丹参素衍生物对斑马鱼促血管新生作用的研究 被引量：13

1

作者 崔国祯 徐燕玲 +3 位作者 孙安露 单璐琛 王玉强 李铭源 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第6期795-800,共6页

目的观察丹参素衍生物(ADTM)对斑马鱼胚胎血管新生的影响,并探讨其可能作用的信号通路。方法选择正常血管转基因斑马鱼和血管生长因子受体酪氨酸激酶抑制剂(VRI)诱导血管损伤转基因斑马鱼两种模型,分别给予50、100、200μmol·L^(-1... 目的观察丹参素衍生物(ADTM)对斑马鱼胚胎血管新生的影响,并探讨其可能作用的信号通路。方法选择正常血管转基因斑马鱼和血管生长因子受体酪氨酸激酶抑制剂(VRI)诱导血管损伤转基因斑马鱼两种模型,分别给予50、100、200μmol·L^(-1)的ADTM干预处理,以0.1%的DMSO为空白对照,分别观察不同浓度的ADTM对斑马鱼肠下静脉血管(SIVs)的直径和内皮细胞数以及节间血管(ISVs)生长的影响,并对VRI和ADTM处理后的斑马鱼做转录组学研究。用荧光定量PCR的方法对转录组测序的4个基因进行验证。结果对于正常转基因斑马鱼模型,ADTM处理后,斑马鱼的SIVs血管直径明显增加,内皮细胞的数目轻微增加;在VRI损伤模型中,ADTM表现出修复ISVs损伤的效果。转录组分析表明,19个明显变化的基因富集在胰岛素信号通路。荧光定量PCR的结果与转录组中获得的序列吻合。结论对于正常和血管损伤的斑马鱼模型,ADTM均有促血管新生的效果,其作用机制可能与胰岛素信号通路的激活有关。 展开更多

关键词 丹参素衍生物 血管新生 血管修复 斑马鱼 转录组 胰岛素信号通路

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珠海三灶半岛野生药用植物资源初步调查 被引量：3

2

作者 唐历波 吴薄译 《广东农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2010年第12期46-48,共3页

通过对收集的标本进行整理、野外线路调查及药农访谈相结合等方法对三灶半岛野生药用植物进行初步调查,结果表明,三灶半岛野生药用植物资源中有被子植物77科227种、真菌4科6种、蕨类植物12科19种、裸子植物4科5种。并对该地区野生药用... 通过对收集的标本进行整理、野外线路调查及药农访谈相结合等方法对三灶半岛野生药用植物进行初步调查,结果表明,三灶半岛野生药用植物资源中有被子植物77科227种、真菌4科6种、蕨类植物12科19种、裸子植物4科5种。并对该地区野生药用植物资源可持续利用进行了探讨。 展开更多

关键词 野生药用植物 资源调查 珠海三灶半岛

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从转基因马铃薯中纯化的人白细胞介素-12的生物学活性分析 被引量：1

3

作者 黄进 罗果 葛正龙 《安徽农业科学》 CAS 北大核心 2009年第16期7334-7334,7347,共2页

[目的]研究从转人白细胞介素-12(hIL-12)基因马铃薯中纯化的hIL-12的生物学活性。[方法]MTT法检测纯化的hIL-12体外抗肿瘤作用。[结果]纯化的hIL-12在体外对NK敏感肿瘤细胞K562有杀伤作用,而野生对照组无作用。[结论]试验中从转hIL-12... [目的]研究从转人白细胞介素-12(hIL-12)基因马铃薯中纯化的hIL-12的生物学活性。[方法]MTT法检测纯化的hIL-12体外抗肿瘤作用。[结果]纯化的hIL-12在体外对NK敏感肿瘤细胞K562有杀伤作用,而野生对照组无作用。[结论]试验中从转hIL-12基因马铃薯中纯化的hIL-12具有生物学活性。 展开更多

