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微小RNA-126基因在CD4+T细胞介导小鼠自身免疫性肠炎中的作用 被引量:1
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作者 褚风云 胡燕 +6 位作者 郭萌萌 陈超 赵娟娟 刘云 秦娜琳 郑静 徐林 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第8期767-772,共6页
目的研究微小RNA-126(micro RNA-126,miR-126)基因敲减(knock down,KD)对CD4^+T细胞介导的自身免疫性结肠炎模型的影响并探讨其意义。方法常规利用DSS溶液喂养野生型(WT)和miR-126基因敲减(miR-126KD)小鼠,诱导急性自身免疫性结肠炎模型... 目的研究微小RNA-126(micro RNA-126,miR-126)基因敲减(knock down,KD)对CD4^+T细胞介导的自身免疫性结肠炎模型的影响并探讨其意义。方法常规利用DSS溶液喂养野生型(WT)和miR-126基因敲减(miR-126KD)小鼠,诱导急性自身免疫性结肠炎模型。HE染色观察小鼠结肠组织病理变化;FACS检测CD4^+T细胞的比例变化及其表面活化分子CD62L、CD44的表达;MACS分选出WT和miR-126KD小鼠脾脏中CD4^+CD62L+T细胞,CFSE染色标记后,分别经尾静脉转输给WT小鼠,再诱导自身免疫性结肠炎模型;HE染色观察结肠组织病理变化;FACS检测CFSE阳性CD4^+T细胞表面活化分子CD62L、CD44的表达变化。结果与对照组相比,miR-126KD小鼠肠组织绒毛缺失不完整,黏膜上皮出现较大溃疡,炎性细胞浸润增加;FACS结果显示,miR-126KD组小鼠CD4^+T细胞比例和总数显著上调(P<0.01);且高表达CD44,低表达CD62L;过继转输实验结果显示,miR-126KD小鼠CD4^+T细胞转输组结肠组织损伤加重;同时,CFSE+细胞高表达CD44,低表达CD62L。结论 miR-126基因敲减加重葡聚糖硫酸钠所致肠炎的病变程度。 展开更多
关键词 微小RNA-126 CD4+T细胞 IBD 肠炎模型 活化
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microRNA-7敲减对内毒素诱导小鼠急性肺损伤的影响 被引量:6
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作者 赵娟娟 徐华林 +7 位作者 郭萌萌 陶弋婧 周涯 陈超 秦娜琳 郑静 田丹 徐林 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第9期1257-1261,共5页
目的:观察microRNA-7(miR-7)敲减对内毒素诱导小鼠急性肺损伤的影响并探讨其意义。方法:利用脂多糖(LPS)腹腔注射(10 mg/kg体重)野生型(Wild type,WT)小鼠和miR-7基因敲减(Knockdown,KD)小鼠建立急性肺损伤(Acute lung injury,ALI)模型... 目的:观察microRNA-7(miR-7)敲减对内毒素诱导小鼠急性肺损伤的影响并探讨其意义。方法:利用脂多糖(LPS)腹腔注射(10 mg/kg体重)野生型(Wild type,WT)小鼠和miR-7基因敲减(Knockdown,KD)小鼠建立急性肺损伤(Acute lung injury,ALI)模型;HE染色观察肺组织病理学变化;计算肺泡灌洗液(BAL)中的细胞总数;Real-time PCR检测肺组织炎症相关因子表达变化;流式细胞术(FACS)进一步检测BAL中固有免疫细胞γδT细胞、F4/80巨噬细胞(Macrophages,Mφ)和适应性免疫细胞CD4^+T细胞和CD8^+T细胞的比例和绝对数变化;FACS检测CD4^+T细胞活化相关分子CD62L和CD69的表达水平。结果:相对野生型(Wild type,WT)小鼠,HE染色显示miR-7KD小鼠的肺组织小血管充血和炎性细胞浸润明显减少,病理性损伤明显减轻;Real-time PCR结果显示促炎性细胞因子IL-6的表达水平显著降低(P<0.01),而抗炎性细胞因子IL-4、TGF-β的表达水平明显增加(P<0.05);同时,BAL中总细胞数显著减少(P<0.05);FACS检测进一步显示miR-7KD小鼠的BAL中F4/80^+Mφ细胞的比例及绝对数均明显下调(P<0.05),而γδT细胞的比例上调(P<0.05),但其细胞绝对数无差异(P>0.05);BAL中CD4^+T细胞和CD8^+T细胞的比例及其绝对数均显著降低(P<0.05);最后CD4^+T细胞活化膜分子CD62L的表达水平明显上调(P<0.05),而CD69的表达水平显著下调(P<0.05)。结论:miR-7敲减可减轻ALI模型小鼠的肺部损伤,提示其可能在ALI发生中发挥了重要调控作用。 展开更多
