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hISO基因原核表达载体的构建及其在大肠杆菌中的表达及鉴定
被引量：
2
1
作者
邵敏
王新颖
+3 位作者
刘星
王燕
周鹤峰
葛正龙
《吉林大学学报（医学版）》
CAS
CSCD
北大核心
2016年第1期59-63,共5页
目的:构建原核表达载体pET-28a(+)-hISO,探讨其融合蛋白在大肠杆菌中的稳定表达情况,为后续实验研究奠定基础。方法:以Caco-2细胞的总RNA为模版,采用RT-PCR方法扩增出大小为1 770bp的人异麦芽糖酶(hISO)基因片段,将其插入到pET-28a(+)中...
目的:构建原核表达载体pET-28a(+)-hISO,探讨其融合蛋白在大肠杆菌中的稳定表达情况,为后续实验研究奠定基础。方法:以Caco-2细胞的总RNA为模版,采用RT-PCR方法扩增出大小为1 770bp的人异麦芽糖酶(hISO)基因片段,将其插入到pET-28a(+)中,构建重组载体pET-28a(+)-hISO。经PCR、酶切及测序鉴定后,转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导表达,亲和层析纯化重组蛋白,利用SDS-PAGE电泳、Western blotting对重组蛋白进行分析和鉴定。结果:经PCR、酶切及测序鉴定后,重组质粒pET-28a(+)-hISO构建正确,表达重组蛋白相对分子质量为68 860,将融合蛋白进行纯化,经40和60mmol·L-1咪唑缓冲液洗脱后能够得到浓度和纯度相对较高的蛋白。结论:成功地构建了hISO基因的原核表达载体,并在大肠杆菌中获得了融合蛋白表达。
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关键词
异麦芽糖酶
原核表达
Α-葡萄糖苷酶
大肠杆菌
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题名
hISO基因原核表达载体的构建及其在大肠杆菌中的表达及鉴定
被引量：
2
1
作者
邵敏
王新颖
刘星
王燕
周鹤峰
葛正龙
机构
遵义医学院珠海校区生物化学教研室
遵义
医学院
生物
化学
教研室
出处
《吉林大学学报（医学版）》
CAS
CSCD
北大核心
2016年第1期59-63,共5页
基金
贵州省科技厅社会发展攻关项目资助课题[黔科合SY字(2012)3091)]
遵义医学院青年科研启动基金资助课题(F-501)
文摘
目的:构建原核表达载体pET-28a(+)-hISO,探讨其融合蛋白在大肠杆菌中的稳定表达情况,为后续实验研究奠定基础。方法:以Caco-2细胞的总RNA为模版,采用RT-PCR方法扩增出大小为1 770bp的人异麦芽糖酶(hISO)基因片段,将其插入到pET-28a(+)中,构建重组载体pET-28a(+)-hISO。经PCR、酶切及测序鉴定后,转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导表达,亲和层析纯化重组蛋白,利用SDS-PAGE电泳、Western blotting对重组蛋白进行分析和鉴定。结果:经PCR、酶切及测序鉴定后,重组质粒pET-28a(+)-hISO构建正确,表达重组蛋白相对分子质量为68 860,将融合蛋白进行纯化,经40和60mmol·L-1咪唑缓冲液洗脱后能够得到浓度和纯度相对较高的蛋白。结论:成功地构建了hISO基因的原核表达载体,并在大肠杆菌中获得了融合蛋白表达。
关键词
异麦芽糖酶
原核表达
Α-葡萄糖苷酶
大肠杆菌
Keywords
isomaltasel prokaryotic expressionl a-glucosidase
Escherichia. coli
分类号
Q786 [生物学—分子生物学]
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题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
hISO基因原核表达载体的构建及其在大肠杆菌中的表达及鉴定
邵敏
王新颖
刘星
王燕
周鹤峰
葛正龙
《吉林大学学报（医学版）》
CAS
CSCD
北大核心
2016
2
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