关键词 人白细胞介素-12 纯化 生物学活性 转基因马铃薯

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转基因马铃薯中纯化人白介素-12的生物学活性分析

4

作者 罗果 黄进 葛正龙 《安徽农业科学》 CAS 北大核心 2010年第3期1173-1176,共4页

分析了转基因马铃薯中纯化人白介素-12(hIL-12)的生物学活性。结果表明,hIL-12纯化品在体外能刺激植物凝集素(PHA)活化的外周血单个核细胞(PBMC)增殖;hIL-12纯化品对人肝癌细胞HepG2.2.15的生长具有抑制作用,且其抑制效果随hIL-12浓度... 分析了转基因马铃薯中纯化人白介素-12(hIL-12)的生物学活性。结果表明,hIL-12纯化品在体外能刺激植物凝集素(PHA)活化的外周血单个核细胞(PBMC)增殖;hIL-12纯化品对人肝癌细胞HepG2.2.15的生长具有抑制作用,且其抑制效果随hIL-12浓度的升高而增强;hIL-12纯化品在体外对乙肝病毒DNA的复制和表面抗原、e抗原的分泌产生抑制作用。 展开更多

关键词 转基因马铃薯 人白介素-12 生物活性

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黄芪种子rRNA基因间隔区序列测定及分析

5

作者 牛宪立 吴群 姬可平 《安徽农业科学》 CAS 北大核心 2010年第24期13162-13163,共2页

[目的]通过对黄芪种子进行rRNA基因内转录间隔区碱基序列的测定,建立其分子水平的鉴定标记。[方法]以改良CTAB法提取黄芪种子DNA,利用合成的通用引物对其rRNA基因内转录间隔区进行nPCR扩增,将扩增产物进行碱基序列测定。[结果]琼脂糖凝... [目的]通过对黄芪种子进行rRNA基因内转录间隔区碱基序列的测定,建立其分子水平的鉴定标记。[方法]以改良CTAB法提取黄芪种子DNA,利用合成的通用引物对其rRNA基因内转录间隔区进行nPCR扩增,将扩增产物进行碱基序列测定。[结果]琼脂糖凝胶电泳证实黄芪种子中rRNA基因内转录间隔区PCR扩增产物存在,经测序后得到了黄芪种子rRNA基因内转录间隔区的碱基序列。[结论]rRNA基因内转录间隔区碱基测序技术可作为分子水平鉴定植物性中药材的又一有效途径。 展开更多

关键词 黄芪 RRNA基因 nPCR 测序 分子鉴定

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靶向ezrin增强子关键区的CRISPR/Cas9载体的构建 被引量：5

6

作者 郭晓龙 张青峰 +3 位作者 野庆松 莫镇涛 李文娜 高书颖 《生物学杂志》 CAS CSCD 2017年第6期19-22,共4页

构建靶向人ezrin增强子关键区的CRISPR/Cas9载体并检测其基因敲除功能。设计2个gRNA,分别靶向人ezrin增强子关键区的上、下游。合成gRNA寡核苷酸序列,连接至质粒p X459构建重组质粒p X459-sgRNA-EL和p X459-sgRNA-ER。将鉴定正确的CRISP... 构建靶向人ezrin增强子关键区的CRISPR/Cas9载体并检测其基因敲除功能。设计2个gRNA,分别靶向人ezrin增强子关键区的上、下游。合成gRNA寡核苷酸序列,连接至质粒p X459构建重组质粒p X459-sgRNA-EL和p X459-sgRNA-ER。将鉴定正确的CRISPR/Cas9重组质粒共转染至食管癌EC109细胞中,提取细胞基因组DNA,针对gRNA靶位点两侧进行PCR扩增和亚克隆测序分析。经限制性内切酶酶切和测序鉴定表明,CRISPR/Cas9重组质粒构建正确。在共转染重组质粒的细胞基因组DNA中检测到ezrin增强子关键区的缺失。成功构建了靶向人ezrin增强子关键区的CRISPR/Cas9载体,能够实现目标序列的定向敲除。 展开更多

关键词 靶向敲除 ezrin增强子 CRISPR/Cas9

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根癌农杆菌介导的马铃薯茎段遗传转化条件的研究 被引量：16

