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构建“以学生为主体”的本科医学免疫学实验教学模式 被引量：9
1
作者 秦娜琳 罗军敏 +5 位作者 姚新生 孙万邦 郑静 田丹 覃明 陈富超 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第5期465-466,共2页
21世纪高等医学教育的任务是培养具有深厚的基础理论知识、扎实的实践操作技能、积极的创新思维能力的综合人才。实验教学作为高等医学教育的重要组成部分,作为理论联系实际的桥梁,在培养医学生综合素质和创新能力方面有着重要的作用。
关键词 实验教学模式 以学生为主体 医学免疫学 高等医学教育 医学生综合素质 本科 基础理论知识 实践操作
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基于RGSE模式的本科免疫学实践教学改革的初探 被引量：1
2
作者 徐林 罗军敏 +4 位作者 秦娜琳 田丹 覃明 陈富超 郑静 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2013年第7期755-758,共4页
教育部在＂十一五＂教育规划纲要中明确提出,高等医学教学的主要目的是培养基础理论扎实、实践操作熟练和创新意识突出的复合型人才。这需要相关教学理论、教学模式和内容的不断改革和创新,以适应当前社会对医学人才的需求[1]。
关键词 实践教学改革 免疫学 本科 高等医学教学 复合型人才 教育规划 创新意识 实践操作
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HLA-DR、DQ基因多态性与遵义地区汉族流行性出血热相关性的研究 被引量：5
3
作者 罗军敏 孙万邦 +4 位作者 黄学贵 冯继红 张忆雄 宋明英 姚新生 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第9期842-844,848,共4页
目的:探讨HLA-DR、DQ基因多态性与遵义地区汉族流行性出血热(EHF)的关联性。方法:采用群体研究方法,应用聚合酶链反应-序列特异性引物(PCR-SSP)技术对100例流行性出血热患者(患者组)和100例健康对照者(健康对照组)进行HLA-DR、DQ基因分... 目的:探讨HLA-DR、DQ基因多态性与遵义地区汉族流行性出血热(EHF)的关联性。方法:采用群体研究方法,应用聚合酶链反应-序列特异性引物(PCR-SSP)技术对100例流行性出血热患者(患者组)和100例健康对照者(健康对照组)进行HLA-DR、DQ基因分型,比较其等位基因频率(GF),并计算其相对危险度(RR)。结果:EHF患者组HLA-DRB1*16基因频率较对照组明显增高(RR=3.58,χ2=4.916,P=0.0266<0.05);患者组HLA-DQ各等位基因频率与对照组比较差异无显著性。结论:研究提示在遵义地区汉族人群中,HLA-DRB1*16基因与EHF呈正相关,HLA-DRB1*16基因可能是EHF的易感基因。 展开更多
关键词 HLA-DR DQ基因 流行性出血热(EHG) 关联性
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遵义地区汉族HLA-DRB1、DQB1等位基因多态性的研究 被引量：3
4
作者 罗军敏 孙万邦 +4 位作者 黄学贵 冯继红 张忆雄 姚新生 宋明英 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第6期542-544,548,共4页
目的:从基因水平调查遵义地区汉族人群HLA-DRB1、DQB1等位基因频率,并了解其多态性分布状况。方法:应用聚合酶链反应-序列特异性引物(PCR-SSP)方法对遵义汉族200名健康个体进行HLA-DRB1、DQB1等位基因分型。结果:遵义地区汉族HLA-DRB1、... 目的:从基因水平调查遵义地区汉族人群HLA-DRB1、DQB1等位基因频率,并了解其多态性分布状况。方法:应用聚合酶链反应-序列特异性引物(PCR-SSP)方法对遵义汉族200名健康个体进行HLA-DRB1、DQB1等位基因分型。结果:遵义地区汉族HLA-DRB1、DQB1等位基因频率分布,在中低分辨水平,共检出13个DRB1基因,7个DQB1基因,DRB1*09、DRB1*08及DQB1*05基因频率相对较高;DRB1*10及DQB1*04基因频率相对较低。与我国北方、南方汉族比较,更接近南方汉族人群。结论:遵义汉族人群HLA-DRB1、DQB1基因具有较为丰富的多态性,其分布符合南方汉族的特点,可能与重庆汉族人群有较为密切的民族融合。 展开更多