关键词 miR-7基因敲减 急性肺损伤 肺泡灌洗液 免疫细胞
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miR-7敲减CD4+T细胞过继转输对小鼠急性肝损伤模型的影响 被引量:2
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作者 岳东旭 赵娟娟 +6 位作者 陈慧子 丁涛 胡琳 潘飞飞 郭萌萌 陈超 徐林 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2018年第9期1660-1665,共6页
目的:观察过继转输微小RNA-7(microRNA-7,miR-7)敲减(knockdown,KD)CD4^+ T细胞对小鼠急性肝损伤模型的影响,并探讨其意义。方法:利用磁珠分选技术分别获得正常野生型(WT)小鼠和miR-7KD小鼠脾脏中CD4^+ CD62L^+ T细胞;CFSE染色标记后,... 目的:观察过继转输微小RNA-7(microRNA-7,miR-7)敲减(knockdown,KD)CD4^+ T细胞对小鼠急性肝损伤模型的影响,并探讨其意义。方法:利用磁珠分选技术分别获得正常野生型(WT)小鼠和miR-7KD小鼠脾脏中CD4^+ CD62L^+ T细胞;CFSE染色标记后,按每只小鼠2×10~6个细胞,经尾部静脉注射给同系WT小鼠,并利用伴刀豆球蛋白A建立急性肝损伤模型;观察过继转输后2组小鼠肝脏的形态、重量及其重量指数的变化;HE染色观察小鼠肝脏组织的病理学变化;real-time PCR检测小鼠肝脏组织中凋亡相关分子Bax和P53的表达;流式细胞术检测小鼠肝脏组织中CFSE标记的CD4^+ T细胞活化相关膜分子CD62L表达水平以及细胞因子白细胞介素4(IL-4)和干扰素γ(IFN-γ)的表达变化。结果:与对照组相比,过继转输miR-7KD小鼠CD4^+ CD62L^+ T细胞组(miR-7KD转输组)小鼠的肝脏重量明显减轻(P<0.01),但重量指数显著增加(P<0.05);HE染色显示miR-7KD转输组的肝脏细胞损伤增加;real-time PCR结果显示miR-7KD转输组肝脏组织中凋亡相关细胞分子Bax和P53的相对表达水平均明显升高(P<0.05);流式细胞术检测结果进一步显示肝脏组织中的CFSE^+细胞活化相关分子CD62L的表达水平明显降低(P<0.01),细胞因子IFN-γ的表达水平明显增加(P<0.05),而IL-4的表达水平显著降低(P<0.01)。结论:过继转输miR-7敲减CD4^+ T细胞可显著加重急性肝损伤模型小鼠的肝组织损伤。这为后续深入探讨急性肝损伤的发生机制提供了重要的实验基础。 展开更多
关键词 微小RNA-7 急性肝损伤 CD4+T细胞 细胞因子 细胞凋亡
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MicroRNA-7在CD4^+T细胞体外活化中的表达及意义 被引量:1
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作者 徐华林 赵娟娟 +4 位作者 崔盼盼 郭萌萌 陶弋婧 陈超 徐林 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第10期1419-1423,共5页
目的:观察microRNA-7(miR-7)在体外活化CD4^+T细胞中表达的变化,初步探讨其意义。方法:采用免疫磁珠分选法(MACS)获得FVB小鼠脾脏中CD4^+CD62L^+T细胞,经抗CD3/CD28抗体刺激后,Real-time PCR检测miR-7表达水平,FACS检测活化膜分子CD69... 目的:观察microRNA-7(miR-7)在体外活化CD4^+T细胞中表达的变化,初步探讨其意义。方法:采用免疫磁珠分选法(MACS)获得FVB小鼠脾脏中CD4^+CD62L^+T细胞,经抗CD3/CD28抗体刺激后,Real-time PCR检测miR-7表达水平,FACS检测活化膜分子CD69的表达变化;进一步观察刺激不同时间点CD4+T细胞中miR-7表达的变化;观察ERK抑制剂PD98059处理后,CD4^+T细胞活化下miR-7表达的变化,同时CCK8法检测细胞增殖变化,FACS检测CD69和CD62L分子的表达变化;最后,Real-time PCR检测各组细胞中IL-6、IL-10和IFN-γ等细胞因子表达水平变化。结果:与对照组相比,抗CD3/CD28抗体刺激后,CD4^+CD62L^+T细胞中miR-7表达水平显著上调,CD69分子的表达明显增加(P<0.05);与刺激0 h组和24 h组相比,48 h组和72 h组miR-7的表达水平显著上调(P<0.05);PD98059处理组中,CD4^+T细胞的miR-7表达水平显著下降(P<0.05),同时,活化膜分子CD69的表达比例明显降低(P<0.05);最后,细胞表达IL-6、IL-10和IFN-γ的水平均显著减弱(P<0.05)。结论:miR-7在活化的CD4+T细胞中明显上调,并与ERK信号相关,为后续探讨miR-7在CD4^+T细胞功能中的作用提供了前期实验基础。 展开更多