7

作者 周鹤峰 邵敏 葛正龙 《河南农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第3期345-349,共5页

以马铃薯茎段作为受体转化材料,通过根癌农杆菌介导的遗传转化方法,对影响马铃薯遗传转化的多种因素(抗生素质量浓度、农杆菌质量浓度、共培养时间等)进行研究.结果表明,卡那霉素(kanamycin,Kan)梯度在抗性愈伤组织诱导、芽分化过程中以... 以马铃薯茎段作为受体转化材料,通过根癌农杆菌介导的遗传转化方法,对影响马铃薯遗传转化的多种因素(抗生素质量浓度、农杆菌质量浓度、共培养时间等)进行研究.结果表明,卡那霉素(kanamycin,Kan)梯度在抗性愈伤组织诱导、芽分化过程中以100 mg.L-1为宜,但在生根过程中以50 mg.L-1为宜,菌液质量浓度以OD600为0.5,共培养时间为3 d,抑菌剂的选择以羧苄霉素(carbenicillin,Cb)更适合.对转基因植株进行PCR检测表明,目的基因已整合到马铃薯基因组中. 展开更多

关键词 马铃薯 遗传转化 根癌农杆菌 茎段

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抗人蔗糖酶卵黄抗体的制备及其稳定性和体外活性研究 被引量：4

8

作者 邵敏 王新颖 +5 位作者 卢毓璁 王敏 冯昆 魏妮娜 杜凤霞 周鹤峰 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第12期1785-1789,共5页

目的：制备抗人蔗糖酶（Sucrase,SUC）卵黄抗体（egg yolk immunoglobulin Y,Ig Y）并对其稳定性、体外活性进行研究。方法：采用人SUC蛋白为抗原,免疫海兰灰蛋鸡,水稀释和盐析法提取纯化Ig Y;间接ELISA法监测抗体效价变化并评价其稳定... 目的：制备抗人蔗糖酶（Sucrase,SUC）卵黄抗体（egg yolk immunoglobulin Y,Ig Y）并对其稳定性、体外活性进行研究。方法：采用人SUC蛋白为抗原,免疫海兰灰蛋鸡,水稀释和盐析法提取纯化Ig Y;间接ELISA法监测抗体效价变化并评价其稳定性;SDS-PAGE和Western blot分析Ig Y的纯度和特异性;PNPG法测Ig Y对α-葡萄糖苷酶的体外抑制效果。结果：初次免疫10 d后检测到Ig Y,40 d后效价最高达到1∶12 800;提取的Ig Y重链和轻链分别在65 k D和25 k D处,且能够与抗原蛋白特异性结合;29~69℃范围内水浴15 min和p H 4~7之间37℃水浴4 h,抗体效价无变化;胰蛋白酶与胃蛋白酶作用Ig Y2 h,抗体效价降至一半,延长作用时间,Ig Y对胃蛋白酶耐受力较胰蛋白酶耐受力更强;Ig Y对α-葡萄糖苷酶具有一定的抑制作用,呈现剂量相关性,半抑制浓度（IC50）值为0.540 mg/ml。结论：抗人蔗糖酶卵黄抗体（S-Ig Y）的成功制备为后续用于2型糖尿病大鼠模型体内实验研究奠定基础。 展开更多

关键词 蔗糖酶 鸡 卵黄抗体 稳定性

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阪崎肠杆菌胶体金试纸条的制备及初步应用 被引量：6

9

作者 周鹤峰 邵敏 +1 位作者 李长福 葛正龙 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第2期172-176,共5页

