缺氧预处理外周间充质干细胞对兔血管成形术后再狭窄的影响 被引量：6

1

作者 石蓓 郭艳 +2 位作者 王正龙 王冬梅 沈长银 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第9期1686-1691,共6页

目的:探讨经骨髓动员后外周血分离的间充质干细胞(MSCs)移植对动脉粥样硬化模型兔颈动脉球囊成形术后再狭窄的防治作用及可能机制。方法:粒细胞集落刺激因子(G-CSF)动员、外周血分离体外扩增获得MSCs,增强型绿色荧光蛋白(EGFP)报告基因... 目的:探讨经骨髓动员后外周血分离的间充质干细胞(MSCs)移植对动脉粥样硬化模型兔颈动脉球囊成形术后再狭窄的防治作用及可能机制。方法:粒细胞集落刺激因子(G-CSF)动员、外周血分离体外扩增获得MSCs,增强型绿色荧光蛋白(EGFP)报告基因标记备用。建立兔动脉粥样硬化狭窄模型,随机分为缺氧预处理MSCs移植组(HP)、非缺氧预处理MSCs移植组(NHP)及对照组(C),再于球囊成形术后立即耳缘静脉内分别注入标记的缺氧处理、非处理MSCs或培养液。术后7 d、14 d、28 d采集外周血用ELISA法检测血管内皮生长因子(VEGF)水平;术后28 d处死动物留取血管标本通过Weigert弹力纤维染色及免疫组化染色进行形态学分析、归巢MSCs分析、再内皮化程度分析。结果:HP组、NHP组术后各时点VEGF水平均显著高于C组(P<0.01);术后7d、14 d HP组显著高于NHP组(P<0.05),28 d则差异无显著。术后7 d血管组织中仅HP组、NHP组血管组织中有EGFP(+)细胞分布;术后28 d HP组内膜增殖程度、再狭窄率明显低于NHP组(P<0.05),而该2组均显著低于C组(P<0.01);再内皮化程度HP组明显优于NHP组(P<0.05)、同时该2组又均显著优于C组(P<0.01)。结论:MSCs移植能够抑制模型兔颈动脉球囊成形术后内膜增生、促进损伤血管快速内皮化从而降低再狭窄率,移植经缺氧预处理的MSCs可增强上述作用,可能与缺氧应激诱导MSCs分泌细胞因子功能增强有关。 展开更多

关键词 间充质干细胞 缺氧 兔 绿色荧光蛋白 再内皮化 再狭窄

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外周血间充质干细胞移植对球囊损伤兔血管平滑肌细胞凋亡的影响 被引量：5

2

作者 郭艳 石蓓 +2 位作者 王正龙 王冬梅 许官学 《中国生物医学工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第2期288-294,共7页

探讨外周血间充质干细胞(MSCs)移植对模型兔颈动脉球囊成形术后平滑肌细胞凋亡的影响。粒细胞集落刺激因子(G-CSF)动员5 d后采集外周血,用密度梯度离心法结合反复贴壁法分离培养获得纯化的MSCs,以增强型绿色荧光蛋白(GFP)报告基因标记... 探讨外周血间充质干细胞(MSCs)移植对模型兔颈动脉球囊成形术后平滑肌细胞凋亡的影响。粒细胞集落刺激因子(G-CSF)动员5 d后采集外周血,用密度梯度离心法结合反复贴壁法分离培养获得纯化的MSCs,以增强型绿色荧光蛋白(GFP)报告基因标记备用。建立兔动脉粥样硬化狭窄模型,随机分为MSCs移植组及对照组,于颈动脉球囊成形术后分别静脉注入MSCs或等体积培养液。术后7、14、28 d取球囊损伤血管标本经TUNEL法(TdT-mediated d-UTP nick end labeling)测定血管平滑肌细胞凋亡率;同时进行归巢MSCs的鉴定;此外,测定术后28 d的内膜、中膜面积,再狭窄率及再内皮化情况。术后7、14、28 d,与对照组比较,移植组平滑肌细胞凋亡率明显增高;仅在移植组血管组织中有GFP阳性细胞分布;术后28 d,移植组内膜面积、内膜中膜面积之比及再狭窄率显著低于对照组,而再内皮化程度则明显优于对照组。静脉移植外周血MSCs能够促进模型兔球囊损伤血管快速内皮化,抑制新内膜增生、减少再狭窄率;这一作用可能与损伤血管局部平滑肌细胞凋亡增加有关。 展开更多

