAs表达上调,629个lncRNAs表达下调,2004个mRNAs表达上调,2487个mRNAs表达下调(Fold Change>2.0,P<0.05)。GO和KEGG通路分析结果显示,多条lncRNAs与mRNAs相互关联,通过调控相应的靶mRNAs,参与血管平滑肌收缩、肌动蛋白细胞骨架调节和细胞周期等多种生物学过程,与球囊损伤后血管再狭窄的机制有关。结合生物信息学分析,采用qRT-PCR检测3组大鼠颈动脉组织中上述差异性表达最为显著的7个lncRNAs,结果表明,与损伤组相比,外泌体组XR593268上调(P<0.05),XR602080、XR602012、XR591017均下调(P<0.05)。结论BMSCs源外泌体抑制大鼠颈动脉球囊损伤后内膜增生,其潜在机制可能与XR602080、XR591017通过Gsk3b、Cdkn2b、Ccna2等分子调控平滑肌细胞周期变化有关。 展开更多

关键词 骨髓间充质干细胞 外泌体 颈动脉损伤 长链非编码RNA

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