制备阪崎肠杆菌(Enterobacter sakazakii,ES)胶体金快速检测试纸并对其性能进行评价。通过柠檬酸三钠法制备胶体金颗粒,标记抗阪崎肠杆菌特异性的单克隆抗体,采用双抗夹心法,将标记的胶体金复合物喷涂于试纸的结合垫,另一单抗和二抗(羊... 制备阪崎肠杆菌(Enterobacter sakazakii,ES)胶体金快速检测试纸并对其性能进行评价。通过柠檬酸三钠法制备胶体金颗粒,标记抗阪崎肠杆菌特异性的单克隆抗体,采用双抗夹心法,将标记的胶体金复合物喷涂于试纸的结合垫,另一单抗和二抗(羊抗鼠IgG抗体)分别包被在硝酸纤维素膜的检测线(T)和控制线(C)上,制备出检测阪崎肠杆菌胶体金试纸条,进行敏感性、特异性、稳定性、重复性试验,借助于简单的增菌过程,在6 h内即可检测出样品中阪崎肠杆菌的含量,灵敏度达到1×104CFU/mL,与常见的食源性致病菌无交叉反应。结果显示该试纸具有简单、灵敏、特异、稳定、快速等优点,可用于ES的检测。 展开更多

关键词 阪崎肠杆菌 单克隆抗体 胶体金 快速检测

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人蔗糖酶蛋白在大肠杆菌的诱导表达与纯化 被引量：3

10

作者 邵敏 王新颖 +4 位作者 张青峰 牛宪立 王燕 周鹤峰 葛正龙 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2015年第12期1629-1632,共4页

目的构建人蔗糖酶(h SUC)基因原核表达载体,诱导表达获得融合蛋白。方法采用反转录PCR法扩增得到h SUC基因片段,并将其克隆到表达载体p ET-28a(+)中,用异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)诱导在大肠杆菌中表达,采用Ni柱亲和层析纯化重组蛋白,对... 目的构建人蔗糖酶(h SUC)基因原核表达载体,诱导表达获得融合蛋白。方法采用反转录PCR法扩增得到h SUC基因片段,并将其克隆到表达载体p ET-28a(+)中,用异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)诱导在大肠杆菌中表达,采用Ni柱亲和层析纯化重组蛋白,对表达蛋白进行SDS-PAGE和Western blot鉴定。结果克隆得到1482 bp目的基因,酶切和测序证实h SUC基因片段成功插入到p ET-28a(+)表达载体。表达的融合蛋白质相对分子质量(Mr)为61 240,Western blot结果显示融合蛋白可以与h SUC抗体特异性结合。结论成功在大肠杆菌中表达和纯化h SUC融合蛋白。 展开更多

关键词 蔗糖酶 Α-葡萄糖苷酶 大肠杆菌 基因表达 蛋白纯化

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超声波法提取谷精草中总黄酮的条件优化 被引量：5

11

作者 冯丽娟 陈芳 +2 位作者 孙智勇 张青峰 王文君 《江西农业学报》 CAS 2014年第6期84-86,共3页

以提取的总黄酮含量为考察指标,采用UV分光光度法测定其含量,通过正交试验考察乙醇浓度,超声时间及超声温度对提取率的影响,以得到最佳的提取条件。结果表明:各因素的影响程度为乙醇浓度>超声时间>超声温度,其中乙醇浓度和超声时... 以提取的总黄酮含量为考察指标,采用UV分光光度法测定其含量,通过正交试验考察乙醇浓度,超声时间及超声温度对提取率的影响,以得到最佳的提取条件。结果表明:各因素的影响程度为乙醇浓度>超声时间>超声温度,其中乙醇浓度和超声时间对提取率的影响最为显著,超声温度的影响不显著;最佳提取条件为:乙醇浓度为60%,超声温度为60℃,超声时间25 min;平均提取率为25.0 mg/g,RSD为0.4%。 展开更多

关键词 谷精草 总黄酮 超声波法 正交试验

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卵黄抗体在国内外医药方面的研究现状 被引量：5

12

作者 王新颖 周鹤峰 邵敏 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第2期179-182,共4页

本文阐述卵黄抗体的优势性质和结构特点,概述卵黄抗体在抗人兽共患病、诊断应用、抗蛇毒类生物制品和抗生育制品等方面的研制与应用。

关键词 卵黄抗体 优势性质 人畜共患病 生物制品

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基于易错PCR技术定向进化枯草芽孢杆菌β-葡聚糖酶 被引量：3

