人羊膜上皮细胞治疗大鼠实验性自身免疫性脑脊髓炎的效应及免疫调节作用 被引量：6

1

作者 李丹 方宁 +3 位作者 陈代雄 余丽梅 章涛 赵春华 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2013年第10期1011-1016,1032,共7页

目的:观察人羊膜上皮细胞(hAECs)对大鼠实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)模型的治疗效应和免疫调节作用。方法:分离、培养hAECs,流式细胞术(FCM)检测其免疫表型;用豚鼠脊髓匀浆+完全弗氏佐剂+百日咳毒素复制大鼠EAE模型;EAE大鼠经双侧侧... 目的:观察人羊膜上皮细胞(hAECs)对大鼠实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)模型的治疗效应和免疫调节作用。方法:分离、培养hAECs,流式细胞术(FCM)检测其免疫表型;用豚鼠脊髓匀浆+完全弗氏佐剂+百日咳毒素复制大鼠EAE模型;EAE大鼠经双侧侧脑室移植5×105个hAECs;采用kono评分动态观察行为学变化;采用HE染色、免疫荧光染色观察脑和脊髓病理改变,以及hAECs在脑和脊髓内的分布;采用FCM检测外周血淋巴细胞亚群,采用流式微球芯片捕获技术(CBA)检测血浆细胞因子的含量。结果:hAECs治疗后EAE大鼠行为学评分逐渐减低(P<0.01),神经功能明显改善,体重稳定,脑和脊髓炎性细胞浸润减轻。hAECs移植后3周,宿主脑和脊髓组织中均有较多人细胞核抗原阳性细胞即hAECs存活;与对照组相比,hAECs治疗组FoxP3+Treg、Th2、CTL、NKT、B淋巴细胞百分比明显升高(P<0.01或P<0.05),而Th17细胞显著减少(P<0.01);Th2型细胞因子IL-4和IL-10含量升高(P<0.05或P<0.01),而Th1型细胞因子IL-2和IFN-γ含量降低(P<0.05或P<0.01)。结论:hAECs能改善大鼠EAE的神经功能,减轻神经组织的免疫损伤,其机制可能主要与上调FoxP3+Treg和下调Th17细胞有关。 展开更多

关键词 人羊膜上皮细胞 实验性自身免疫性脑脊髓炎 免疫调节 大鼠

在线阅读 下载PDF 职称材料

医学研究生干细胞课程的创建与教学实践 被引量：1

2

作者 范振海 王达利 +5 位作者 章涛 陈艳 王钰莹 敖俊 余丽梅 赵春华 《医学研究生学报》 CAS 北大核心 2018年第2期190-192,共3页

总结开设研究生新课程《干细胞原理、技术与临床》的教学经验与体会,为课程设置推广提供借鉴,并不断提高教学质量。文章从课程设计、教材内容选择、教学理念、教学模式、师资队伍培养等方面介绍了教学中所采取的措施与取得的成效。在教... 总结开设研究生新课程《干细胞原理、技术与临床》的教学经验与体会,为课程设置推广提供借鉴,并不断提高教学质量。文章从课程设计、教材内容选择、教学理念、教学模式、师资队伍培养等方面介绍了教学中所采取的措施与取得的成效。在教学上强调摒弃陈旧的以知识灌输为主教学理念,发挥学生的主观能动性,并针对性地着重论述教材内容既要注重基础与临床应用,又要结合现有法律法规紧盯科技前沿,教学过程中既要重视教师素质与教学水平提高,强调师生之间的互动,又要重视研究生学习方法的掌握,强化研究生创新思维与能力培养、激发学生学习兴趣,采用多种教学方式如视频教学及问题式教学提高学生自主学习和实践能力。该课程教学取得的良好教学效果,所取得的实践经验值得在今后的研究生教学中加以推广。 展开更多

关键词 干细胞 再生医学 交叉学科 教学

在线阅读 下载PDF 职称材料

人胎盘组织造血干/祖细胞的分离富集 被引量：4

3

作者 章涛 陈代雄 +3 位作者 方宁 刘祖林 祁莹 刘金伟 《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 2006年第5期955-958,共4页

