目的:观察MAPK4基因敲除(KO)对小鼠脾脏免疫细胞组成的影响并探讨其意义。方法:利用基因同源重组对小鼠MAPK4基因进行敲除,PCR法鉴定MAPK4^-/-小鼠;Western blot检测小鼠脾脏中MAPK4蛋白表达;计算MAPK4^-/-小鼠脾脏的脏器指数和总细胞数...目的:观察MAPK4基因敲除(KO)对小鼠脾脏免疫细胞组成的影响并探讨其意义。方法:利用基因同源重组对小鼠MAPK4基因进行敲除,PCR法鉴定MAPK4^-/-小鼠;Western blot检测小鼠脾脏中MAPK4蛋白表达;计算MAPK4^-/-小鼠脾脏的脏器指数和总细胞数;HE染色观察脾脏的病理学变化;流式细胞术(FCM)分析小鼠脾脏中CD19^+B细胞和CD3^+T细胞的比例并计算细胞绝对数,并检测CD4^+T和CD8^+T细胞的比例及其活化相关膜分子CD62L和CD69的表达;最后,FCM分析脾脏中固有免疫细胞DC细胞、NK细胞、巨噬细胞和γδT细胞的比例并计算细胞绝对数。结果:与野生型(WT)小鼠相比,MAPK4^-/-小鼠的MAPK4蛋白表达水平明显降低( P <0.05);脏器指数无明显改变( P >0.05),脾脏细胞总数明显降低( P <0.05),脾小结增大,结构紊乱( P <0.05);CD19^+B细胞和CD3 ^+T细胞的细胞绝对数都明显降低( P <0.001);CD4 +T细胞的比例和绝对数均明显减少( P <0.01),同时,CD8 +T细胞的绝对数明显减少( P <0.001);固有免疫细胞中DC细胞、NK细胞、巨噬细胞和γδT细胞的细胞绝对数均明显降低( P <0.001)。结论: MAPK4敲除明显影响小鼠脾脏中免疫细胞的组成,提示其在机体免疫细胞发育和功能中具有重要作用。展开更多
文摘目的:观察MAPK4基因敲除(KO)对小鼠脾脏免疫细胞组成的影响并探讨其意义。方法:利用基因同源重组对小鼠MAPK4基因进行敲除,PCR法鉴定MAPK4^-/-小鼠;Western blot检测小鼠脾脏中MAPK4蛋白表达;计算MAPK4^-/-小鼠脾脏的脏器指数和总细胞数;HE染色观察脾脏的病理学变化;流式细胞术(FCM)分析小鼠脾脏中CD19^+B细胞和CD3^+T细胞的比例并计算细胞绝对数,并检测CD4^+T和CD8^+T细胞的比例及其活化相关膜分子CD62L和CD69的表达;最后,FCM分析脾脏中固有免疫细胞DC细胞、NK细胞、巨噬细胞和γδT细胞的比例并计算细胞绝对数。结果:与野生型(WT)小鼠相比,MAPK4^-/-小鼠的MAPK4蛋白表达水平明显降低( P <0.05);脏器指数无明显改变( P >0.05),脾脏细胞总数明显降低( P <0.05),脾小结增大,结构紊乱( P <0.05);CD19^+B细胞和CD3 ^+T细胞的细胞绝对数都明显降低( P <0.001);CD4 +T细胞的比例和绝对数均明显减少( P <0.01),同时,CD8 +T细胞的绝对数明显减少( P <0.001);固有免疫细胞中DC细胞、NK细胞、巨噬细胞和γδT细胞的细胞绝对数均明显降低( P <0.001)。结论: MAPK4敲除明显影响小鼠脾脏中免疫细胞的组成,提示其在机体免疫细胞发育和功能中具有重要作用。
