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结核分枝杆菌抗原Rv2654重组蛋白的表达和纯化及其诱导的免疫应答特征 被引量:4
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作者 陈富超 朱权 +3 位作者 余艳艳 万康林 罗奇志 余平 《中南大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2021年第9期925-931,共7页
目的:随着卡介苗的保护效应日趋减弱,以及结核分枝杆菌耐药株的广泛存在,全球尚缺乏控制结核病的有效疫苗,全球结核病发病率和病死率仍然较高。本研究旨在分析结核分枝杆菌抗原Rv2654重组蛋白在诱导小鼠细胞免疫和体液免疫应答中的作用... 目的:随着卡介苗的保护效应日趋减弱,以及结核分枝杆菌耐药株的广泛存在,全球尚缺乏控制结核病的有效疫苗,全球结核病发病率和病死率仍然较高。本研究旨在分析结核分枝杆菌抗原Rv2654重组蛋白在诱导小鼠细胞免疫和体液免疫应答中的作用,评价其作为抗结核病候选疫苗的潜力。方法:在细菌的对数生长期加入诱导剂异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(isopropyl-beta-D-thiogalactoside,IPTG)诱导细菌表达Rv2654重组蛋白,用亲和层析纯化,蛋白质印迹法鉴定Rv2654重组蛋白。采用ELISA方法检测不同人群血清与Rv2654重组蛋白的免疫反应性。以Rv2654重组蛋白免疫昆明小鼠,采用细胞因子磁珠阵列法检测小鼠外周血Th1/Th2类细胞因子水平,并以流式细胞术分析小鼠脾T、B淋巴细胞亚群分布。结果:成功表达Rv2654重组蛋白,以Rv2654重组蛋白作为抗原的ELISA结果显示其与卡介苗接种者或活动期结核患者血清均有反应性。Rv2654重组蛋白免疫小鼠可促进小鼠外周血IFN-γ、TNF-α、IL-2、IL-4、IL-6和IL-10等多种细胞因子表达(均P<0.05),流式细胞术结果显示Rv2654重组蛋白可显著刺激CD4+T细胞和CD8+T细胞分化为效应T细胞,这种作用在联合卡介苗应用时更为明显,Rv2654重组蛋白也能刺激小鼠B细胞活化增殖并向记忆细胞分化。结论:Rv2654重组蛋白可诱导小鼠的细胞免疫应答,而且与卡介苗接种者和活动性肺结核患者血清有较好的结合能力,有望作为结核病免疫学预防和诊断类疫苗的候选抗原。 展开更多
关键词 结核分枝杆菌 Rv2654重组蛋白 细胞免疫 体液免疫 结核疫苗
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单细胞测序分析BCR CDR3受体库的研究概况和进展
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作者 朱兰伟 李俊 +1 位作者 马龙 姚新生 《中国免疫学杂志》 北大核心 2025年第3期743-750,共8页
B细胞受体(BCR)是B细胞特异性识别和结合抗原的主要分子基础,其互补决定区(CDR3)呈现高度多样性和特异性。利用单细胞免疫组库测序技术可以精确地分析每个B细胞BCR CDR3序列的组成和特征,能更好地理解B细胞分化、发育、应答的过程和机... B细胞受体(BCR)是B细胞特异性识别和结合抗原的主要分子基础,其互补决定区(CDR3)呈现高度多样性和特异性。利用单细胞免疫组库测序技术可以精确地分析每个B细胞BCR CDR3序列的组成和特征,能更好地理解B细胞分化、发育、应答的过程和机制。单细胞免疫组库测序技术为B细胞免疫相关疾病的发病机制、监测、诊断与治疗提供新的思路和理论基础。本文主要对B细胞BCR CDR3受体库的常用检测方法以及检测平台进行对比分析,并重点概述单细胞测序技术在B细胞BCR CDR3受体库中的应用、研究现状和进展。 展开更多
关键词 B细胞受体 CDR3受体库 单细胞测序
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寻常性银屑病患者皮肤菌群差异研究
