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转基因马铃薯中人白介素-12的生物学活性 被引量:1
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作者 陈佳瑜 刘喜平 葛正龙 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第15期1632-1634,共3页
目的检测转基因马铃薯体系中表达的人白介素-12(human interleukin 12,hIL-12)的肿瘤杀伤活性。方法通过ELISA法检测转基因马铃薯中hIL-12刺激外周血单个核细胞(PBMC)产生IFN-γ的量以反映生物学活性,并观察hIL-12单克隆抗体对此生物活... 目的检测转基因马铃薯体系中表达的人白介素-12(human interleukin 12,hIL-12)的肿瘤杀伤活性。方法通过ELISA法检测转基因马铃薯中hIL-12刺激外周血单个核细胞(PBMC)产生IFN-γ的量以反映生物学活性,并观察hIL-12单克隆抗体对此生物活性的阻断效应;MTT法检测经转基因马铃薯中hIL-12作用的PBMC对NK敏感肿瘤细胞K562的杀伤作用,肿瘤细胞凋亡以Annexin V/PI双染后激光共聚焦显微镜观察。结果转基因马铃薯叶和块茎中表达的hIL-12与重组人白介素-12(rhIL-12)标准品在25~400 pg/ml间均能诱生IFN-γ,其中转基因马铃薯叶和块茎中hIL-12刺激PBMC产生IFN-γ的量分别为(163.34±22.17)~(12 107.10±3 996.51)pg/ml和(224.20±25.76)~(11 196.30±4 067.48)pg/ml,与野生对照组均有统计学差异(P<0.01),而hIL-12单克隆抗体能完全阻断此诱生IFN-γ效应。同时200 pg/ml转基因马铃薯叶、块茎中提取的hIL-12对人红白血病细胞K562的杀伤率分别为(28.4±8.7)%、(32.3±6.9)%,而与野生对照组(10.3±4.9)%的杀伤率相比,有统计学差异(P<0.05)。激光共聚焦显微镜观察到经转基因马铃薯表达hIL-12作用的K562细胞出现早、中、晚各期的凋亡特征。结论转基因马铃薯表达的hIL-12具有诱导PBMC产生IFN-γ及杀伤肿瘤细胞K562的生物学活性。 展开更多
关键词 人白介素-12 生物活性 马铃薯 转基因植物
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遵义汉族载脂蛋白A5(c.553G/T)基因多态性与高甘油三酯血症 被引量:1
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作者 余晓 戴华玉 +2 位作者 王业忠 耿争光 张志敏 《实用医学杂志》 CAS 北大核心 2016年第20期3386-3390,共5页
目的:探讨ApoA5基因c.553G/T多态性与遵义汉族HTG相关性。方法:用PCR-RFLP技术检测分析103例HTG患者和165例正常对照者ApoA5 c.553G/T多态性及地区分布差异。结果:两组中ApoA5c.553G/T基因型频率有显著差异(P〈0.05),c.553T基因在... 目的:探讨ApoA5基因c.553G/T多态性与遵义汉族HTG相关性。方法:用PCR-RFLP技术检测分析103例HTG患者和165例正常对照者ApoA5 c.553G/T多态性及地区分布差异。结果:两组中ApoA5c.553G/T基因型频率有显著差异(P〈0.05),c.553T基因在HTG组中频率明显高于正常组(P〈0.05),对HTG具有独立影响(OR=15.768,95%CI:5.916~42.025,P〈0.001);与我国汉族正常人群比较明显低于台湾、江苏和湖北(P〈0.05),与湖南和新疆相似(P〉0.05);在HTG人群中,与江苏相似(P〉0.05),明显高于新疆、低于台湾(P〈0.05)。结论:ApoA5 c.553G/T多态与遵义汉族HTG发病存在相关性及地区差异,c.553T基因可能是HTG的独立危险因素。 展开更多
关键词 高甘油三酯血症 载脂蛋白A5基因 c.553G/T多态 遵义汉族人群
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从转基因马铃薯中纯化的人白细胞介素-12的生物学活性分析 被引量:1
3
作者 黄进 罗果 葛正龙 《安徽农业科学》 CAS 北大核心 2009年第16期7334-7334,7347,共2页
[目的]研究从转人白细胞介素-12(hIL-12)基因马铃薯中纯化的hIL-12的生物学活性。[方法]MTT法检测纯化的hIL-12体外抗肿瘤作用。[结果]纯化的hIL-12在体外对NK敏感肿瘤细胞K562有杀伤作用,而野生对照组无作用。[结论]试验中从转hIL-12... [目的]研究从转人白细胞介素-12(hIL-12)基因马铃薯中纯化的hIL-12的生物学活性。[方法]MTT法检测纯化的hIL-12体外抗肿瘤作用。[结果]纯化的hIL-12在体外对NK敏感肿瘤细胞K562有杀伤作用,而野生对照组无作用。[结论]试验中从转hIL-12基因马铃薯中纯化的hIL-12具有生物学活性。 展开更多