关键词 miR-7 CD4+T细胞 ERK信号途径 细胞因子
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微小RNA-7敲减对ConA诱导的小鼠急性肝损伤的影响 被引量:1
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作者 岳东旭 赵娟娟 +3 位作者 张忆雄 丁涛 陈慧子 徐林 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2017年第9期1643-1647,共5页
目的:研究微小RNA-7(miR-7)敲减(KD)对急性肝损伤(ALI)模型小鼠的影响。方法:野生型(WT)小鼠和miR-7KD小鼠腹腔注射30 mg/kg刀豆蛋白(ConA)建立急性肝损伤模型;48 h后,观察小鼠肝脏的形态、重量及其脏器指数变化;HE染色观察小鼠肝脏组... 目的:研究微小RNA-7(miR-7)敲减(KD)对急性肝损伤(ALI)模型小鼠的影响。方法:野生型(WT)小鼠和miR-7KD小鼠腹腔注射30 mg/kg刀豆蛋白(ConA)建立急性肝损伤模型;48 h后,观察小鼠肝脏的形态、重量及其脏器指数变化;HE染色观察小鼠肝脏组织病理学变化;血清学方法检查血清中谷丙转氨酶(ALT)的水平;ELISA法检测血清中细胞因子IL-4和IFN-γ的水平;流式细胞术检测肝脏组织中CD4^+T细胞的比例及其相关的细胞因子IL-4和IFN-γ的表达变化。结果:与对照组相比,miR-7敲减后急性肝损伤小鼠的肝脏组织颜色变浅,重量减轻,重量指数明显增加(P<0.05);HE染色显示miR-7KD小鼠血清炎症细胞浸润显著增多;血清学方法检测发现急性肝损伤小鼠血清ALT的水平明显上升(P<0.05);ELISA法检测显示miR-7KD小鼠血清中IFN-γ水平明显升高(P<0.01),而IL-4的表达水平则明显降低(P<0.01);流式细胞术检测结果显示,miR-7KD小鼠肝脏中CD4+T细胞比例显著升高(P<0.01),其相关的细胞因子IFN-γ的表达水平也显著上调(P<0.01),而IL-4的水平没有发生明显变化。结论:敲减miR-7基因可明显促进ConA诱导的小鼠急性肝损伤。 展开更多
关键词 微小RNA-7 急性肝损伤 CD4^+T细胞
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microRNA-7基因敲减对小鼠CD4^+SP细胞胸腺发育的影响 被引量:6
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作者 陶弋婧 朱顺飞 +5 位作者 陈超 赵娟娟 郭萌萌 张忆雄 秦娜林 徐林 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2015年第9期1173-1177,共5页
目的:研究microRNA-7(miRNA-7,miR-7)基因敲减对小鼠CD4+SP细胞胸腺发育的影响。方法:检测miR-7基因敲减(miR-7 knock down,miR-7KD)和野生型(Wild-type,WT)小鼠胸腺重量及细胞总数变化;HE染色观察miR-7KD小鼠胸腺的形态学结构改变;FAC... 目的:研究microRNA-7(miRNA-7,miR-7)基因敲减对小鼠CD4+SP细胞胸腺发育的影响。方法:检测miR-7基因敲减(miR-7 knock down,miR-7KD)和野生型(Wild-type,WT)小鼠胸腺重量及细胞总数变化;HE染色观察miR-7KD小鼠胸腺的形态学结构改变;FACS检测胸腺CD4+单阳性(Single positive,SP)细胞的比例并计算细胞总数,同时检测CD4+SP细胞CD44及CD62L表达变化;核抗原Ki-67染色法检测CD4+SP细胞的增殖情况;FACS检测CD4+SP细胞的凋亡变化;Western blot技术检测胸腺中总ERK1/2和磷酸化ERK1/2表达水平变化。结果:与WT小鼠相比,miR-7KD小鼠胸腺体积、重量以及细胞总数均显著减少,且形态学结构发生改变(P<0.05);FACS结果显示,miR-7KD小鼠胸腺CD4+SP细胞比例明显降低,且细胞总数减少(P<0.05)。此外,CD4+SP细胞的CD44表达水平显著增加,而CD62L表达水平明显减少(P<0.05);同时,CD4+SP细胞增殖及凋亡比例均显著增加(P<0.01);最后,miR-7KD小鼠胸腺中ERK1/2以及磷酸化ERK1/2的表达均明显下调(P<0.05)。结论:miR-7基因敲减后可显著影响CD4+SP细胞的胸腺发育,这可能与细胞活化水平及ERK1/2信号通路改变有关。 展开更多
关键词 微小RNA-7 基因敲减 胸腺 CD4^+SP细胞
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