13

作者 邵敏 李长福 +1 位作者 葛正龙 周鹤峰 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第12期141-145,共5页

利用易错PCR技术对来自枯草芽孢杆菌的β-葡聚糖酶基因(bgls)进行改造,并对野生酶和突变酶的酶学性质进行研究。以枯草芽孢杆菌基因组DNA为模板,通过易错PCR技术得到突变基因产物,将其重组于表达载体pET32a(+),构建β-葡聚糖酶基因的突... 利用易错PCR技术对来自枯草芽孢杆菌的β-葡聚糖酶基因(bgls)进行改造,并对野生酶和突变酶的酶学性质进行研究。以枯草芽孢杆菌基因组DNA为模板,通过易错PCR技术得到突变基因产物,将其重组于表达载体pET32a(+),构建β-葡聚糖酶基因的突变体文库,通过刚果红平板染色法进行高通量筛选,最终获得两株突变酶,其最适作用温度比野生酶都提高了15℃,最适pH与野生酶基本相同,野生酶酶活力为84.2 U/mL,突变酶酶活力分别为247.3 U/mL和125.1 U/mL,是野生酶酶活的2.9倍和1.5倍。试验获得了具有耐高温高酶活的β-葡聚糖酶,为β-葡聚糖酶的工业化应用奠定基础。 展开更多

关键词 枯草芽孢杆菌 Β-葡聚糖酶 易错PCR 定向进化

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阪崎肠杆菌单克隆抗体的制备与特性鉴定 被引量：3

14

作者 周鹤峰 邵敏 +1 位作者 于立强 葛正龙 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第9期817-820,共4页

目的:制备抗阪崎肠杆菌的单克隆抗体并对其生物学特性进行鉴定。方法:采用灭活的阪崎肠杆菌菌体为抗原,免疫BALB/c小鼠,取血清效价高的小鼠脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞进行融合,间接ELISA法筛选阳性杂交瘤细胞,mAb亚类检测试剂盒鉴定单克... 目的:制备抗阪崎肠杆菌的单克隆抗体并对其生物学特性进行鉴定。方法:采用灭活的阪崎肠杆菌菌体为抗原,免疫BALB/c小鼠,取血清效价高的小鼠脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞进行融合,间接ELISA法筛选阳性杂交瘤细胞,mAb亚类检测试剂盒鉴定单克隆抗体的亚型,通过Western blot和间接ELISA法鉴定该单克隆抗体的特性、效价及mAb相对亲和力。结果:获得2株能稳定分泌抗阪崎肠杆菌mAb的杂交瘤细胞株,分别命名为1H7、2B12,抗体Ig亚类分别为IgG1和IgG2b;交叉反应显示单抗具有良好的特异性;ELISA分析表明制备的单抗效价在1×107～2×107,相对亲和常数达109L/mol,染色体鉴定分别为104和106条,符合杂交瘤细胞的特性。结论:抗阪崎肠杆菌单克隆抗体的成功制备为其快速检测方法的建立奠定了基础。 展开更多

关键词 阪崎肠杆菌 单克隆抗体 杂交瘤 交叉反应

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霉菌检测培养基改良实验研究 被引量：3

15

作者 邵敏 赵然 周鹤峰 《食品工业科技》 CAS CSCD 北大核心 2010年第2期331-333,共3页

在国标法GB/T4789.15-2003孟加拉红培养基中分别添加不同浓度的葡萄糖、牛肉膏、酵母浸膏、磷酸二氢钾、吐温20、氯化钠,对黑曲霉和不同种类的食品进行霉菌总数的测定。结果表明,含2.0%的葡萄糖、0.15%的吐温20和0.25%的磷酸二氢钾的改... 在国标法GB/T4789.15-2003孟加拉红培养基中分别添加不同浓度的葡萄糖、牛肉膏、酵母浸膏、磷酸二氢钾、吐温20、氯化钠,对黑曲霉和不同种类的食品进行霉菌总数的测定。结果表明,含2.0%的葡萄糖、0.15%的吐温20和0.25%的磷酸二氢钾的改良孟加拉红培养基对霉菌的检出率均高于国标法孟加拉红培养基,用改良孟加拉红培养基对不同食品中霉菌进行检测,其检出率较国标法孟加拉红培养基平均高出59.64%。改良孟加拉红培养基能提高食品中霉菌的检出率。 展开更多