为了探索从胎盘组织中分离富集造血干/祖细胞(HSPC)的标化流程,采用机械法加胶原酶消化法制备人胎盘组织单个细胞悬液,用羟乙基淀粉(6%HES)法从中分离出单个核细胞(MNC),再经免疫磁珠分选法分选出CD34-、CD34+CD38-、CD34+CD38+3个细胞... 为了探索从胎盘组织中分离富集造血干/祖细胞(HSPC)的标化流程,采用机械法加胶原酶消化法制备人胎盘组织单个细胞悬液,用羟乙基淀粉(6%HES)法从中分离出单个核细胞(MNC),再经免疫磁珠分选法分选出CD34-、CD34+CD38-、CD34+CD38+3个细胞亚群,用流式细胞术对各阶段分选细胞进行表型分析并计算分选细胞的富集度和回收率。结果表明:机械法加胶原酶消化法制备的人胎盘组织单个细胞悬液中单个核细胞(MNC)数达(12.30±3.51)×108,与脐血初始样品所含的MNC数(8.86±5.38)×108比较差异无统计学意义,而其CD34+细胞所占百分率[(3.93±2.31)%]则明显高于脐血[(0.44±0.29)%]。胎盘组织单个细胞悬液经6%HES分离后MNC和CD34+细胞的回收率分别为(45.3±11.7)%和(51.1±9.8)%;MNC经免疫磁珠分选后,其CD34+细胞的纯度和回收率分别为(73.4±14.1)%和(52.7±11.7)%。结论:本实验所建立的"机械法加胶原酶消化法-HES分离MNC-MACS分选目标细胞"的分离纯化方法可从胎盘组织获得高丰度、高富集度、高活性的HSPC,为进一步研究胎盘HSPC提供了比较经济、效果较好的分离富集方案。 展开更多

关键词 CD34抗原 造血干细胞 胎盘 免疫磁珠细胞分选 脐血

在线阅读 下载PDF 职称材料

人参皂苷Rg1对成体干细胞特性与功能的影响 被引量：10

4

作者 何方 余丽梅 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第3期319-322,共4页

人参皂苷Rg1(ginsenoside Rg1,Rg1)是从人参中提取的一种重要单体成分,具有多种药理学活性,可通过多种作用机制对造血干细胞、间充质干细胞、神经干细胞和内皮祖细胞等的增殖、分化、衰老、分泌等产生明显调控作用,在组织器官损伤和机... 人参皂苷Rg1(ginsenoside Rg1,Rg1)是从人参中提取的一种重要单体成分,具有多种药理学活性,可通过多种作用机制对造血干细胞、间充质干细胞、神经干细胞和内皮祖细胞等的增殖、分化、衰老、分泌等产生明显调控作用,在组织器官损伤和机体衰老中产生明显治疗效果,该文就Rg1对成体干细胞特性与功能的影响进行了综述。 展开更多

关键词 人参皂苷RG1 干细胞 增殖 分化 衰老 再生

在线阅读 下载PDF 职称材料

脐带血造血干/祖细胞罗丹明123荧光染色及其意义 被引量：2

5

作者 章涛 方宁 +3 位作者 张潜 万卫红 祁莹 陈代雄 《中国医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第3期206-207,210,共3页

目的探讨人脐带血造血干/祖细胞(UCB-HSPC)罗丹明123(Rho123)荧光染色特点及其应用价值。方法采用密度梯度离心法获取脐带血单个核细胞(UCB-MNC),用含终浓度为0.1μg/mlRho123的2%胎牛血清-PBS液、37℃下孵育UCB-MNC细胞(细胞浓度为106/... 目的探讨人脐带血造血干/祖细胞(UCB-HSPC)罗丹明123(Rho123)荧光染色特点及其应用价值。方法采用密度梯度离心法获取脐带血单个核细胞(UCB-MNC),用含终浓度为0.1μg/mlRho123的2%胎牛血清-PBS液、37℃下孵育UCB-MNC细胞(细胞浓度为106/ml)20min,之后用Lin抗体(PE标记的CD19、CD13、CD2、CD8、CD3)及造血干/祖细胞(HSPC)标志抗体CD34-PerCP和CD38-APC标记UCB-MNC细胞,流式细胞仪分析HSPC亚群及其Rho123染色特点。结果流式细胞术检测结果表明,UCB-Lin-MNC中的HSPC比例高于MNC中约6倍;UCB-CD34+CD38+造血祖细胞(HPC)的Rho123染色平均荧光强度值为23.55±2.40,是UCB-CD34+CD38-造血干细胞(HSC)值10.22±1.03的2倍多(P<0.01)。结论UCB-Lin-MNC中富含HSPC;UCB-HSC的Rho123染料聚集能力明显低于UCB-HPC,提示Rho123拒染法可作为进一步纯化人UCB-HSC的新手段。 展开更多

关键词 人脐带血 造血干细胞 造血祖细胞 罗丹明123 荧光激活细胞分选

在线阅读 下载PDF 职称材料

人胎盘CD133^+细胞具有LTC-IC集落启动细胞特性 被引量：2

6

作者 刘虹麟 陈代雄 +5 位作者 方宁 章涛 刘祖林 刘金伟 万卫红 祁莹 《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 2009年第1期125-128,共4页