关键词 遵义 HLA-DRB1、DQB1 基因频率 多态性 聚合酶链反应-序列特异性引物(PCR-SSP)
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HLA基因与常见自身免疫病相关性研究进展 被引量：7
5
作者 杜娟 姚新生 于红松 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第1期118-122,128,共6页
自身免疫病(Autoimmune diseases,AIDs)是一类严重危害人类身体健康的复杂疾病,病因涉及遗传、免疫和环境各个方面。人类白细胞抗原(Human leukocyte antigen,HLA)基因是自身免疫病的主要遗传风险因素,目前已鉴定了多个HLA位点参与自身... 自身免疫病(Autoimmune diseases,AIDs)是一类严重危害人类身体健康的复杂疾病,病因涉及遗传、免疫和环境各个方面。人类白细胞抗原(Human leukocyte antigen,HLA)基因是自身免疫病的主要遗传风险因素,目前已鉴定了多个HLA位点参与自身免疫病的发生发展过程。本文主要综述HLA基因多态性及单倍型与常见自身免疫病发生的相关性研究进展。 展开更多
关键词 HLA 自身免疫病 多态性 单倍型 相关性
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miR-155对人肺癌95D细胞生物学行为的影响 被引量：1
6
作者 赵娟娟 李永菊 +4 位作者 陈超 郭萌萌 陶弋婧 任涛 徐林 《中国肿瘤生物治疗杂志》 CAS CSCD 北大核心 2014年第5期510-515,共6页
目的:构建携microRNA-155(miR-155)的真核表达载体并观察其转染高转移性人巨细胞肺癌95D细胞后细胞的生物学行为变化。方法:以95D细胞基因组RNA为模板,经PCR法扩增miR-155的前体序列,由BamHⅠ和HindⅢ双酶切后将其亚克隆入真核表达载体p... 目的:构建携microRNA-155(miR-155)的真核表达载体并观察其转染高转移性人巨细胞肺癌95D细胞后细胞的生物学行为变化。方法:以95D细胞基因组RNA为模板,经PCR法扩增miR-155的前体序列,由BamHⅠ和HindⅢ双酶切后将其亚克隆入真核表达载体pcDNA 3.1(-),并进行双酶切及测序鉴定;将构建成功的pcDNA3.1(-)-pri-miR-155载体(命名为p-miR-155)体外瞬时转染人肺癌95D细胞,利用Real-time PCR探针法检测miR-155成熟体的表达水平,并利用CCK-8法、克隆形成实验和划痕法检测95D细胞的增殖、克隆形成以及体外迁移能力。结果:成功构建携miR-155的真核表达载体;与空白(Mock)和对照组(p-Ctrl)相比,转染后的95D细胞过表达miR-155[(2.04±0.62)vs(0.76±0.62)、(1.00±0.45),均P<0.01]、p-miR-155载体转染组95D细胞的增殖抑制明显增加[(46.70±6.89)%vs(3.70±1.40)%、(1.11±0.75)%,P<0.01]、克隆形成能力(在100和1 000个细胞/孔接种条件下)明显下降[(12±3)vs(34±3)、(35±3)个,P<0.01;(78±4)vs(159±4)、(165±4)个,P<0.01)],此外,细胞的迁移细胞数也明显减少[(110±5)vs(295±5)、(325±5)个,P<0.01]。结论:通过miR-155真核表达载体转染产生的过表达miR-155可显著抑制人肺癌95D细胞的增殖和迁移能力。 展开更多
关键词 microRNA-155(miR-155) 真核表达 肺癌 95D细胞 增殖 迁移
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CD25分子胞外段基因免疫应答中B淋巴细胞的变化及意义 被引量：1
7
作者 徐林 张凤 +3 位作者 周涯 罗军敏 覃明 姚新生 《西安交通大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2010年第6期659-663,共5页