关键词 培养基 霉菌 检出率

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蓝树莓叶与黄树莓叶黄酮类成分提取工艺 被引量：2

16

作者 张青峰 蓝燕飞 冯丽娟 《广东农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2012年第12期103-105,共3页

利用微波萃取-醇提取法提取蓝树莓叶与黄树莓叶总黄酮,比较蓝树莓叶与黄树莓叶中总黄酮含量。通过正交试验确定最佳提取条件,结果表明,乙醇浓度是影响提取率的主要因素,微波强度与提取时间影响较小,固液比对提取率影响最小。微波萃取树... 利用微波萃取-醇提取法提取蓝树莓叶与黄树莓叶总黄酮,比较蓝树莓叶与黄树莓叶中总黄酮含量。通过正交试验确定最佳提取条件,结果表明,乙醇浓度是影响提取率的主要因素,微波强度与提取时间影响较小,固液比对提取率影响最小。微波萃取树莓叶中黄酮类成分的最佳工艺条件为50%乙醇、微波7 min、固液比1∶25、中火微波。蓝树莓叶中的总黄酮含量为14.470%,黄树莓叶中的总黄酮含量为8.265%。 展开更多

关键词 树莓叶 总黄酮 微波萃取法

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抗人异麦芽糖酶卵黄抗体的研制及活性测定 被引量：1

17

作者 王新颖 王丹 +3 位作者 冯昆 葛正龙 周鹤峰 邵敏 《医学研究生学报》 CAS 北大核心 2018年第2期137-141,共5页

目的抗体药物是目前生物医药的研究热点问题之一。文章旨在研制抗人异麦芽糖酶(hISO)卵黄抗体(IIgY)并检测其生物学活性。方法将hISO重组蛋白作为抗原与弗式佐剂充分乳化后免疫蛋鸡,水稀释-硫酸钠提取法提取抗人I-IgY,分别通过SDS-PAGE... 目的抗体药物是目前生物医药的研究热点问题之一。文章旨在研制抗人异麦芽糖酶(hISO)卵黄抗体(IIgY)并检测其生物学活性。方法将hISO重组蛋白作为抗原与弗式佐剂充分乳化后免疫蛋鸡,水稀释-硫酸钠提取法提取抗人I-IgY,分别通过SDS-PAGE、Western blot和ELISA等实验技术分析该抗体的纯度、特异性、效价和稳定性,PNPG法测定该抗体对α-葡萄糖苷酶的体外抑制效果。结果获得了抗人I-IgY,其效价最高可以达1∶12 800,该抗体可特异性结合hISO重组蛋白,且具有较好的热稳定性、酸碱稳定性及胃蛋白酶抗性。结论成功制备了抗人I-IgY,为后续对2型糖尿病口服降糖药物的研制奠定实验基础。 展开更多

关键词 异麦芽糖酶 卵黄抗体 效价 稳定性 特异性

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高效液相色谱-四通道紫外可见检测法测定五加皮中原儿茶酸含量 被引量：3

18

作者 陈芳 冯丽娟 《安徽农业科学》 CAS 北大核心 2011年第26期15950-15951,共2页

[目的]建立五加皮中原儿茶酸的含量测定方法。[方法]采用高效液相色谱-四通道紫外可见检测法,以ODSC18（柱长250 mm,内径4.6 mm,涂布厚度5μm）为色谱柱,流动相为甲醇∶磷酸二氢钠缓冲溶液（浓度0.1 mol/L）=15∶85,pH=2.5,测定五加皮... [目的]建立五加皮中原儿茶酸的含量测定方法。[方法]采用高效液相色谱-四通道紫外可见检测法,以ODSC18（柱长250 mm,内径4.6 mm,涂布厚度5μm）为色谱柱,流动相为甲醇∶磷酸二氢钠缓冲溶液（浓度0.1 mol/L）=15∶85,pH=2.5,测定五加皮中原儿茶酸的含量。四通道紫外检测的定性检测波长分别为245、260、275、290 nm;定量检测波长为260 nm。[结果]原儿茶酸在0.5~6.0 mg/L范围内线性关系良好（r=0.999 9）,平均回收率为99.87%,RSD为2.11%。[结论]该方法测定结果可靠,稳定易行,重复性好,可用于五加皮中原儿茶酸的含量测定。 展开更多