本研究从功能上评价人胎盘CD133+细胞是否具有长期造血重建功能。采用免疫磁珠激活分选系统(MACS)富集胎盘CD133+细胞作为测试细胞,采用有限稀释法(LDA)设置4种不同浓度的测试细胞,用胎儿原代骨髓基质细胞制备的饲养层细胞共培养于长期... 本研究从功能上评价人胎盘CD133+细胞是否具有长期造血重建功能。采用免疫磁珠激活分选系统(MACS)富集胎盘CD133+细胞作为测试细胞,采用有限稀释法(LDA)设置4种不同浓度的测试细胞,用胎儿原代骨髓基质细胞制备的饲养层细胞共培养于长期培养体系中,以检测测试细胞中长期培养启动细胞(LTC-IC)的发生率及其增殖分化能力。结果表明:人胎盘CD133+细胞群中含有LTC-IC,其发生率为1/645;LTC-IC具有增殖分化为粒-单集落形成单位(CFU-GM)和混合集落形成单位(CFU-Mix)的能力;在所有LTC-IC阳性孔中,产生CFU-GM的孔占总阳性孔的71.4%,产生CFU-GM和CFU-Mix的孔占总阳性孔的28.6%。结论:人胎盘组织CD133+细胞群中存在LTC-IC,并具有造血早期祖细胞集落形成能力。 展开更多

关键词 CD133^+细胞 长期培养启动细胞 造血干/祖细胞 磁珠激活细胞分选 胎盘

在线阅读 下载PDF 职称材料

人羊膜间充质干细胞移植对大鼠脊髓损伤后NGF、BDNF和Nogo-A mRNA表达的影响 被引量：2

7

作者 喻皇飞 马晶晶 +4 位作者 方宁 余丽梅 章涛 刘祖林 陈代雄 《中国脊柱脊髓杂志》 CAS CSCD 北大核心 2013年第10期924-929,共6页

目的:观察人羊膜间充质干细胞(hAMSCs)移植对大鼠脊髓损伤后神经生长因子(NGF)、脑源性神经营养因子(BDNF)及轴突生长抑制因子(Nogo-A)mRNA表达的影响。方法:成年雌性SD大鼠24只,随机分成hAMSCs移植组(12只)、磷酸盐缓冲液(PBS)对照组(1... 目的:观察人羊膜间充质干细胞(hAMSCs)移植对大鼠脊髓损伤后神经生长因子(NGF)、脑源性神经营养因子(BDNF)及轴突生长抑制因子(Nogo-A)mRNA表达的影响。方法:成年雌性SD大鼠24只,随机分成hAMSCs移植组(12只)、磷酸盐缓冲液(PBS)对照组(12只)。体外分离培养、鉴定hAMSCs,并以终浓度为10μg/ml 4,6-二脒基-2-苯基吲哚(DAPI)荧光染料标记hAMSCs。在建立大鼠T11脊髓全横断损伤模型后,立即以微量注射器吸取约3×106个hAMSCs悬液于横断损伤处头尾两端原位移植,对照组注射相同体积的PBS液。分别于术后3d、7d利用荧光显微镜观察hAMSCs存活情况,并采用RT-PCR分析损伤脊髓段NGF mRNA、BDNF mRNA及Nogo-A mRNA的表达。结果:术后3d和7d hAMSCs移植组均可观察到植入的hAMSCs在宿主脊髓组织内存活。术后3d、7d,hAMSCs移植组NGF mRNA的表达均高于对照组(P<0.05,P<0.01),Nogo-A mRNA的表达均低于对照组(P<0.05);术后3d时hAMSCs移植组BDNF mRNA的表达与对照组比较无显著性差异(P>0.05),但术后7d其表达高于对照组(P<0.05)。结论:hAMSCs移植可上调大鼠受损脊髓组织内NGF mRNA和BDNF mRNA的表达、下调Nogo-A mRNA的表达,有利于促进脊髓损伤后的功能修复。 展开更多

关键词 脊髓损伤 移植 人羊膜间充质干细胞 神经营养因子 大鼠

在线阅读 下载PDF 职称材料

钙敏感受体的功能特点及对成体干细胞特性的影响 被引量：3

8

作者 罗欣 余丽梅 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第4期465-468,共4页

钙敏感受体(calcium-sensing receptor,CaSR)是一种分布广泛的G蛋白偶联受体,活化后可调节Ca^(2+)等多条信号通路,不仅在维持机体钙平衡中发挥重要作用,还参与调控细胞的分泌、增殖、凋亡和离子通道开放等。造血干细胞和间充质干细胞表... 钙敏感受体(calcium-sensing receptor,CaSR)是一种分布广泛的G蛋白偶联受体,活化后可调节Ca^(2+)等多条信号通路,不仅在维持机体钙平衡中发挥重要作用,还参与调控细胞的分泌、增殖、凋亡和离子通道开放等。造血干细胞和间充质干细胞表达的CaSR除参与干细胞迁移、黏附、归巢外,还通过多种信号通路介导调控干细胞自身的功能、特性。该文主要综述了CaSR的功能特点、与疾病的关系,及对造血干细胞和间充质干细胞生物学特性影响的研究进展。 展开更多

关键词 钙敏感受体 G-蛋白偶联受体 细胞信号通路 造血干细胞 间充质干细胞 人参皂苷RG1 西那卡塞

在线阅读 下载PDF 职称材料

NO前药JS-K对HL-60细胞增殖、分化的影响 被引量：1

9

作者 范振海 匡菊香 +5 位作者 徐尚福 王丽华 方宁 聂晶 吴芹 余丽梅 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第6期797-800,共4页