关键词 人白细胞介素-12 纯化 生物学活性 转基因马铃薯
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转基因马铃薯中纯化人白介素-12的生物学活性分析
4
作者 罗果 黄进 葛正龙 《安徽农业科学》 CAS 北大核心 2010年第3期1173-1176,共4页
分析了转基因马铃薯中纯化人白介素-12(hIL-12)的生物学活性。结果表明,hIL-12纯化品在体外能刺激植物凝集素(PHA)活化的外周血单个核细胞(PBMC)增殖;hIL-12纯化品对人肝癌细胞HepG2.2.15的生长具有抑制作用,且其抑制效果随hIL-12浓度... 分析了转基因马铃薯中纯化人白介素-12(hIL-12)的生物学活性。结果表明,hIL-12纯化品在体外能刺激植物凝集素(PHA)活化的外周血单个核细胞(PBMC)增殖;hIL-12纯化品对人肝癌细胞HepG2.2.15的生长具有抑制作用,且其抑制效果随hIL-12浓度的升高而增强;hIL-12纯化品在体外对乙肝病毒DNA的复制和表面抗原、e抗原的分泌产生抑制作用。 展开更多
关键词 转基因马铃薯 人白介素-12 生物活性
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金钗石斛多糖对脂多糖诱导的小鼠腹腔巨噬细胞分泌TNF-α·NO的影响 被引量:30
5
作者 李小琼 金徽 +1 位作者 葛晓军 唐彦萍 《安徽农业科学》 CAS 北大核心 2009年第28期13634-13635,13672,共3页
[目的]研究金钗石斛多糖对脂多糖(LPS)诱导的小鼠腹腔巨噬细胞分泌肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、一氧化氮(NO)的影响。[方法]用不同浓度金钗石斛多糖作用于小鼠腹腔巨噬细胞,LPS作为诱导剂,采用放射免疫法检测细胞培养液中TNF-α的含量,硝... [目的]研究金钗石斛多糖对脂多糖(LPS)诱导的小鼠腹腔巨噬细胞分泌肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、一氧化氮(NO)的影响。[方法]用不同浓度金钗石斛多糖作用于小鼠腹腔巨噬细胞,LPS作为诱导剂,采用放射免疫法检测细胞培养液中TNF-α的含量,硝酸酶还原法测定细胞培养液中NO的含量,荧光法测定细胞内诱导型一氧化氮合酶(iNOS)的活性,实时PCR(real-time PCR)法测定TNF-αmR-NA、iNOS mRNA的表达。[结果]与LPS组比较,金钗石斛多糖在50~400mg/L范围内可干预LPS对小鼠巨噬细胞的作用,使小鼠腹腔巨噬细胞TNF-α、NO合成减少,iNOS活性降低,TNF-αmRNA、iNOS mRNA的表达降低。[结论]金钗石斛多糖可改善LPS对小鼠腹腔巨噬细胞的作用,使TNF-αmRNA、iNOS mRNA的表达降低,TNF-α、NO合成减少,从而起到抗炎的作用。 展开更多
关键词 金钗石斛多糖 脂多糖 巨噬细胞 肿瘤坏死因子-Α 一氧化氮
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橙皮甙抗LDL氧化及对MCP-1 mRNA转录的影响 被引量:27
6
作者 娄桂予 江渝 +1 位作者 彭家和 钱民章 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第8期717-719,共3页
目的 研究橙皮甙体内外抗脂质氧化作用及其对兔食饵性动脉斑块中单核细胞趋化蛋白 1mRNA转录的影响。方法 ①采用一次性密度梯度超速离心法制备正常人低密度脂蛋白 ,Cu2 + 诱导其氧化 ,测定不同药物浓度和作用时间体系中丙二醛含量... 目的 研究橙皮甙体内外抗脂质氧化作用及其对兔食饵性动脉斑块中单核细胞趋化蛋白 1mRNA转录的影响。方法 ①采用一次性密度梯度超速离心法制备正常人低密度脂蛋白 ,Cu2 + 诱导其氧化 ,测定不同药物浓度和作用时间体系中丙二醛含量。②采用高脂饮食加免疫损伤的方法建立家兔动脉粥样硬化模型 :将 18只家兔随机化分为正常对照组、模型组、橙皮甙组。每组 6只 ,分别给予普通饲料 (正常对照组 )和高脂饲料 (模型组 )喂养 ,橙皮甙组在喂高脂饲料的同时 ,加橙皮甙 ( 2g d)一同喂养。建模 10周末耳缘静脉采血 ,检测各组动物血清中丙二醛和一氧化氮的含量。而后处死动物 ,取胸主动脉 ,用逆转录聚合酶链反应技术检测动脉壁细胞中单核细胞趋化蛋白 1mRNA的转录水平。结果 体外实验中 ,橙皮甙显著抑制丙二醛的生成 ,并呈一定浓度依赖关系 (P <0 .0 5 ,P <0 .0 1,P <0 .0 0 1)。体内实验中 ,橙皮甙明显降低血浆丙二醛的含量 (P <0 .0 1)和一氧化氮的水平 (P <0 .0 0 1) ;并对胸主动脉壁细胞单核细胞趋化蛋白 1mRNA的转录有明显抑制作用 (P <0 .0 5 )。结论 橙皮甙在体内外均有抗氧化作用 ,其下调单核细胞趋化蛋白 展开更多