关键词 间充质干细胞 球囊成形术 内膜增生 细胞凋亡 再狭窄

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人受体活性修饰蛋白1基因修饰的骨髓间充质干细胞移植对兔血管成形术后新生内膜的影响 被引量：4

3

作者 龙仙萍 赵然尊 +1 位作者 石蓓 许官学 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第4期675-682,共8页

目的:探讨人受体活性修饰蛋白1(hRAMP1)基因修饰的骨髓间充质干细胞(MSCs)移植对动脉粥样硬化模型兔颈动脉球囊成形术后新生内膜增殖的影响。方法:密度梯度离心法加贴壁培养法获得MSCs,并以携带hRAMP1的腺病毒转染MSCs获得hRAMP1基因修... 目的:探讨人受体活性修饰蛋白1(hRAMP1)基因修饰的骨髓间充质干细胞(MSCs)移植对动脉粥样硬化模型兔颈动脉球囊成形术后新生内膜增殖的影响。方法:密度梯度离心法加贴壁培养法获得MSCs,并以携带hRAMP1的腺病毒转染MSCs获得hRAMP1基因修饰的MSCs(hRAMP1-MSCs)。建立动脉粥样硬化狭窄并球囊损伤血管成形术的兔模型,随机分为hRAMP1-MSCs组、MSCs组和对照组,模型建立成功后经耳缘静脉分别注射携带pAd2-EGFP-hRAMP1或pAd2-EGFP的MSCs和PBS,于细胞移植后7 d、14 d和28 d分别处死动物取材,观察MSCs归巢、血管内皮化程度及内膜增生程度,同时检测血清血管内皮生长因子(VEGF)水平和血管局部内皮型一氧化氮合成酶(eNOS)表达。结果:细胞移植后不同时点hRAMP1-MSCs组和MSCs组损伤血管增生内膜均有CD31和增强型绿色荧光蛋白(EGFP)分布,但以hRAMP1-MSCs组内皮化程度明显,MSCs组次之,两者与对照组比较均有显著差异(P<0.05);细胞移植后不同时点hRAMP1-MSCs组和MSCs组内膜增生面积及再狭窄率均低于对照组(P<0.05),尤以hRAMP1-MSCs组降低明显;细胞移植后不同时点hRAMP1-MSCs组和MSCs组血清VEGF水平和血管eNOS表达较对照组增加(P<0.05),而hRAMP1-MSCs组又明显高于MSCs组(P<0.05);损伤血管新生内膜增殖细胞核抗原(PCNA)阳性表达在hRAMP1-MSCs组最少,对照组最多。结论:hRAMP1基因修饰的MSCs能更有效促进损伤内膜快速内皮化,重组hRAMP1腺病毒载体不影响MSCs向内皮细胞分化潜能。基因联合干细胞治疗能更好地促进损伤动脉快速内皮化,降低血管成形术后再狭窄。 展开更多

关键词 受体活性修饰蛋白1 间充质干细胞 新生内膜 再内皮化 血管成形术

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转染hRAMP1的间充质干细胞对心肌梗死后局部血管再生的作用

4

作者 赵然尊 龙仙萍 +2 位作者 刘志江 王冬梅 石蓓 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第15期1496-1500,共5页

