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miR-7低表达导致非小细胞肺癌细胞吉非替尼耐药的作用机制 被引量:6
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作者 王妹 姜钧耀 +1 位作者 杜雨軒 葛晓军 《医学研究生学报》 CAS 北大核心 2020年第5期460-465,共6页
目的非小细胞肺癌(NSCLC)患者吉非替尼耐药的机制仍然是目前研究的热点。文中旨在探讨吉非替尼获得性耐药肺癌细胞与非耐药细胞相比,MicroRNA(miRNA)的表达差异及调控MicroRNA表达后细胞的生长特性。方法以NSCLC细胞A549、H1299为研究对... 目的非小细胞肺癌(NSCLC)患者吉非替尼耐药的机制仍然是目前研究的热点。文中旨在探讨吉非替尼获得性耐药肺癌细胞与非耐药细胞相比,MicroRNA(miRNA)的表达差异及调控MicroRNA表达后细胞的生长特性。方法以NSCLC细胞A549、H1299为研究对象,构建吉非替尼耐药细胞,应用CCK-8法检测吉非替尼对细胞活性的影响,实时荧光定量PCR检测耐药、非耐药细胞中MicroRNA的表达量,微阵列检测细胞内MicroRNA表达谱,转染质粒上调mir-7的表达,Western blot检测细胞内表皮生长因子受体(EGFR)蛋白表达。结果吉非替尼耐药A549、H1299细胞的IC 50值是非耐药细胞的3倍。与A549、H1299非耐药细胞比较,其耐药细胞生长较为缓慢。MiRNA阵列分析中检测到43种miRNA的表达谱发生了显著变化,其中有25种上调的miRNA和18种下调的miRNA,miR-7在耐药细胞中显著下调。qPCR定量检测结果表明mir-21、mir-124c、mir-181明显上调,mir-7、mir-146a、mir-145-p明显下调,其中mir-7变化最显著(P<0.05)。与未转染细胞mir-7表达量(0.84±0.10)比较,转染过表达mir-7的质粒后细胞(6.72±0.84)升高(P<0.05)。Western blot检测结果显示,miR-7表达升高后,细胞内EGFR表达明显降低。H1299耐药细胞IC 50由7.23μg/mL降低至2.46μg/mL,A549耐药细胞IC 50由6.85μg/mL降低至2.23μg/mL(P<0.05)。结论miR-7的表达能负向调控EGFR的表达,miR-7的下调是导致NSCLC细胞吉非替尼耐药的机制之一。 展开更多
关键词 非小细胞肺癌 吉非替尼 MICRORNA表达谱 miR-7 表皮生长因子受体 耐药
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慢性移植物抗宿主病患者免疫细胞亚群分选的表面标志组合策略 被引量:1
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作者 杜雨軒 王平 +9 位作者 葛晓军 王筱淇 洪涛 王蔚浩 何云地 黄瑞昊 邓小娟 刘帅妹 杨世杰 张曦 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第21期2331-2336,共6页
目的观测慢性移植物抗宿主病(chronic graft-versus-host disease,cGVHD)患者免疫细胞亚群分布变化规律,探讨免疫细胞表面标志物分选出的特定细胞亚群在cGVHD发病过程中对疾病发展的预测作用。方法收集2020年10月至2021年7月在陆军军医... 目的观测慢性移植物抗宿主病(chronic graft-versus-host disease,cGVHD)患者免疫细胞亚群分布变化规律,探讨免疫细胞表面标志物分选出的特定细胞亚群在cGVHD发病过程中对疾病发展的预测作用。方法收集2020年10月至2021年7月在陆军军医大学第二附属医院血液病医学中心接受造血干细胞移植后的患者58例,根据移植后是否发生cGVHD分为cGVHD组(发生cGVHD,n=43)和对照组(未发生cGVHD,n=15),采用流式细胞术分析两组患者免疫细胞亚群比率及分布情况,募集患者原发诊断包括ALL、AML、CML、MDS、SAA和重型β地中海贫血。