关键词 橙皮甙 动脉粥样硬化 单核细胞趋化蛋白-1 氧化型低密度脂蛋白
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金钗石斛多糖减轻大鼠脑缺血再灌注损伤 被引量:12
7
作者 李小琼 詹剑 +1 位作者 冯赞杰 徐先林 《中成药》 CAS CSCD 北大核心 2017年第4期677-683,共7页
目的探讨金钗石斛Dendrobium nobile Lindl.多糖减轻大鼠脑缺血再灌注引起氧化应激和炎症反应的损伤和可能的保护机制。方法 105只SD大鼠随机分为假手术组,模型组,尼莫地平组(10 mg/kg),金钗石斛多糖低、中、高剂量组(50、100、200 mg/... 目的探讨金钗石斛Dendrobium nobile Lindl.多糖减轻大鼠脑缺血再灌注引起氧化应激和炎症反应的损伤和可能的保护机制。方法 105只SD大鼠随机分为假手术组,模型组,尼莫地平组(10 mg/kg),金钗石斛多糖低、中、高剂量组(50、100、200 mg/kg)。采用线栓法栓塞大鼠右侧大脑中动脉建立大鼠脑缺血再灌注损伤模型。术前7 d开始灌胃,每天1次。缺血2 h再灌注24 h进行神经功能评分,测定大鼠脑梗死面积、脑指数以及脑含水量;用化学比色法分别测定超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、髓过氧化物酶(MPO)活性及丙二醛(MDA)水平;用免疫荧光染色法检测缺血区中性粒细胞的浸润情况。结果假手术组无神经功能缺损,模型组大鼠神经功能缺失症状明显,大脑指数及脑含水量升高,模型组大鼠脑组织及血清SOD、GSH-Px活性明显降低,MPO活性及MDA含有量显著升高;与模型组比较,金钗石斛多糖各剂量组大鼠神经功能缺失症状改善,大脑指数及脑含水量明显下降,脑组织及血清SOD、GSH-Px活性明显升高,MPO活性及MDA含有量显著下降;与模型组比较,金钗石斛多糖高剂量组大鼠右侧缺血区中性粒细胞浸润减少。结论金钗石斛多糖对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤有一定保护作用,其作用机制可能与抑制氧化应激和减轻炎症反应有关。 展开更多
关键词 金钗石斛多糖 脑缺血再灌注损伤 大鼠 氧化应激 炎症反应
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CCR2介导MCP-1诱导的人内皮细胞凋亡 被引量:7
8
作者 徐艳 刘喜平 +2 位作者 李琴山 尚惠锋 钱民章 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第4期356-361,共6页
本室前期工作发现,单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)可诱导人内皮细胞(hVECs)凋亡.为进一步揭示MCP-1诱导凋亡分子机理,首先观察MCP-1对hVECs CC类趋化因子受体2(C-C motifchemokine receptor-2,CCR2)蛋白表达的影响.Western印迹结果显示,MCP-... 本室前期工作发现,单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)可诱导人内皮细胞(hVECs)凋亡.为进一步揭示MCP-1诱导凋亡分子机理,首先观察MCP-1对hVECs CC类趋化因子受体2(C-C motifchemokine receptor-2,CCR2)蛋白表达的影响.Western印迹结果显示,MCP-1以剂量依赖方式诱导CCR2在hVECs的表达.以脂质体为载体的CCR2反义寡核苷酸序列转染hVECs后,激光共聚焦显微镜及膜联蛋白(annexin)V-FITC/PI双染流式细胞术显示,CCR2反义寡核苷酸转染hVECs48h后可明显降低CCR2蛋白质的表达(P<0.05),抑制MCP-1诱导的hVECs凋亡(P<0.01).反义CCR2抑制凋亡结果与加入CCR2阻断剂RS102895后细胞凋亡测定结果一致.上述结果表明,MCP-1的主要受体CCR2介导了MCP-1诱导的hVECs凋亡. 展开更多
关键词 单核细胞趋化因子1 CC类趋化因子受体2 人脐静脉内皮细胞 反义寡核苷酸 细胞凋亡
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PI3K/AKT通路在非小细胞肺癌顺铂耐药中的作用 被引量:14
9
作者 张雨 陆红玲 徐刚 《中国肺癌杂志》 CAS 北大核心 2014年第8期635-642,共8页