关键词 高效液相色谱法 四通道紫外可见检测法 五加皮(CORTEX ACAN THOPANACIS) 原儿茶酸

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人白细胞介素-12的纯化及鉴定 被引量：2

19

作者 黄进 罗果 葛正龙 《安徽农业科学》 CAS 北大核心 2009年第14期6353-6355,共3页

[目的]利用人白细胞介素-12(human interleukin 12,hIL-12)转基因马铃薯,探讨hIL-12的纯化条件。[方法]提取转基因马铃薯中的总蛋白,hIL-12的分离纯化步骤包括超滤、MKF-AIW阴离子交换层析、MKF-CIC阳离子交换层析。在阴离子交换层析吸... [目的]利用人白细胞介素-12(human interleukin 12,hIL-12)转基因马铃薯,探讨hIL-12的纯化条件。[方法]提取转基因马铃薯中的总蛋白,hIL-12的分离纯化步骤包括超滤、MKF-AIW阴离子交换层析、MKF-CIC阳离子交换层析。在阴离子交换层析吸附过程中采用试管法选择最佳吸附pH值,选择洗脱过程最佳洗脱pH值;选择阳离子交换层析洗脱过程最佳洗脱pH值;ELISA法测定各纯化阶段收集的上清液或洗脱峰中的hIL-12的含量;非还原SDS-PAGE电泳鉴定蛋白纯度;Western Blot检测纯化的hIL-12。[结果]阴离子交换层析吸附过程最佳吸附pH值为7.5,洗脱过程最佳洗脱pH值为7,阳离子交换层析洗脱过程最佳洗脱pH值为6.5。纯化的hIL-12经非还原SDS-PAGE分析蛋白纯度为91%。Western Blot分析结果表明,在40 kD处有特异的蛋白条带出现。[结论]hIL-12转基因马铃薯经总蛋白提取,超滤,阴离子交换层析,阳离子交换层析纯化,获得了高纯度的hIL-12。 展开更多

关键词 人白细胞介素-12 纯化 转基因马铃薯

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高效液相色谱-四通道紫外可见检测法测定不同产地谷精草中槲皮素含量 被引量：3

20

作者 陈芳 冯丽娟 《安徽农业科学》 CAS 2012年第12期7091-7092,共2页

[目的]建立谷精草中槲皮素含量的测定方法,测定8个产地谷精草中槲皮素的含量。[方法]高效液相色谱-四通道紫外可见检测法,C18为色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm),流动相为无水甲醇-浓度0.6%磷酸(52∶48,V/V)。通过保留时间结合四波长紫... [目的]建立谷精草中槲皮素含量的测定方法,测定8个产地谷精草中槲皮素的含量。[方法]高效液相色谱-四通道紫外可见检测法,C18为色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm),流动相为无水甲醇-浓度0.6%磷酸(52∶48,V/V)。通过保留时间结合四波长紫外光谱定性,定性检测波长为254、360、365和370 nm。选用灵敏度最高的波长254 nm定量。[结果]槲皮素在5～30μg/ml范围内线性关系良好(R=0.999 8),平均回收率99.56%,RSD为2.30%;不同产地谷精草中槲皮素含量范围为29.5～92.5μg/g。[结论]该方法测定结果可靠,稳定易行,重复性好,可用于谷精草中槲皮素的含量测定;不同产地谷精草中槲皮素含量差异较大。 展开更多

关键词 高效液相色谱法 四通道紫外可见 谷精草 槲皮素

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