目的观察一氧化氮前体药物JS-K对白血病HL-60细胞增殖分化的影响。方法体外传代培养HL-60细胞,用不同浓度的JS-K处理HL-60细胞24～96h,MTT法测定细胞活力,观察细胞生长情况。流式细胞仪检测细胞分化的表面分子变化。结果按对数浓度差0.... 目的观察一氧化氮前体药物JS-K对白血病HL-60细胞增殖分化的影响。方法体外传代培养HL-60细胞,用不同浓度的JS-K处理HL-60细胞24～96h,MTT法测定细胞活力,观察细胞生长情况。流式细胞仪检测细胞分化的表面分子变化。结果按对数浓度差0.5的间距加入JS-K0.3～10μmol.L-1,处理24～96h,随着JS-K浓度的增加和作用时间的延长,MTT法检测所得各组的光密度值呈剂量依赖性和时间依赖性降低,细胞生长抑制率增高,JS-K作用96h抑制HL-60细胞增殖的IC50为(1.025±0.23)μmol.L-1。JS-K3和10μmol.L-1处理96h后,显微镜下可见细胞数量明显减少,细胞皱缩、细胞碎片明显增加。JS-K3μmol.L-1作用96h后,表达CD11b阳性和CD14阳性细胞的百分率明显提高。结论JS-K可明显抑制HL-60细胞的增殖,促进HL-60细胞分化。 展开更多

关键词 JS—K HL-60细胞 细胞生长 分化

在线阅读 下载PDF 职称材料

人脐带间充质干细胞促进肝癌细胞的增殖和转移 被引量：1

10

作者 吴宁 杭化莲 +3 位作者 张玉玲 戴绘娟 夏强 卞建民 《南京医科大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2014年第8期1003-1009,共7页

目的:研究人脐带来源的间充质干细胞(human umbilical cord mesenchymal stem cells,UC-MSCs)在体内、体外实验中对人肝癌细胞株HepG2的增殖和转移作用。方法:将UC-MSCs在无血清DMEM/F12培养基中培养48 h,收集上清液(MSCsCM)。加入到He... 目的:研究人脐带来源的间充质干细胞(human umbilical cord mesenchymal stem cells,UC-MSCs)在体内、体外实验中对人肝癌细胞株HepG2的增殖和转移作用。方法:将UC-MSCs在无血清DMEM/F12培养基中培养48 h,收集上清液(MSCsCM)。加入到HepG2的培养基中,使其在HepG2培养基的终浓度为25%、50%和75%作为实验组,DMEM/F12作为对照组,采用CCK-8法检测细胞增殖效应。其后使用Transwell法检测细胞的侵袭效应。建立裸鼠皮下肿瘤模型,健康雌性裸鼠12只随机分为A(HepG2细胞单/左侧皮下成瘤)、B(UC-MSCs+HepG2预混单/左侧皮下成瘤)、C(左侧HepG2、右侧UC-MSCs+HepG2皮下成瘤)3组(n=4),每隔7 d监测成瘤体积变化,50 d后统一处死称量肿瘤湿重。结果:经各浓度MSCs-CM处理后HepG2细胞增殖能力较对照组明显增高(P<0.05);实验组侵袭能力明显高于对照组(P<0.01)。50 d后皮下肿瘤湿重测得A组(0.054 2±0.011 2)g、B组(0.292 0±0.156 9)g、C组[左侧(0.089 4±0.024 2)g、右侧(0.332 6±0.102 9)g],并且从定期体积测量数据发现,两组体积的差异随着时间的推移逐渐增大(P<0.05)。结论:UC-MSCs能促进HepG2的生长和转移,并且这种对肿瘤的增殖和侵袭促进作用可能与UC-MSCs分泌的一些因子有关。 展开更多

关键词 脐带间充质干细胞 肝癌 HEPG2 肿瘤增殖 肿瘤转移

在线阅读 下载PDF 职称材料

加味四物汤水提物对急性心肌梗死小鼠骨髓细胞动员、定植及分化的影响 被引量：2

11

作者 王钰莹 魏英 +1 位作者 雷江红 余丽梅 《实用医学杂志》 CAS 北大核心 2017年第7期1083-1086,共4页

目的:探讨加味四物汤水提物(mSWT)对急性心肌梗死(AMI)模型小鼠骨髓细胞动员及定植的影响。方法:结扎昆明种小鼠冠状动脉左前降支,制备AMI模型;DAPI胫骨骨髓腔注射标记骨髓细胞,灌胃给予mSWT,流式细胞术检测外周血EPCs比例;心肌组织病... 目的:探讨加味四物汤水提物(mSWT)对急性心肌梗死(AMI)模型小鼠骨髓细胞动员及定植的影响。方法:结扎昆明种小鼠冠状动脉左前降支,制备AMI模型;DAPI胫骨骨髓腔注射标记骨髓细胞,灌胃给予mSWT,流式细胞术检测外周血EPCs比例;心肌组织病理学观察骨髓细胞在AMI区的定植和微小血管密度。结果:与模型组比较,60 mg/kg mSWT治疗后,mSWT治疗组外周血中EPCs细胞比例明显增加(P<0.05);AMI小鼠心肌梗死面积明显减小,梗死区炎性细胞浸润较少,心肌细胞变性坏死减轻,存活的心肌组织较多,明显可见较多的DAPI标记骨髓来源细胞在AMI区域定植、存活,且新生毛细血管增多。结论:mSWT能明显提高AMI小鼠外周血EPCs细胞比例,改善AMI小鼠心肌组织病理改变,其作用可能与动员骨髓细胞趋化至AMI区域定植,促进血管新生有关。 展开更多