其中发生cGVHD的中位时间为178.5(47~1328)d,每例患者于随访过程中发生cGVHD时或病程中随访当日留取外周血标本。结果cGVHD组患者外周血中调节性T细胞(regulatory T cells,Tregs)及过渡型B细胞的分布水平显著降低,CD19^(+)B淋巴细胞的分布水平较对照组显著增加;接受造血干细胞移植后发生cGVHD的患者组外周血中Tregs较接受造血干细胞移植后未发生cGVHD的患者组明显降低,中度cGVHD患者Th17细胞较轻度患者分布水平显著升高,CD19^(+)B淋巴细胞在轻度、中度患者中显著升高;比较不同cGVHD靶器官,仅累及皮肤病变的患者与仅累及肝脏的患者Tregs较对照组中显著降低,而合并皮肤及肝脏损伤患者的外周血中滤泡辅助T细胞的分布显著高于仅累及黏膜或眼睛等器官的患者。结论移植后免疫细胞亚群检测是临床辅助cGVHD诊疗随访的重要参考指标。使用免疫细胞表面标志组合的特异性策略分选出的调节性T细胞、过渡型B细胞对cGVHD患者的发病及严重程度、靶器官损伤都有特异性的指示作用。 展开更多
关键词 异基因造血干细胞移植 慢性移植物抗宿主病 免疫细胞亚群 调节性T细胞 过渡型B细胞 辅助滤泡T细胞
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人脐带间充质干细胞预防小鼠急性移植物抗宿主病作用及其机制研究
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作者 洪涛 王瑞 +10 位作者 王筱淇 王蔚浩 杜雨軒 何云地 马超 安慧慧 王俊洁 张云芳 高强国 杨世杰 张曦 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第21期2276-2285,共10页
目的探讨人脐带间充质干细胞(human umbilical cord mesenchymal stem cells,HUCMSCs)对小鼠急性移植物抗宿主病(acute graft-versus-host disease,aGVHD)的预防效果并初步探索其作用机制。方法通过对接受全身辐照的雄性BALB/c小鼠移植... 目的探讨人脐带间充质干细胞(human umbilical cord mesenchymal stem cells,HUCMSCs)对小鼠急性移植物抗宿主病(acute graft-versus-host disease,aGVHD)的预防效果并初步探索其作用机制。方法通过对接受全身辐照的雄性BALB/c小鼠移植雄性C57BL/6小鼠的骨髓细胞和脾脏细胞,构建小鼠异基因造血干细胞移植(allogeneic hematopoietic stem cell transplantation,allo-HSCT)后aGVHD模型,建模部分实验分组:BM组[尾静脉注射500μL供者C57BL/6小鼠骨髓细胞(5×10^(6)/只)悬液]和aGVHD组[尾静脉注射500μL骨髓细胞(5×10^(6)/只)和脾脏细胞(5×10^(6)/只)混悬液]。观察小鼠生存率、临床评分和体质量变化;流式细胞术检测移植后嵌合度;HE染色观察aGVHD靶器官(肺脏、肝脏、结肠、小肠)的病理学改变。收集P4代HUCMSCs,于移植当天混合供者骨髓细胞和脾脏细胞输注BALB/c小鼠,实验分组:①aGVHD组(处理同建模部分);②aGVHD+MSCs组[经尾静脉注射500μL骨髓细胞(5×10^(6)/只)、脾脏细胞(5×10^(6)/只)和HUCMSCs(5×10^(5)/只)混悬液]。观察HUCMSCs对aGVHD的预防效果,应用ELISA检测各组小鼠血清IFN-γ、TNF-α浓度;流式细胞术检测CD4^(+)T细胞在靶器官中绝对数计数和凋亡水平。结果aGVHD组较BM组生存率降低、临床评分增高、体质量减轻明显(P<0.05),靶器官病理损伤更为严重(P<0.05);移植后小鼠达完全嵌合。HUCMSCs输注显著改善移植后小鼠生存、降低临床评分和靶器官病理损伤(P<0.05),并降低血清炎症因子浓度(P<0.05),增加CD4^(+)T细胞在靶器官中的凋亡,CD4^(+)T细胞绝对数计数显著下降(P<0.05)。结论HUCMSCs联合allo-HSCT能有效预防及减轻小鼠aGVHD,其作用机制主要是HUCMSCs介导淋巴细胞凋亡,减少其在靶器官中的浸润和调控炎症因子分泌。 展开更多