目的探讨腺病毒介导hRAMP1基因转染间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)移植对心肌梗死后新生血管生成及其可能机制。方法密度梯度离心并贴壁培养获得兔骨髓MSCs,并分别转染pAd2-hRAMP1或pAd2-EGFP后给予CGRP刺激,ELISA法测定细... 目的探讨腺病毒介导hRAMP1基因转染间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)移植对心肌梗死后新生血管生成及其可能机制。方法密度梯度离心并贴壁培养获得兔骨髓MSCs,并分别转染pAd2-hRAMP1或pAd2-EGFP后给予CGRP刺激,ELISA法测定细胞培养上清液中VEGF和HGF水平。建立心肌梗死再灌注兔模型,采用随机数字表法分为MSChRAMP1组(pAd2-hRAMP1转染MSCs移植)、MSCnull组(pAd2-EGFP转染MSCs移植)组和对照组(等量生理盐水注射)(n=10)。2周时Western blot检测心肌梗死组织促血管生长因子VEGF和HGF蛋白表达;4周时TTC染色测定心肌梗死面积比;抗CD31免疫组化染色检测心肌梗死区及梗死周边区新生毛细血管密度。结果 CGRP诱导72 h后MSChRAMP1培养上清液中VEGF和HGF水平显著高于MSCnull组[VEGF:(1 859.4±267.4)vs(1 344.4±137.2);(1 052.2±239.3)vs(683.8±150.5)pg/ml,P<0.05]。细胞移植后4周TTC染色检测显示MSChRAMP1组心肌梗死面积显著降低对照组和MSCnull组[(10.1±2.9)%vs(30.6±2.7)%和(22.5±3.2)%,P<0.05];抗CD31免疫组化染色显示,MSChRAMP1组的梗死区和梗死交界区新生毛细血管计数明显高于对照组和MSCnull组(P<0.05);Western blot检测显示细胞移植后2周MSChRAMP1组心肌梗死区促血管生长因子VEGF和HGF蛋白表达显著高于对照组和MSCnull组(P<0.05)。结论MSChRAMP1能通过提高梗死区心肌组织中促血管生长因子VEGF和HGF的表达,促进心肌梗死区和梗死交界区新生毛细血管生成,降低心肌梗死面积。 展开更多

关键词 受体活性修饰蛋白-1 间充质干细胞 心肌梗死 再血管化 细胞因子

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冠状动脉支架植入术后再狭窄危险因素的分析 被引量：9

5

作者 王冬梅 黄爽 +3 位作者 刘志江 沈长银 石蓓 赵然尊 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第19期2174-2177,共4页

目的 回顾性分析经皮冠状动脉支架植入术后复查冠状动脉造影患者冠状动脉支架内再狭窄（in-stent restenosis,ISR）的相关危险因素。方法 纳入2007年1月至2015年5月在遵义医学院附属医院心内科住院行冠状动脉支架植入术并于术后8~12个... 目的 回顾性分析经皮冠状动脉支架植入术后复查冠状动脉造影患者冠状动脉支架内再狭窄（in-stent restenosis,ISR）的相关危险因素。方法 纳入2007年1月至2015年5月在遵义医学院附属医院心内科住院行冠状动脉支架植入术并于术后8~12个月随访行冠状动脉造影的患者1 136例,其中男性835例,女性301例,年龄（61.61±12.32）岁。根据随访造影结果支架相关病变血管是否狭窄及程度将其分成ISR组（n=72）和非ISR组（n=1 064）,记录两组患者的心血管危险因素、临床合并症、用药情况以及介入治疗相关参数等,分析可能导致ISR的相关因素。结果 本组病例资料造影随访显示ISR发生率为6.3%。与非ISR组比较,ISR组患者在吸烟、糖尿病、血脂异常、高血压、术后服药依从性差、长病变和多支病变、支架直径和长度及最小管腔直径（MLD）等方面差异具有统计学意义（P〈0.05）。长期规律服用阿司匹林、氯吡格雷和大剂量他汀类患者的比例,在非ISR组与ISR组比较差异亦具有统计学意义（P〈0.05）。结论 冠状动脉支架植入术后再狭窄是临床多因素共同作用结果,与未控制的心血管危险因素、抗血小板治疗和他汀治疗依从性以及支架治疗病变特征相关。 展开更多

关键词 冠心病 冠状动脉介入治疗 支架内再狭窄 危险因素

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封闭式负压引流术处理起搏器囊袋感染的疗效观察 被引量：4