关键词 加味四物汤 急性心肌梗死 骨髓细胞 细胞动员

在线阅读 下载PDF 职称材料

PDE5抑制剂伐地那非预处理对人羊膜间充质干细胞生物学特性的影响

12

作者 喻皇飞 冯吉梅 +2 位作者 方宁 赵玉洁 余丽梅 《实用医学杂志》 CAS 北大核心 2014年第9期1376-1380,共5页

目的:观察特异性5型磷酸二酯酶抑制剂(PDE5)伐地那非对人羊膜间充质干细胞(hAMSCs)生物学特性的影响。方法:分离培养hAMSCs,以终浓度为10μmol/L伐地那非预处理hAMSCs,观察伐地那非处理hAMSCs组(Vard-hAMSCs)生长形态,采用流式细胞术分... 目的:观察特异性5型磷酸二酯酶抑制剂(PDE5)伐地那非对人羊膜间充质干细胞(hAMSCs)生物学特性的影响。方法:分离培养hAMSCs,以终浓度为10μmol/L伐地那非预处理hAMSCs,观察伐地那非处理hAMSCs组(Vard-hAMSCs)生长形态,采用流式细胞术分析比较hAMSCs细胞免疫表型、增殖能力及抗氧化损伤能力;免疫双荧光染色计数阳性表达细胞数,计算hAMSCs向神经细胞诱导分化百分率。结果:(1)流式细胞术结果显示,hAMSCs、Vard-hAMSCs均阳性表达CD90、CD105、CD73,不表达CD45、CD34、CD19、CD11b及HLA-DR;Vard-hAMSCs组细胞S期细胞比率及增殖指数为(0.57±0.40)%和(2.20±1.60)%,与hAMSCs组[分别是(0.62±1.33)%,(1.90±1.40)%]比较,无统计学差异(P>0.05);(2)Annexin V/PI双染色结果显示,经250μmol/L H2O2作用4 h后,Vard-hAMSCs组细胞凋亡率为(7.67±0.82)%,明显低于hAMSCs组(18.72±2.92)%和特异性Vardenafil阻断剂组(15.90±1.69)%(均P<0.05);(3)免疫双荧光染色结果显示,在相同诱导条件下,Vard-hAMSCs组细胞MAP-2及GFAP阳性细胞百分率分别是(49.8±6.42)%和(55.2±6.10)%,均高于hAMSCs组[分别为(29±3.94)%,(32.2±3.03)%,P<0.05]。结论 :伐地那非处理一定时间可明显提高hAMSCs抗氧化损伤效应和hAMSCs向神经细胞分化的能力,但短时间内不明显影响hAMSCs生长形态、增殖能力和免疫表型。提示伐地那非处理可能作为hAMSCs移植治疗神经系统疾病的优选预处理方案。 展开更多

关键词 间充质干细胞 环磷酸鸟苷 5型磷酸二酯酶抑制剂 预处理

在线阅读 下载PDF 职称材料

兔动员外周血间充质干细胞集落形成能力与神经元诱导分化研究 被引量：2

13

作者 刘小慧 章涛 +3 位作者 张潜 刘金伟 刘祖林 汤宁宁 《西安交通大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2014年第1期26-29,共4页

目的研究动员后兔外周血间充质干细胞(PBMSCs)的存在频率,并对PBMSCs进行神经元诱导分化鉴定。方法采用粒细胞集落刺激因子(G-CSF)皮下注射动员,结合密度梯度离心和贴壁培养法分离、培养兔外周血样品中的PBMSCs,利用集落形成率分析动员... 目的研究动员后兔外周血间充质干细胞(PBMSCs)的存在频率,并对PBMSCs进行神经元诱导分化鉴定。方法采用粒细胞集落刺激因子(G-CSF)皮下注射动员,结合密度梯度离心和贴壁培养法分离、培养兔外周血样品中的PBMSCs,利用集落形成率分析动员兔PBMSCs的存在频率,并对PBMSCs的神经元分化能力进行体外诱导鉴定。结果动员后的PBMSCs原代培养24h后,可见较多短梭形及多角形贴壁细胞,3～4d后出现集落样生长,传代培养的PBMSCs形态均一、呈长梭形漩涡状生长;未动员的外周血样品中的贴壁细胞少,集落形成少,且易老化,无法传代。集落形成率实验显示,动员后的PBMSCs在每百万外周血单个核细胞中有2.8～10.8个;而未动员组PBMSCs仅有0～3个。免疫细胞化学染色显示,PBMSCs经神经诱导7d后其神经元特异性烯醇化酶(NSE)、神经元特性核蛋白(NeuN)染色阳性。结论动员剂可提高兔外周血中的PBMSCs含量,所获取的PBMSCs具备神经元分化能力。 展开更多