关键词 异基因造血干细胞移植 急性移植物抗宿主病 人脐带间充质干细胞 细胞疗法 炎症因子
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皮肤优势型慢性移植物抗宿主病小鼠模型的构建
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作者 王蔚浩 杨世杰 +10 位作者 杜雨軒 王筱淇 洪涛 何云地 王瑞 马超 安慧慧 王俊洁 张云芳 高强国 张曦 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第21期2286-2293,共8页
目的构建皮肤优势型慢性移植物抗宿主病(chronic graft-versus-host disease,cGVHD)小鼠模型。方法利用致死剂量辐照BALB/c小鼠,并接受来自B10.D2供鼠混合的骨髓细胞和脾脏细胞以构建皮肤优势型cGVHD小鼠模型,通过小鼠临床表现、病理特... 目的构建皮肤优势型慢性移植物抗宿主病(chronic graft-versus-host disease,cGVHD)小鼠模型。方法利用致死剂量辐照BALB/c小鼠,并接受来自B10.D2供鼠混合的骨髓细胞和脾脏细胞以构建皮肤优势型cGVHD小鼠模型,通过小鼠临床表现、病理特征及靶器官细胞亚群评估模型构建情况。结果模型小鼠的临床表现以皮肤脱毛、硬化、皮屑、结痂和由皮肤皱缩硬化引起的弓背和关节僵直为主,临床病理评分随疾病进展升高,但无明显肠道cGVHD表现。病理改变中皮肤出现明显胶原沉积,毛囊减少甚至消失,而其他靶器官病理改变不明显。对以上靶器官行T细胞亚群分析,发现Th1细胞、CD4^(+)IL-13^(+)T细胞和Tc1细胞与疾病进展密切。结论成功构建可用于实验研究的皮肤优势型小鼠cGVHD模型,病理变化主要以皮肤纤维化表现为主。 展开更多
关键词 慢性移植物抗宿主病 皮肤 肝脏 肺脏 T细胞
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NSCLC患者恶性胸水中H19下调miR-203对肺癌细胞侵袭能力的影响
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作者 刘帅妹 王妹 +3 位作者 杜雨轩 程文亮 李洁 葛晓军 《医学研究生学报》 CAS 北大核心 2022年第10期1069-1075,共7页
目的H19在非小细胞肺癌(NSCLC)的异常高表达是目前研究的热点。文中旨在探究NSCLC患者恶性胸水中H19的表达水平及其与miR-203的调控关系。方法收集2019年6至2021年5月遵义医科大学第二附属医院检验科132例NSCLC胸水标本。根据H19的相对... 目的H19在非小细胞肺癌(NSCLC)的异常高表达是目前研究的热点。文中旨在探究NSCLC患者恶性胸水中H19的表达水平及其与miR-203的调控关系。方法收集2019年6至2021年5月遵义医科大学第二附属医院检验科132例NSCLC胸水标本。根据H19的相对表达水平,将患者分为H19高表达组(肿瘤/对照≥1.5)和H19低表达组(肿瘤/对照<1.5),健康供者为对照组。根据miR-203的相对表达水平,将患者分为miR-203高表达组(肿瘤/对照≥2.0)和miR-203低表达组(肿瘤/对照≤2.0)。在萤光素酶检测分析中,健康供者为空白对照组,未加入miR-203激活剂和miR-203抑制剂为阴性对照组,加入miR-203激活剂为miR-203激活剂组,加入miR-203抑制剂为miR-203抑制剂组。