6

作者 王冬梅 石蓓 +1 位作者 龙仙萍 荣季冬 《中国循环杂志》 CSCD 北大核心 2016年第10期1006-1008,共3页

目的：完全移除心脏起搏器植入术后囊袋感染患者的电子系统存在种种困难,探讨保守处理此类感染的可行性。方法：纳入我科2015-01至2016-02共4例起搏器囊袋感染患者,对感染囊袋及装置进行彻底清创、消毒,并结合封闭式负压引流术处理囊袋... 目的：完全移除心脏起搏器植入术后囊袋感染患者的电子系统存在种种困难,探讨保守处理此类感染的可行性。方法：纳入我科2015-01至2016-02共4例起搏器囊袋感染患者,对感染囊袋及装置进行彻底清创、消毒,并结合封闭式负压引流术处理囊袋。4例患者均未拔除电极导线,术后予静脉用抗生素治疗7～10天。结果：4例患者术后发生囊袋感染时间平均14.75个月,均为单纯囊袋感染。经囊袋清创及封闭式负压引流术处置后,随访5～10个月（平均7.25个月）,起搏器囊袋感染消失,伤口愈合良好,疗效满意。结论：通过对感染囊袋的彻底清创、对残留电子系统的合理处理并结合封闭式负压引流术,可有效控制感染实现痊愈,并避免电极导线拔除。 展开更多

关键词 心脏起搏器 人工 囊袋感染 封闭式负压引流

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降钙素基因相关肽抑制动脉损伤后NF-κB表达及其对新生内膜增殖的作用 被引量：2

7

作者 赵然尊 龙仙萍 +3 位作者 刘志江 盛瑾 王冬梅 石蓓 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第14期1472-1476,共5页

目的通过降钙素基因相关肽(calcitonin gene related peptide,CGRP)处理血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cells,VSMCs)和颈动脉损伤大鼠模型,探讨NF-κB在CGRP调节VSMCs表型改变和动脉损伤后新生内膜增殖中的作用。方法建立颈动... 目的通过降钙素基因相关肽(calcitonin gene related peptide,CGRP)处理血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cells,VSMCs)和颈动脉损伤大鼠模型,探讨NF-κB在CGRP调节VSMCs表型改变和动脉损伤后新生内膜增殖中的作用。方法建立颈动脉损伤大鼠模型,并分为对照组和CGRP组(n=24),通过HE染色观察新生内膜形成情况,并Western blot检测两组动物损伤动脉中NF-κB p65蛋白表达情况。以组织块贴壁培养法获得VSMCs,并分为对照组、IL-1β组(给予IL-1β处理)、CGRP组(给予IL-1β+CGRP处理)和CGRP8-37组(在IL-1β+CGRP基础上,加CGRP8-37)(n=24),Western blot法检测细胞内NF-κB p65蛋白和细胞表型标志蛋白表达变化,MTT法检测细胞增殖能力。结果①对照组大鼠的颈动脉损伤后7 d时新生内膜明显增加,至28 d时基本稳定,而CGRP组7 d和28 d时新生内膜面积较对照组同时间点显著降低[7d:(2.09±0.26)vs(3.76±0.33);14 d:(3.52±0.41)vs(6.38±0.61),P<0.05];且与对照组比较,CGRP组1周时NF-κB p65蛋白表达水平明显降低(P<0.05),而28 d时两组NF-κB p65表达水平无差异(P>0.05)。②在体外培养VSMCs中,IL-1β处理显著激活细胞NF-κB p65蛋白表达(P<0.05),伴随着VSMCs收缩表现标志蛋白SMα-actin表达减少和OPN表达增加(P<0.05);同时再给予CGRP处理后,则显著减弱IL-1β诱导的NF-κB p65蛋白表达(P<0.05),且使VSMCs合成表现标志蛋白OPN表达减少。RT-PCR分析获得相一致的结果。同时,CGRP显著抑制IL-1β引起的VSMCs增殖。③CGRP受体阻断剂CGRP8-37可以阻断CGRP减弱IL-1β诱导的NF-κB p65蛋白表达作用,并抑制CGRP对VSMC表达蛋白调节作用。结论 CGRP与受体结合后抑制NF-κB激活,促进VSMCs分化标志基因表达,从而抑制细胞增殖,降低动脉损伤后新生内膜增殖,这对于防治动脉粥样硬化和血管成形术后再狭窄可能具有重要应用价值。 展开更多