关键词 兔 周血间充质干细胞 集落形成率 神经元 诱导分化

在线阅读 下载PDF 职称材料

确证家兔外周血中存在具有多向分化能力的间充质干细胞 被引量：2

14

作者 刘小慧 章涛 +4 位作者 方宁 张潜 黄跃 刘金伟 汤宁宁 《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2013年第1期193-197,共5页

本研究确证家兔外周血中存在具有多向分化潜能的间充质干细胞(MSC)。取成年新西兰大白兔,经每日皮下注射粒细胞集落刺激因子30μg/kg动员6 d后采集外周血样品,用Ficoll密度梯度离心和贴壁培养法分离纯化外周血间充质干细胞(PBMSC),镜下... 本研究确证家兔外周血中存在具有多向分化潜能的间充质干细胞(MSC)。取成年新西兰大白兔,经每日皮下注射粒细胞集落刺激因子30μg/kg动员6 d后采集外周血样品,用Ficoll密度梯度离心和贴壁培养法分离纯化外周血间充质干细胞(PBMSC),镜下观察其生长形态并绘制增殖曲线;流式细胞术分析其表型特征;并分别对培养的PBMSC进行成骨、成软骨及成脂细胞诱导分化能力鉴定。结果表明:①原代培养24 h后,可见较多短梭形及多角形贴壁细胞,3-4 d后出现集落样生长,传代培养的PBMSC形态均一、呈长梭形漩涡状生长;②PBMSC增殖能力旺盛,培养2 d后进入对数生长期,细胞倍增时间为37.4 h;③流式细胞术检测显示,培养的PBMSC高表达CD29,不表达CD14;④PBMSC经成骨诱导培养21 d后,茜素红染色显示有明显的钙结节形成;经微团无血清软骨培养体系诱导培养21 d后,细胞团切片,阿利新蓝染色呈强阳性反应;经成脂诱导培养21 d后,油红染色显示诱导细胞胞浆内有大量脂滴。结论:成功从兔外周血中分离培养了PBMSC,在适宜诱导培养条件下具有向成骨、成软骨、成脂分化的能力。 展开更多

关键词 外周血 间充质干细胞 诱导分化 成骨细胞 成软骨细胞 成脂细胞 兔

在线阅读 下载PDF 职称材料

人脐血清对人脐带血间充质干细胞生物学特征与衰老的影响 被引量：1

15

作者 王爽 范振海 +5 位作者 刘祖林 王钰莹 方宁 喻皇飞 刘金伟 余丽梅 《重庆医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第5期582-586,共5页

目的:探讨人脐血清(human umbilical cord blood serum,CBS)对体外培养人脐血间充质干细胞(human umbilical cord blood mesenchymal stem cells,hUCB-MSCs)基本生物学特征的影响。方法:密度梯度离心分离脐带血单个核细胞,以含3%CBS加7... 目的:探讨人脐血清(human umbilical cord blood serum,CBS)对体外培养人脐血间充质干细胞(human umbilical cord blood mesenchymal stem cells,hUCB-MSCs)基本生物学特征的影响。方法:密度梯度离心分离脐带血单个核细胞,以含3%CBS加7%胎牛血清(fetal bovine serum,FBS)(CBS组)或10%FBS(FBS组)的完全培养基培养hUCB-MSCs,流式细胞术检测细胞表面分子与细胞周期,显微镜下测定细胞表面积和表达β-半乳糖苷酶细胞百分率,MTT法检测光密度值、绘制生长曲线。结果:CBS组和FBS组均表达CD44、CD105、CD90、CD73,不表达CD45、CD34、CD11b、CD19和人白细胞DR抗原(human leukocyte antigen DR,HLA-DR),但与FBS组比较,CBS组表达CD90细胞百分率更低,G0/G1期细胞比例较少,细胞增殖指数较高(P<0.05)且细胞表面积也明显更小(P<0.05)。CBS组生长曲线较FBS组左移,峰值更高,细胞倍增时间48.37 h,FBS组则为54.43 h。FBS组β-gal染色阳性细胞百分率明显高于CBS组(P<0.05)。结论:部分CBS合用FBS培养hUCB-MSCs能更好地促进细胞增殖,并更好地保持hUCB-MSCs的基本生物学特征和延缓细胞的衰老。 展开更多