在EMT标记蛋白的变化分析,未加入miR-203抑制剂和H19抑制剂为阴性组,加入miR-203抑制剂和H19抑制剂为miR-203抑制剂+H19抑制剂组,加入miR-203抑制剂为miR-203抑制剂组。采用Western blot检测细胞内蛋白表达;CCK-8检测细胞增殖能力;Transwell检测细胞侵袭能力;流式细胞术检测细胞周期及凋亡等。结果H19高表达组的生存时间[(59.22±20.97)个月]较H19低表达组[(85.70±13.12)个月]明显缩短(P<0.05),即H19高表达与NSCLC的预后不良相关。而miR-203高表达组生存时间[(64.15±25.89)个月]较miR-203低表达组生存时间[(55.44±26.65)个月]明显延长(P<0.05)。相关性分析发现,H19与miR-203呈负相关(r=-0.66,P<0.01)。与阴性对照组比较,miR-203抑制剂组能抑制上皮标志物CDH1的表达,并促进间质标志物SNAI1和Vimentin的表达(P<0.05)。与阴性对照组比较,miR-203抑制剂组和H19抑制剂组能促进上皮标志物CDH1的表达,且抑制间质标志物SNAI1和Vimentin的表达(P<0.05)。结论H19的表达能负向调控miR-203的表达,抑制H19的表达降低NSCLC细胞的增殖、侵袭,H19是NSCLC的调控机制之一。 展开更多
关键词 非小细胞肺癌 H19 miR-203 恶性胸水
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西罗莫司和伊马替尼治疗激素难治性慢性移植物抗宿主病的临床观察:一项单中心回顾性分析
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作者 何云地 黄瑞昊 +6 位作者 洪涛 王蔚浩 杜雨軒 王筱淇 王峥 张云芳 张曦 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第21期2313-2320,共8页
目的对比西罗莫司和伊马替尼作为二线药物,治疗异基因干细胞移植后激素难治性慢性移植物抗宿主病(steroid-refractory chronic graft-versus-host disease,SR-cGVHD)的疗效和预后。方法回顾性分析2017年9月至2020年12月于我中心确诊为... 目的对比西罗莫司和伊马替尼作为二线药物,治疗异基因干细胞移植后激素难治性慢性移植物抗宿主病(steroid-refractory chronic graft-versus-host disease,SR-cGVHD)的疗效和预后。方法回顾性分析2017年9月至2020年12月于我中心确诊为异基因造血干细胞移植后SR-cGVHD的33例患者临床资料,接受伊马替尼治疗16例,接受西罗莫司治疗17例。比较两组患者二线治疗后6个月和1年的缓解率、2年总生存(overall survival,OS)、2年无病生存(disease free survival,DFS)、1年无失败生存(failure free survival,FFS)和药物相关毒性。结果伊马替尼和西罗莫司治疗6个月整体缓解率分别是62.5%和41.2%(P=0.303),1年整体缓解率分别是73.3%和43.8%(P=0.149),6个月完全缓解率分别是12.5%和23.5%(P=0.656),1年完全缓解率分别是20.0%和31.3%(P=0.685),差异无统计学意义;伊马替尼2年OS和2年DFS均优于西罗莫司(P=0.041,P=0.043);伊马替尼和西罗莫司的药物相关毒性率差异无统计学意义。结论伊马替尼和西罗莫司治疗SR-cGVHD缓解率疗效相当,伊马替尼在短期生存和无病生存方面优于西罗莫司。 展开更多
关键词 慢性移植物抗宿主病 异基因造血干细胞移植 伊马替尼 西罗莫司
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