研究表明,PI3K/AKT信号通路在非小细胞肺癌存在异常激活,对肿瘤细胞的增殖、凋亡、存活、耐药等起着重要的作用。顺铂是临床最常用一线化疗药物,但随着治疗的进展肿瘤对其耐药的现象越来越普遍,严重制约其临床效果。顺铂耐药是多种机制... 研究表明,PI3K/AKT信号通路在非小细胞肺癌存在异常激活,对肿瘤细胞的增殖、凋亡、存活、耐药等起着重要的作用。顺铂是临床最常用一线化疗药物,但随着治疗的进展肿瘤对其耐药的现象越来越普遍,严重制约其临床效果。顺铂耐药是多种机制共同参与的复杂过程,其中PI3K/AKT通路或其组分持续被激活是非常重要的因素之一。本文对二者关系研究领域的进展作一综述。 展开更多
关键词 肺肿瘤 PI3K AKT通路 顺铂 耐药 分子机制
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染料木素对非小细胞型肺癌A549/DDP细胞增殖和凋亡的影响 被引量:5
10
作者 任彦 陆红玲 +2 位作者 宋永祥 李大玉 徐刚 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2014年第5期669-672,共4页
目的:观察染料木素(genistein)对人非小细胞型肺癌(non small cell lung cancer,NSCLC)A549/DDP细胞增殖和凋亡的影响。方法:培养A549及A549/DDP细胞株,以A549细胞为对照。①MTT法测定A549及A549/DDP细胞对顺铂的IC50值、耐药倍数及细... 目的:观察染料木素(genistein)对人非小细胞型肺癌(non small cell lung cancer,NSCLC)A549/DDP细胞增殖和凋亡的影响。方法:培养A549及A549/DDP细胞株,以A549细胞为对照。①MTT法测定A549及A549/DDP细胞对顺铂的IC50值、耐药倍数及细胞增殖抑制率;②测定0、1.25、2.5、5.0、10、20、40、60、80μg/ml染料木素作用48 h对A549/DDP细胞增殖的抑制率及IC50值;③用6.25、12.5、25μg/ml染料木素处理A549/DDP细胞24 h后,经流式细胞计量仪检测细胞周期及细胞凋亡情况。结果:①A549及A549/DDP细胞对顺铂的IC50值分别为33.6μmol/L和76.9μmol/L,耐药倍数为2.3;细胞增殖抑制率随顺铂浓度增加而逐渐加大;②染料木素对A549/DDP细胞生长的影响,随染料木素浓度增加表现为先促增殖后抑制的作用,其对A549及A549/DDP细胞的IC50值分别为85.1μg/ml和80.2μg/ml;③6.25、12.5、25μg/ml染料木素作用于A549/DDP细胞24 h后,随染料木素浓度的增加,停留于G2/M期的细胞数逐渐增多(P<0.05),同时A549/DDP细胞出现凋亡。结论:染料木素可抑制A549/DDP细胞的生长,将细胞阻滞于G2/M期,并诱导细胞凋亡。 展开更多
关键词 染料木素 人非小细胞型肺癌A549 DDP细胞 细胞增殖 细胞凋亡
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金钗石斛多糖含量测定条件和提取工艺的优化 被引量:6
11
作者 郑斯卓 葛小军 +2 位作者 李小琼 金徽 唐彦萍 《中华中医药学刊》 CAS 2008年第12期2676-2677,共2页
利用正交试验选取金钗石斛多糖含量测定的最优条件及金钗石斛多糖的最佳提取工艺。结果表明,金钗石斛多糖含量测定的最优条件是加入苯酚1.5mL,浓硫酸6mL,反应时间30m in。金钗石斛多糖最佳提取工艺的条件是提取温度为85℃,提取次数为3次... 利用正交试验选取金钗石斛多糖含量测定的最优条件及金钗石斛多糖的最佳提取工艺。结果表明,金钗石斛多糖含量测定的最优条件是加入苯酚1.5mL,浓硫酸6mL,反应时间30m in。金钗石斛多糖最佳提取工艺的条件是提取温度为85℃,提取次数为3次,乙醇终浓度为75%。本研究为金钗石斛多糖的提取和含量测定的条件提供了参考,为金钗石斛的进一步研究提供了基础。 展开更多
关键词 金钗石斛多糖 正交试验 含量测定 提取工艺
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金钗石斛水煎剂对糖尿病肾病大鼠肾脏PPARγ表达的影响 被引量:6
12
作者 刘园园 张艳磊 +2 位作者 何晓然 李小琼 唐彦萍 《医药导报》 CAS 北大核心 2014年第12期1545-1548,共4页