关键词 血管平滑肌细胞 表型改变 降钙素基因相关肽 核因子-ΚB

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慢病毒载体介导的降钙素基因相关肽转染对心脏干细胞活力的影响 被引量：2

8

作者 荣季冬 李玲 +2 位作者 龙仙萍 邓文文 石蓓 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第8期1445-1449,1456,共6页

目的:探讨携带降钙素基因相关肽(CGRP)的慢病毒体外转染对大鼠c-kit^(pos)心脏干细胞(c-kit^+ CSCs)活力的影响。方法:无菌条件下取出SD大鼠的心耳,采用酶消化法结合免疫磁珠法获取c-kit^+ CSCs,并通过流式细胞术鉴定;将携带目的基因的... 目的:探讨携带降钙素基因相关肽(CGRP)的慢病毒体外转染对大鼠c-kit^(pos)心脏干细胞(c-kit^+ CSCs)活力的影响。方法:无菌条件下取出SD大鼠的心耳,采用酶消化法结合免疫磁珠法获取c-kit^+ CSCs,并通过流式细胞术鉴定;将携带目的基因的重组慢病毒载体(Lv-EGFP-CGRP)及空病毒载体(Lv-EGFP)分别转染至ckit^+ CSCs,实验分为3组:Lv-EGFP-CGRP-CSCs组、Lv-EGFP-CSCs组和CSCs组;在荧光显微镜下观察转染情况,采用流式细胞技术测定其转染率,采用ELISA测定各组培养上清液中CGRP的浓度,采用CCK-8法检测慢病毒转染对c-kit^+ CSCs活力的影响。结果:成功分离培养获取c-kit^+ CSCs,流式细胞术鉴定显示其高表达c-kit(为91.0%),低表达CD45及CD34;成功转染慢病毒的大鼠c-kit^+ CSCs可表达绿色荧光,48 h后可稳定表达,感染复数(MOI)值为20时,荧光显微镜观察及流式细胞术结果均显示转染率达80%以上;ELISA结果示,Lv-EGFP-CGRPCSCs组细胞上清液CGRP分泌量较Lv-EGFP-CSCs组和CSCs组增加(P<0.01);CCK-8检测细胞活力的结果显示,慢病毒转染不影响c-kit^+ CSCs的活力。结论:携带CGRP的慢病毒载体可成功转染至c-kit^+ CSCs,转染Lv-EGFP-CGRP后的c-kit^+ CSCs可合成和分泌CGRP蛋白至上清液中,且转染后c-kit^+ CSCs的活力未受影响。这为基因工程细胞疗法治疗心肌梗死提供了新的理论及实验依据。 展开更多

关键词 降钙素基因相关肽 慢病毒载体 心脏干细胞 细胞活力

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腺病毒载体介导hRAMP1调节兔颈动脉球囊损伤后炎症细胞因子表达对增生内膜的影响

9

作者 龙仙萍 石蓓 +3 位作者 赵然尊 许官学 崔璨 喻田 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第14期1384-1387,共4页