关键词 人脐血清 脐带血间充质干细胞 生物学特征 衰老

在线阅读 下载PDF 职称材料

羊膜间充质干细胞移植改善百草枯中毒肺纤维化大鼠肺组织病理学变化 被引量：2

16

作者 李玉香 何方 +4 位作者 王钰莹 徐尚福 刘祖林 万雪 余丽梅 《实用医学杂志》 CAS 北大核心 2017年第18期2999-3003,共5页

目的探讨人羊膜间充质干细胞(hAMSCs)移植对百草枯中毒肺纤维化大鼠模型肺组织病理学变化的影响。方法将46只SD大鼠随机分为假手术组、模型组和hAMSCs移植组。2%百草枯灌胃[100 mg/(kg·只)]制备肺纤维化模型,尾静脉移植hAMSCs[2... 目的探讨人羊膜间充质干细胞(hAMSCs)移植对百草枯中毒肺纤维化大鼠模型肺组织病理学变化的影响。方法将46只SD大鼠随机分为假手术组、模型组和hAMSCs移植组。2%百草枯灌胃[100 mg/(kg·只)]制备肺纤维化模型,尾静脉移植hAMSCs[2×10~6个细胞/(mL·只)],HE和免疫组化染色后,显微镜下观察肺组织病理学变化。结果与模型组比较,hAMSCs移植组大鼠一般状况较好。肉眼观发现,模型组大鼠两肺叶出现较多大面积白色纤维化病灶,hAMSCs移植组则为较少、散在的点片状病灶。显微镜下可见,模型组大鼠肺组织结构紊乱,肺泡壁增厚,有大面积间质增生和大量炎细胞浸润,而hAMSCs移植组肺组织结构明显改善,肺泡壁多为单层细胞,仅有少量、小面积间质增生,炎细胞浸润显著地减少,且有较多抗人细胞核特异性抗体阳性hAMSCs定植、存活于肺间质,少见于肺泡壁。结论移植的hAMSCs可定植、存活于肺组织,发挥治疗百草枯中毒肺纤维化的作用。 展开更多

关键词 肺纤维化 百草枯 组织病理学 抗人细胞核特异性抗体

在线阅读 下载PDF 职称材料

大鼠外周血间充质干细胞的富集及生物学特性研究 被引量：1

17

作者 贾临瑛 张潜 +4 位作者 方宁 陈龙 余丽梅 刘金伟 章涛 《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2015年第2期506-511,共6页

目的:探究大鼠外周血间充质干细胞(PBMSC)的有效富集方法,并进一步研究其生物学特性。方法:采集经G-CSF动员的4周龄SD大鼠外周血,用密度梯度离心法分离出单个核细胞,继而采用贴壁培养法获得成纤维样集落生长细胞,绘制细胞生长曲线;应用... 目的:探究大鼠外周血间充质干细胞(PBMSC)的有效富集方法,并进一步研究其生物学特性。方法:采集经G-CSF动员的4周龄SD大鼠外周血,用密度梯度离心法分离出单个核细胞,继而采用贴壁培养法获得成纤维样集落生长细胞,绘制细胞生长曲线;应用流式细胞术(CD90、CD44、CD29、CD45、CD11b和CD79a)和免疫细胞化学染色法(CD73、CD105、CD34和HLA-DR)分析富集的第2代PBMSC的表型特征,并对其进行成骨、成软骨和成脂肪细胞诱导分化能力鉴定。结果:1原代培养6-7 d可见明显的成纤维样细胞集落生长,至培养21 d细胞生长汇合度可达80%;传代细胞贴壁能力强,形态均一,呈梭形漩涡状生长;传代培养的PBMSC于培养次日即可进入对数生长期,细胞倍增时间为39.2 h。2富集的PBMSC高表达CD90、CD44、CD29、CD73及CD105,不表达CD45、CD11b、CD79a、CD34和HLA-DR。3PBMSC分别经成骨、成软骨和成脂细胞诱导分化培养21 d后,再分别经茜素红染色显示有大量钙化结节形成,阿利新蓝染色的胞浆内有大量糖胺聚糖形成,油红O染色细胞内有大量脂滴形成。结论:采用本研究方法可从大鼠外周血中分离富集到高纯度、高丰度的PBMSC,且其具备MSC的生长特点和表型特征,并具有中胚层多系分化能力。 展开更多

关键词 外周血 间充质干细胞 诱导分化 成骨细胞 成软骨细胞 成脂细胞 大鼠

在线阅读 下载PDF 职称材料

人参总皂苷促进血管新生改善急性心肌梗死大鼠心功能 被引量：38

18

作者 魏英 余丽梅 +2 位作者 王钰莹 姚观平 潘丽 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第4期559-564,共6页