目的通过观察金钗石斛水煎剂对糖尿病肾病(DN)大鼠肾皮质过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)表达的影响,探讨其对DN的保护作用及相关机制。方法将60只健康SD大鼠随机分为6组,每组10只:正常对照组(NC组),模型对照组(DN组),罗格列酮组(... 目的通过观察金钗石斛水煎剂对糖尿病肾病(DN)大鼠肾皮质过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)表达的影响,探讨其对DN的保护作用及相关机制。方法将60只健康SD大鼠随机分为6组,每组10只:正常对照组(NC组),模型对照组(DN组),罗格列酮组(RGZ组),金钗石斛小剂量(LD)、中剂量(MD)、大剂量(HD)干预组。在大鼠糖尿病造模成功后各组分别给药12周,观察大鼠肾脏病理、Real-time PCR法检测大鼠肾皮质PPARγmRNA表达、Western blot法检测大鼠肾皮质中PPARγ蛋白表达的情况。结果金钗石斛水煎剂能明显改善糖尿病大鼠肾脏基底膜增厚及足突增粗融合;增加DN大鼠肾皮质中PPARγmRNA及蛋白的表达(P<0.05或P<0.01)。结论金钗石斛水煎剂可以减轻DN大鼠的肾损伤,其机制可能与上调DN大鼠肾皮质中PPARγ表达有关。 展开更多
关键词 金钗石斛水煎剂 肾病 糖尿病 过氧化物酶体增殖物激活受体Γ
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阪崎肠杆菌胶体金试纸条的制备及初步应用 被引量:6
13
作者 周鹤峰 邵敏 +1 位作者 李长福 葛正龙 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第2期172-176,共5页
制备阪崎肠杆菌(Enterobacter sakazakii,ES)胶体金快速检测试纸并对其性能进行评价。通过柠檬酸三钠法制备胶体金颗粒,标记抗阪崎肠杆菌特异性的单克隆抗体,采用双抗夹心法,将标记的胶体金复合物喷涂于试纸的结合垫,另一单抗和二抗(羊... 制备阪崎肠杆菌(Enterobacter sakazakii,ES)胶体金快速检测试纸并对其性能进行评价。通过柠檬酸三钠法制备胶体金颗粒,标记抗阪崎肠杆菌特异性的单克隆抗体,采用双抗夹心法,将标记的胶体金复合物喷涂于试纸的结合垫,另一单抗和二抗(羊抗鼠IgG抗体)分别包被在硝酸纤维素膜的检测线(T)和控制线(C)上,制备出检测阪崎肠杆菌胶体金试纸条,进行敏感性、特异性、稳定性、重复性试验,借助于简单的增菌过程,在6 h内即可检测出样品中阪崎肠杆菌的含量,灵敏度达到1×104CFU/mL,与常见的食源性致病菌无交叉反应。结果显示该试纸具有简单、灵敏、特异、稳定、快速等优点,可用于ES的检测。 展开更多
关键词 阪崎肠杆菌 单克隆抗体 胶体金 快速检测
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绞股蓝总苷对PCSK9基因表达及辛伐他汀降血脂作用的影响 被引量:21
14
作者 吴柳松 钱民章 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2017年第1期79-85,共7页
目的:探讨绞股蓝总苷(gypenosides,GPs)对大鼠肝脏前蛋白转化酶枯草溶菌素9(PCSK9)基因表达及辛伐他汀的降血脂作用的影响。方法:采用高脂饲料喂饲建立大鼠高脂血症模型。60只健康雄性SD大鼠随机分为正常对照组(control组)、高脂模型组(... 目的:探讨绞股蓝总苷(gypenosides,GPs)对大鼠肝脏前蛋白转化酶枯草溶菌素9(PCSK9)基因表达及辛伐他汀的降血脂作用的影响。方法:采用高脂饲料喂饲建立大鼠高脂血症模型。60只健康雄性SD大鼠随机分为正常对照组(control组)、高脂模型组(model组)、辛伐他汀组(Simvastatin组)、GPs组和GPs与辛伐他汀联合用药组(combined组)。除正常对照组喂食普通饲料外,其余3组大鼠均喂食高脂饲料。将GPs溶于0.3%羧甲基纤维素钠(CMC-Na)溶液中,用灌胃方式给药。Control组和model组灌0.3%CMC-Na(1mL/100 g),GPs组灌GPs 160 mg·kg^(-1)·d^(-1),simvastatin组灌辛伐他汀5mg·kg^(-1)·d^(-1),combined组灌两者联合剂量。实验8周后,处死大鼠。取腹腔动脉血,测定血清总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)和低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C);称大鼠体重及肝脏组织湿重,测定肝指数;取肝脏用4%多聚甲醛固定,石蜡包埋,HE染色作常规形态学检测;另取肝脏提取总RNA,real-time PCR测定PCSK9和低密度脂蛋白受体(LDLR)的mRNA表达;提取肝脏总蛋白,Western blot测定PCSK9和LDLR蛋白的表达。结果:成功建立高脂血症大鼠模型。与model组大鼠比较,simvastatin组、GPs组以及combined组TC、TG和LDL-C水平均明显下降(P<0.05),各组HDLC水平有不同程度的上升(P<0.05)。与model组大鼠比较,simvastatin组、GPs组以及combined组肝指数均明显下降(P<0.05)。肝组织病理结果显示,高脂血症性大鼠出现脂肪肝病变;Simvastatin组、GPs组以及combined组大鼠肝细胞脂肪变性程度有不同程度减轻,尤以combined组效果显著。与model组比较,simvastatin组PCSK9和LDLR的mRNA表达均明显升高,GPs组以及combined组PCSK9的mRNA表达明显降低(P<0.05),GPs组LDLR的mRNA表达变化不明显,combined组LDLR的mRNA表达明显升高(P<0.05)。与model组比较,Simvastatin组PCSK9和LDLR的蛋白表达均明显升高;GPs组和combined组的PCSK9蛋白表达明显降低,LDLR蛋白表达明显升高(P<0.05)。结论:GPs能抑制肝脏PCSK9表达,增加LDLR表达量;与辛伐他汀联用可增强其降血脂和减轻肝脏脂肪病变的效果。 展开更多