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作者 秦欢 熊琦 +4 位作者 马龙 徐运娥 黄洋 晏文 王玉 《临床皮肤科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2024年第7期393-399,共7页
目的:阐明贵州地区银屑病患者皮损样本、正常皮肤样本及健康人群皮肤样本之间皮肤定植微生物的差异。方法:纳入15例寻常性银屑病患者及6例健康志愿者,采集患者皮损样本、正常皮肤样本及志愿者健康皮肤样本微生物,提取DNA并扩增细菌、真... 目的:阐明贵州地区银屑病患者皮损样本、正常皮肤样本及健康人群皮肤样本之间皮肤定植微生物的差异。方法:纳入15例寻常性银屑病患者及6例健康志愿者,采集患者皮损样本、正常皮肤样本及志愿者健康皮肤样本微生物,提取DNA并扩增细菌、真核微生物、真菌、古细菌扩增子,采用16S rDNA基因测序,分析微生物组成及丰度。结果:银屑病患者皮损部位微生物多样性较银屑病患者正常皮肤微生物高;组成成分分析发现其组成与正常皮肤表面微生物分离,呈现明显的聚类趋势。与银屑病患者正常皮肤微生物组成比较,银屑病患者皮损部位特异性高分布的菌群包括梭状芽胞杆菌纲-梭菌目-瘤胃菌科、梭状芽胞杆菌纲-梭菌目-毛螺旋菌科以及拟杆菌纲-拟杆菌目-拟杆菌科;而微生物低丰度菌群为乳杆菌目-乳酸细菌科以及假单胞菌目-莫拉菌科。结论:相比于银屑病患者正常皮肤定植的微生物,皮损部位微生物呈现特征性改变,提示差异性分布菌群可能是银屑病潜在的生物标志物。 展开更多
关键词 银屑病 皮肤微生物 16S rDNA 生物标志物
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Ⅰ型辅酶脱氢酶1α亚复合物4过表达对人结直肠癌细胞上皮-间质转化的作用 被引量:1
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作者 刘士明 丁涛 +5 位作者 雷良玉 胡琳 冒灵 陈超 郭萌萌 徐林 《医学研究生学报》 CAS 北大核心 2019年第6期596-601,共6页
目的Ⅰ型辅酶脱氢酶1α亚复合物4(NDUFA4)在人结直肠癌发生中的作用和机制尚未阐明。文中旨在探讨NDUFA4过表达对人结直肠癌细胞上皮-间质转化(EMT)的作用。方法将p-NDUFA4重组质粒(p-NDUFA4组)和空载对照质粒(对照组)体外分别瞬时转入... 目的Ⅰ型辅酶脱氢酶1α亚复合物4(NDUFA4)在人结直肠癌发生中的作用和机制尚未阐明。文中旨在探讨NDUFA4过表达对人结直肠癌细胞上皮-间质转化(EMT)的作用。方法将p-NDUFA4重组质粒(p-NDUFA4组)和空载对照质粒(对照组)体外分别瞬时转入人结直肠癌HCT116细胞;利用Real-timePCR和Western blot 检测各组细胞中 NDUFA4 的表达;划痕实验、Transwell 小室迁移实验检测细胞的迁移能力变化;实时荧光定量 PCR 法检测 MMP2、MMP9、CXCR4 等表达;Western blot 检测 Twist、Snail、E-cadherin 等表达;免疫荧光法检测细胞中 E-cadherin 和 Vimentin 蛋白的表达。结果p-NDUFA4组 NDUFA4-mRNA、NDUFA4蛋白相对表达量[(1.94±0.08)%、(1.07±0.12)%]较对照组([ 0.96±0.15)%、(0.6±0.05)%]明显上调(P<0.05)。p-NDUFA4 组细胞的体外迁移能力、细胞迁移率([ 54.36±4.08)%、(1.85±0.10)%]较对照组([ 29.51± 3.17)%、(0.99±0.12)%]明显升高( P<0.01)。p-NDUFA4 组肿瘤细胞转移相关因子 MMP2、MMP9、CXCR4、间质标志物 N-cadherin、Vimentin,及转录相关因子 Snail、Twist 的 mRNA 表达较对照组显著上调,上皮标记分子 E-cadherin mRNA 明显下调(P<0.01)。结论过表达NDUFA4能明显促进人结直肠癌细胞EMT的发生。 展开更多
关键词 Ⅰ型辅酶脱氢酶1α亚复合物4 结直肠肿瘤 侵袭 转移 上皮-间质转化
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