目的探讨人参总皂苷(total ginsenosides,TG)对大鼠急性心肌梗死(acute myocardial infarction,AMI)模型血管新生及心功能的影响。方法结扎♂SD大鼠冠状动脉前降支,制备AMI模型,随机分为模型组、TG低剂量和高剂量组(腹腔注射给予TG 20、... 目的探讨人参总皂苷(total ginsenosides,TG)对大鼠急性心肌梗死(acute myocardial infarction,AMI)模型血管新生及心功能的影响。方法结扎♂SD大鼠冠状动脉前降支,制备AMI模型,随机分为模型组、TG低剂量和高剂量组(腹腔注射给予TG 20、40 mg·kg^(-1)·d^(-1)),假手术组与模型组给予等量生理盐水;彩色多普勒超声检测大鼠心功能;HE染色、Masson染色和免疫组化染色后观察心肌病理组织学变化和微血管密度;real-time PCR检测心肌组织中血管内皮生长因子(VEGF)和碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)mRNA水平。结果 TG治疗35 d后,与模型组比较,TG高和低剂量组均能明显缩小左心室舒张末期内径、左心室收缩末期内径、舒张末期左室容积和收缩末期左室容积(P<0.05),明显增加左室射血分数、左室短轴缩短率(P<0.01)。TG组心肌梗死面积和纤维化改变明显减小,心室壁较厚;梗死区及其周边心肌组织CD31阳性细胞组成的微血管密度较模型组增高(P<0.05);缺血区心肌组织中VEGF和bFGF mRNA表达明显高于模型组(P<0.01)。结论 TG可明显促进急性心肌梗死大鼠心脏功能恢复和改善心室重构及梗死区心肌血液供应,作用机制与上调心肌组织VEGF和bFGF基因表达、促进血管新生而增加血液供应有关。 展开更多

关键词 人参总皂苷 急性心肌梗死 心功能 血管内皮生长因子 碱性成纤维细胞生长因子 血管新生 心室重构

在线阅读 下载PDF 职称材料

粉被虫草液体培养条件的优化 被引量：8

19

作者 肖建辉 刘祖林 +4 位作者 刘金伟 肖瑜 方宁 祁莹 梁宗琦 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2004年第8期113-118,共6页

通过摇瓶液体培养正交试验获得了粉被虫草的液体培养条件,即蔗糖2.5%,马铃薯淀粉2%,黄豆0.5%,牛肉膏0.5%,酵母膏0.1%,K2HPO4 0.1%,KCl 0.02%,MgSO4·7H2O 0.05%,pH5～7,装液量(100ml/250ml摇瓶),加15颗玻璃珠作分散剂,5%接种量,旋... 通过摇瓶液体培养正交试验获得了粉被虫草的液体培养条件,即蔗糖2.5%,马铃薯淀粉2%,黄豆0.5%,牛肉膏0.5%,酵母膏0.1%,K2HPO4 0.1%,KCl 0.02%,MgSO4·7H2O 0.05%,pH5～7,装液量(100ml/250ml摇瓶),加15颗玻璃珠作分散剂,5%接种量,旋转式摇床150r/min,28℃培养7d,达到最大菌丝干重31.86g/L,于9d获得最大胞内产物3.13g/L。同时,对摇瓶液体培养和生物反应器液体深层分批培养的动力学做了较系统的研究,无论生物反应器还是摇瓶,其培养过程中相对应的pH、残糖、氨基氮、菌丝干重、胞内产物等参数变化趋势基本一致,但生物反应器培养时间大大缩短,48h即可达到最大菌丝干重29.97g/L,54h达到4.95g/L的最高胞内产物产率。生物反应器设定培养温度28℃、装液量65%、接种量10%、0.2%的消泡剂、搅拌转速350r/min、通气量(12±3)L/min、罐压1.1MPa、初始pH6.5,培养基配方用食用蔗糖3%、蔗糖糖蜜2%、花生0.5%分别替代蔗糖、马铃薯淀粉、牛肉膏以降低成本。实验表明,粉被虫草的液体培养条件基本能达到工业发酵水平的要求。 展开更多

关键词 粉被虫草 液体培养 优化 正交试验 胞内产物

在线阅读 下载PDF 职称材料

PPARγ功能与疾病关系研究进展 被引量：41

20

作者 马晶晶 章涛 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第5期601-604,共4页

过氧化物酶体增殖物激活受体γ(peroxisome prolifera-tor-activated receptor gamma(PPARγ)对脂质代谢、脂肪形成、细胞分裂和凋亡等多种生物学过程具有调节作用。近年来的研究发现,配体激活PPARγ具有抗肥胖、高血压、动脉粥样硬化... 过氧化物酶体增殖物激活受体γ(peroxisome prolifera-tor-activated receptor gamma(PPARγ)对脂质代谢、脂肪形成、细胞分裂和凋亡等多种生物学过程具有调节作用。近年来的研究发现,配体激活PPARγ具有抗肥胖、高血压、动脉粥样硬化、糖尿病、肿瘤等疾病的有益作用,使得围绕PPARγ受体功能和配体筛选研究成为生物医学和药理学研究的前沿热点,并有望成为治疗上述顽疾的新的药物靶标。该文就PPARγ与疾病关系的研究进展做一综述。 展开更多

关键词 过氧化物酶体增殖物激活受体Γ 肿瘤 动脉粥样硬化 肝纤维化 肾脏疾病 神经保护

在线阅读 下载PDF 职称材料