关键词 绞股蓝总苷 高脂血症 PCSK9基因 低密度脂蛋白受体 辛伐他汀
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金钗石斛多糖对局灶性脑缺血-再灌注大鼠的作用 被引量:15
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作者 詹剑 李小琼 郝仁方 《中国脑血管病杂志》 CAS CSCD 北大核心 2017年第1期25-31,共7页
目的探讨金钗石斛多糖对脑缺血-再灌注大鼠核因子κB(NF-κB)信号通路的调控机制。方法将90只SD大鼠按随机数字表法随机分为6组,分别为假手术组、模型组和金钗石斛多糖低剂量组(DL,50 mg/kg)、中剂量组(DM,100 mg/kg)、高剂量组(DH,200 ... 目的探讨金钗石斛多糖对脑缺血-再灌注大鼠核因子κB(NF-κB)信号通路的调控机制。方法将90只SD大鼠按随机数字表法随机分为6组,分别为假手术组、模型组和金钗石斛多糖低剂量组(DL,50 mg/kg)、中剂量组(DM,100 mg/kg)、高剂量组(DH,200 mg/kg)以及尼莫地平组(10 mg/kg),每组15只,再按随机数字表法每组随机取5只供相应指标检测。采用大脑中动脉阻塞法建立SD大鼠局灶性脑缺血-再灌注模型,观察金钗石斛多糖对大鼠神经功能缺损(Bederson行为学评分)、脑含水量和脑梗死体积的改善作用。采用酶联免疫吸附法检测脑组织促炎因子肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和白细胞介素-1β(IL-1β)水平,采用实时荧光定量多聚酶链反应(RT-q PCR)检测小胶质细胞标记物BCL-2相关蛋白A1α(A1)和星形胶质细胞标记物胶质细胞纤维酸性蛋白(GFAP)mRNA转录水平,蛋白免疫印迹法检测NF-κB信号通路磷酸化抑制蛋白(IκBα)和胞核p65蛋白的表达水平。多组间计量资料比较采用单因素方差分析。结果 (1)6组间大鼠神经功能缺损评分、脑含水量、脑梗死体积、脑组织TNF-α和IL-1β水平、A1和GFAP mRNA转录水平以及磷酸化IκBα蛋白和胞核p65蛋白水平差异均有统计学意义(F值分别为22.24、8.699、33.89、19.26、27.53、109.5、15.28、66.86、41.63,均P<0.01)。(2)模型组大鼠神经功能缺损评分、脑含水量、脑梗死体积分别为(2.8±0.3)分、(86.1±3.8)%、(31.0±4.5)%,均明显高于假手术组(均P<0.01);脑组织TNF-α和IL-1β水平、A1和GFAP mRNA转录水平以及磷酸化IκBα蛋白和胞核p65蛋白水平较假手术组均明显增高,差异均有统计学意义(均P<0.01)。(3)DH组前三项分别为(1.5±0.5)分、(72.9±5.4)%、(17.5±4.1)%,与模型组比较(包括脑组织TNF-α和IL-1β水平、A1和GFAP mRNA转录水平以及磷酸化IκBα蛋白和胞核p65蛋白水平),差异均有统计学意义(均P<0.05);与尼莫地平组比较,各指标差异均无统计学意义(均P>0.05);与假手术组比较,除脑含水量、IκBα、胞核p65蛋白水平差异无统计学意义外(P>0.05),其余指标差异均有统计学意义(均P<0.05)。(4)DM组上述指标与模型组比较,仅IL-1β水平和磷酸化IκBα蛋白水平显著减少,其余指标差异无统计学意义(均P>0.05);与假手术组相比,各指标差异均有统计学意义(均P<0.01)。(5)DL组上述指标与模型组相比,差异均无统计学意义(均P>0.05);与假手术组相比,各指标差异均有统计学意义(均P<0.01)。结论高剂量金钗石斛多糖能减轻局灶性脑缺血-再灌注大鼠脑损伤,作用机制与抑制早期NF-κB信号通路激活有关。中、低剂量金钗石斛多糖减轻局灶脑缺血-再灌注炎性脑损伤的作用不明显。 展开更多
关键词 脑缺血-再灌注损伤 炎性反应 金钗石斛多糖 大鼠
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人蔗糖酶蛋白在大肠杆菌的诱导表达与纯化 被引量:3
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作者 邵敏 王新颖 +4 位作者 张青峰 牛宪立 王燕 周鹤峰 葛正龙 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2015年第12期1629-1632,共4页