目的探讨腺病毒载体介导人受体活性修饰蛋白-1(receptor activity modifying protein-1,hRAMP1)基因对兔颈动脉粥样硬化并球囊成形术后炎性细胞因子表达的影响。方法建立兔动脉粥样硬化狭窄模型并行球囊损伤血管(简称血管成形术),随机... 目的探讨腺病毒载体介导人受体活性修饰蛋白-1(receptor activity modifying protein-1,hRAMP1)基因对兔颈动脉粥样硬化并球囊成形术后炎性细胞因子表达的影响。方法建立兔动脉粥样硬化狭窄模型并行球囊损伤血管(简称血管成形术),随机抽样分为RAMP1组(n=18)和对照组(n=18),经球囊局部注射携带hRAMP1基因腺病毒载体(pAd2-GFP-RAMP1)或PBS,于注射后7、14 d和28 d,应用ELISA法检测肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和C-反应蛋白(CRP)表达水平;Western blot检测局部hRAMP1目的基因表达;免疫组织化学染色测定血管局部TNF-α表达,HE染色检测血管形态学。结果血管成形术后不同时间点TNF-α表达增加[7 d:(74.13±4.99),14 d:(93.40±6.69),28 d:(67.46±6.57)],外源hRAMP1注射后TNF-α表达下降[7 d:(64.95±6.77),14 d:(75.29±4.73),28 d:(45.08±5.00),P<0.05],病毒注射后7 d和14 d RAMP1组CRP水平[7 d:(29.27±1.57),14 d:(9.68±1.60)]与对照组比较[7 d:(43.96±7.88),14 d:(13.51±1.68)]显著下降(P<0.05),28 d 2组间无差异性;腺病毒注射后28 d损伤血管局部仍检测到hRAMP1蛋白表达,同时RAMP1组局部TNF-α表达与对照组比较明显下降,HE染色显示:RAMP1组新生内膜面积[7 d:(0.07±0.18),14 d:(0.15±0.05),28 d:(0.35±0.05)]与对照组[7 d:(0.14±0.02),14 d:(0.39±0.09),28 d:(0.56±0.05]比较明显降低(P<0.05)。结论外源hRAMP1基因调节兔动脉粥样硬化并血管成形术后CRP和TNF-α的表达,抑制血管成形术后再狭窄。 展开更多

关键词 人受体活性修饰蛋白-1 炎症细胞因子 血管成形术 增生内膜

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兔颈动脉球囊成形术促进白细胞介素6和超敏C反应蛋白的表达

10

作者 王正龙 石蓓 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第18期1813-1814,共2页

经皮冠状动脉内血管成形术（percutaneous coronary intervention，PCI）广泛应用于冠心病的治疗并取得了显著疗效，但术后6个月再狭窄（RS）有较高的发生率。研究表明PCI术所造成的血管内膜损伤可能是导致术后再狭窄的重要因素之一。... 经皮冠状动脉内血管成形术（percutaneous coronary intervention，PCI）广泛应用于冠心病的治疗并取得了显著疗效，但术后6个月再狭窄（RS）有较高的发生率。研究表明PCI术所造成的血管内膜损伤可能是导致术后再狭窄的重要因素之一。本研究通过建立血管损伤模型，观察球囊扩张前后血清超敏C反应蛋白（hs—CRP）和白细胞介素6（IL-6）水平的变化，观察其与血管损伤程度及再狭窄的关系。 展开更多

关键词 超敏C反应蛋白 白细胞介素6 颈动脉 损伤 兔

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Wnt通路调节心脏干/祖细胞增殖和存活及干性维持

11

作者 朱江兰 石蓓 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2014年第10期1110-1113,1116,共5页

Wnt在胚胎发育过程中通过调节心脏干/祖细胞增殖、迁移及定向分化促进心脏形成。成体心脏最先被认为是一个终末分化器官,不具有再生能力,但近年来发现成体心脏中仍存在着原始的心脏干/祖细胞,当受到外源性刺激时,这些细胞就会被激活,参... Wnt在胚胎发育过程中通过调节心脏干/祖细胞增殖、迁移及定向分化促进心脏形成。成体心脏最先被认为是一个终末分化器官,不具有再生能力,但近年来发现成体心脏中仍存在着原始的心脏干/祖细胞,当受到外源性刺激时,这些细胞就会被激活,参与到心脏再生中。然而关于心脏干/祖细胞的启动、活化机制仍没有研究清楚。因为Wnt参与胚胎期心脏的发育形成,研究者对成体心脏与Wnt的关系进行研究,发现Wnt也参与成体心脏再生。现就Wnt如何调节成体心脏中心脏干/祖细胞的命运促进心脏再生进行综述。 展开更多

关键词 WNT信号通路 心脏干/祖细胞 综述

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