目的构建人蔗糖酶(h SUC)基因原核表达载体,诱导表达获得融合蛋白。方法采用反转录PCR法扩增得到h SUC基因片段,并将其克隆到表达载体p ET-28a(+)中,用异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)诱导在大肠杆菌中表达,采用Ni柱亲和层析纯化重组蛋白,对... 目的构建人蔗糖酶(h SUC)基因原核表达载体,诱导表达获得融合蛋白。方法采用反转录PCR法扩增得到h SUC基因片段,并将其克隆到表达载体p ET-28a(+)中,用异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)诱导在大肠杆菌中表达,采用Ni柱亲和层析纯化重组蛋白,对表达蛋白进行SDS-PAGE和Western blot鉴定。结果克隆得到1482 bp目的基因,酶切和测序证实h SUC基因片段成功插入到p ET-28a(+)表达载体。表达的融合蛋白质相对分子质量(Mr)为61 240,Western blot结果显示融合蛋白可以与h SUC抗体特异性结合。结论成功在大肠杆菌中表达和纯化h SUC融合蛋白。 展开更多
关键词 蔗糖酶 Α-葡萄糖苷酶 大肠杆菌 基因表达 蛋白纯化
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罗红霉素对人牙周膜成纤维细胞TNF-α、IL-6释放的影响 被引量:3
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作者 范永祥 刘琪 +1 位作者 张绍伟 葛正龙 《实用口腔医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第1期115-117,共3页
目的:探讨罗红霉素对脂多糖诱导的人牙周膜成纤维细胞肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)释放的影响。方法:采用ELISA方法,检测在不同剂量的罗红霉素作用下,脂多糖诱导的人牙周膜细胞中IL-6、TNF-α释放的变化。结果... 目的:探讨罗红霉素对脂多糖诱导的人牙周膜成纤维细胞肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)释放的影响。方法:采用ELISA方法,检测在不同剂量的罗红霉素作用下,脂多糖诱导的人牙周膜细胞中IL-6、TNF-α释放的变化。结果:LPS刺激后人牙周膜细胞TNF-α的释放显著高于正常对照组(360pg/ml vs 80pg/ml,3 h,P〈0.05)。与L组相比,罗红霉素组(20μg/ml)TNF-α水平12h显著降低,3—6h与L组无明显差异,而12h(520pg/ml vs 710pg/ml)、24h(220pg/ml vs 680pg/ml)显著降低(P〈0.05)。LPS组IL-6水平显著高于正常对照组(360pg/ml vs 105pg/ml,P〈0.05),罗红霉素组(20μg/ml)IL-6分泌量在6h(420pg/ml vs 670pg/ml)、12h(590pg/ml vs 810pg/ml)和24h(340pg/ml vs 630pg/ml)较L组均显著降低(P〈0.05)。结论:罗红霉素能显著抑制LPS刺激后人牙周膜细胞IL-6、TNF-α的释放。 展开更多
关键词 牙周炎 罗红霉素 内毒素 牙周膜成纤维细胞 肿瘤坏死因子-Α 白细胞介素-15
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胆固醇通过NADPH氧化酶诱导ROS升高,NF-κB活化进而导致内皮细胞损伤 被引量:16
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作者 权媛 钱民章 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第8期1521-1526,共6页
目的:研究胆固醇对人脐静脉内皮细胞(HUVECs)的损伤是否与细胞内活性氧(ROS)升高有关,明确此种情况下ROS的主要来源。方法:体外培养HUVECs-12,设置正常对照组、溶媒(无水乙醇)组、胆固醇组、N-乙酰半胱氨酸(NAC)作用1 h后再加入胆固醇作... 目的:研究胆固醇对人脐静脉内皮细胞(HUVECs)的损伤是否与细胞内活性氧(ROS)升高有关,明确此种情况下ROS的主要来源。方法:体外培养HUVECs-12,设置正常对照组、溶媒(无水乙醇)组、胆固醇组、N-乙酰半胱氨酸(NAC)作用1 h后再加入胆固醇作用48 h组。以DCFH-DA为荧光探针,流式细胞术检测细胞内ROS水平;免疫细胞化学方法检测细胞内核因子-κB亚单位p65核移位阳性细胞数;分别用比色法、硝酸酶还原法及ELISA检测细胞培养液中乳酸脱氢酶(LDH)活性、一氧化氮(NO)及单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)浓度。并观察加入产生ROS的4种酶抑制剂二联苯碘(DPI)、鱼藤酮(rotenone)、奥苷嘌醇(oxypurinol)、N-硝基-L-精氨酸甲酯(L-NAME)后细胞内ROS水平。结果:(1)与正常对照组比较,50 mg/L胆固醇能升高细胞内ROS(P<0.01),并能激活细胞内NF-κB p65的核移位(P<0.01),升高细胞培养液中LDH活性、MCP-1浓度,降低NO浓度(P<0.01);(2)与胆固醇作用组相比,NADPH氧化酶抑制剂DPI预作用组细胞内ROS明显降低(P<0.01),retenone也可以部分抑制ROS的产生(P<0.05),oxypurinol和L-NAME预作用则几乎不影响胆固醇所致的ROS生成增加(P>0.05)。结论:一定浓度的游离胆固醇能引起内皮细胞内ROS升高,激活细胞内NF-κB,进而导致内皮细胞损伤;此情况下细胞内产生的ROS主要来源于NADPH氧化酶。 展开更多
关键词 胆固醇 人脐静脉内皮细胞 活性氧 NADPH氧化酶
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促红细胞生成素对脂肪肝大鼠模型肝脏缺血再灌注损伤凋亡基因bcl-2、bax mRNA表达的影响 被引量:3
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作者 李阳 舒德军 +3 位作者 彭慈军 冯赞杰 梅永 熊坤 《临床肝胆病杂志》 CAS 北大核心 2019年第1期157-160,共4页
目的探讨促红细胞生成素(EPO)对脂肪肝大鼠模型肝脏缺血再灌注损伤凋亡基因bcl-2、bax mRNA表达的影响。方法成年雄性SD大鼠100只,高脂饮食饲料喂养12周。造模成功后,软件法随机将脂肪肝大鼠平均分为5组,每组18只:假手术组(SHAM)组、缺... 目的探讨促红细胞生成素(EPO)对脂肪肝大鼠模型肝脏缺血再灌注损伤凋亡基因bcl-2、bax mRNA表达的影响。方法成年雄性SD大鼠100只,高脂饮食饲料喂养12周。造模成功后,软件法随机将脂肪肝大鼠平均分为5组,每组18只:假手术组(SHAM)组、缺血再灌注(IR)组、IR+EPO低剂量组(EPO-1组)、IR+EPO中剂量组(EPO-2组)、IR+EPO高剂量组(EPO-3组)。IR模型通过术中完全阻断肝中叶及左肝叶血流建立,造成70%大鼠肝脏缺血,缺血时间控制在80 min。各组于缺血80 min再灌注1、3、6 h三时相处死,RT-PCR法检测并比较肝组织中bcl-2、bax mRNA的表达水平。计量资料多组间比较采用单因素方差分析,进一步两两比较采用LSD-t法。结果与IR组相比,EPO-1、EPO-2、EPO-3组肝脏中bcl-2 mRNA表达水平在各时相(1、3、6 h)的表达水平均明显升高(P值均<0. 05); bax mRNA的表达水平均明显下降(P值均<0. 05)。SHAM组、EPO组肝组织中bcl-2/bax mRNA的比值在各时相(1、3、6 h)均显著大于IR组(P值均<0. 05)。结论 EPO对脂肪肝大鼠肝脏缺血再灌注损伤具有保护作用。其可能是通过促进抗凋亡基因bcl-2 mRNA的表达和抑制促凋亡基因bax mRNA的表达实现。高剂量EPO的抗细胞凋亡作用效果优于中低剂量。 展开更多
关键词 脂肪肝 促红细胞生成素 再灌注损伤 细胞凋亡 大鼠 Sprague-Dawley
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人白介素-12转基因马铃薯中hIL-12的表达 被引量:7
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作者 陈佳瑜 罗果 葛正龙 《安徽农业科学》 CAS 北大核心 2010年第15期7767-7768,共2页
[目的]研究人白介素-12转基因马铃薯中hIL-12的表达。[方法]采用ELISA和WesternBlot,检测转基因马铃薯中hIL-12的表达情况。[结果]转基因马铃薯叶与块茎中均能被hIL-12p70二聚体特异性的抗体识别的蛋白表达,与野生对照组相比均有0.01水... [目的]研究人白介素-12转基因马铃薯中hIL-12的表达。[方法]采用ELISA和WesternBlot,检测转基因马铃薯中hIL-12的表达情况。[结果]转基因马铃薯叶与块茎中均能被hIL-12p70二聚体特异性的抗体识别的蛋白表达,与野生对照组相比均有0.01水平显著差异。WesternBlot分析结果显示,在40kD处有特异性的蛋白条带出现。[结论]所建立的人白介素-12转基因马铃薯表达体系能正确、有效表达hIL-12二聚体。 展开更多
关键词 人白介素-12 表达 马铃薯 转基因植物
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