目的用鼠CD25分子胞外段基因疫苗免疫Balb/c小鼠,观察其诱导的体液免疫应答中B淋巴细胞的变化并探讨其意义。方法用pcDNA3.1-CD25胞外段真核表达质粒分别在第0天、第10天和第20天肌肉注射免疫同系Balb/c小鼠,酶联免疫法(ELISA)检测抗CD2... 目的用鼠CD25分子胞外段基因疫苗免疫Balb/c小鼠,观察其诱导的体液免疫应答中B淋巴细胞的变化并探讨其意义。方法用pcDNA3.1-CD25胞外段真核表达质粒分别在第0天、第10天和第20天肌肉注射免疫同系Balb/c小鼠,酶联免疫法(ELISA)检测抗CD25胞外段的抗体水平及亚型,FACS检测脾细胞中B淋巴细胞的比例变化及细胞因子IL-4、IL-10和IFN-γ的表达变化。结果与对照组相比,CD25胞外段基因免疫组小鼠血清抗CD25抗体在免疫后逐渐升高,第30天达最高峰;抗CD25抗体主要以IgG1为主;免疫小鼠脾细胞中B细胞的比例变化不显著(P>0.05),但高分泌IL-4和IL-10(P<0.05),而低分泌IFN-γ(P<0.05)。结论 CD25胞外段蛋白基因免疫中B细胞功能变化显著,这为后续深入研究体液免疫应答在T细胞疫苗中的作用提供了前期实验基础。 展开更多
关键词 CD25分子胞外段 基因免疫 B淋巴细胞 T细胞疫苗
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miRNA-126基因敲减小鼠脾脏中免疫细胞的组成变化 被引量：4
8
作者 雷良玉 胡燕 +5 位作者 郭萌萌 卢佳 郑文 徐华林 陈超 徐林 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第4期460-464,共5页
目的:观察miRNA-126基因敲减(Knock down,KD)小鼠脾脏中免疫细胞组成比例变化并探讨其意义。方法:Realtime PCR探针法检测miR-126KD小鼠脾脏中miR-126表达水平,计算脾脏总细胞数;HE染色观察脾脏组织的病理学变化;流式细胞术(FACS)分别... 目的:观察miRNA-126基因敲减(Knock down,KD)小鼠脾脏中免疫细胞组成比例变化并探讨其意义。方法:Realtime PCR探针法检测miR-126KD小鼠脾脏中miR-126表达水平,计算脾脏总细胞数;HE染色观察脾脏组织的病理学变化;流式细胞术(FACS)分别检测脾脏中DCs细胞、巨噬细胞、γδT细胞、NKT细胞,CD3^+T细胞和其亚群以及CD19^+B细胞的比例并计算细胞绝对数;免疫印迹法(Western blot,WB)检测脾脏组织中磷酸化NF-κB和磷酸化Akt的表达水平。结果:与野生型(WT)小鼠相比,miR-126KD脾组织中miR-126表达水平明显降低(P<0.05),细胞总数明显增加(P<0.05),且发生明显病理学改变;固有免疫细胞中NK细胞的比例和细胞绝对数显著增加(P<0.05),但巨噬细胞的比例显著降低(P<0.05);适应性免疫细胞中CD3^+T细胞和CD4^+T细胞的比例和绝对细胞数都显著增加(P<0.05),而CD19^+B细胞仅绝对数显著增加(P<0.05);最后miRNA-126KD小鼠脾脏组织的磷酸化NF-κB和磷酸化Akt水平明显增加(P<0.05)。结论:miRNA-126敲减小鼠脾脏中各免疫细胞亚群的组成发生明显改变,可能与NF-κB和Akt信号通路传递变化有关,为后续探讨miR-126在机体免疫应答中的作用提供了前期实验基础。 展开更多
关键词 miRNA-126 基因敲减 免疫细胞 组成
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微小RNA-126基因在CD4＋T细胞介导小鼠自身免疫性肠炎中的作用 被引量：1
9
作者 褚风云 胡燕 +6 位作者 郭萌萌 陈超 赵娟娟 刘云 秦娜琳 郑静 徐林 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第8期767-772,共6页
目的研究微小RNA-126(micro RNA-126,miR-126)基因敲减(knock down,KD)对CD4^+T细胞介导的自身免疫性结肠炎模型的影响并探讨其意义。方法常规利用DSS溶液喂养野生型(WT)和miR-126基因敲减(miR-126KD)小鼠,诱导急性自身免疫性结肠炎模型... 目的研究微小RNA-126(micro RNA-126,miR-126)基因敲减(knock down,KD)对CD4^+T细胞介导的自身免疫性结肠炎模型的影响并探讨其意义。方法常规利用DSS溶液喂养野生型(WT)和miR-126基因敲减(miR-126KD)小鼠,诱导急性自身免疫性结肠炎模型。HE染色观察小鼠结肠组织病理变化;FACS检测CD4^+T细胞的比例变化及其表面活化分子CD62L、CD44的表达;MACS分选出WT和miR-126KD小鼠脾脏中CD4^+CD62L+T细胞,CFSE染色标记后,分别经尾静脉转输给WT小鼠,再诱导自身免疫性结肠炎模型;HE染色观察结肠组织病理变化;FACS检测CFSE阳性CD4^+T细胞表面活化分子CD62L、CD44的表达变化。结果与对照组相比,miR-126KD小鼠肠组织绒毛缺失不完整,黏膜上皮出现较大溃疡,炎性细胞浸润增加;FACS结果显示,miR-126KD组小鼠CD4^+T细胞比例和总数显著上调(P<0.01);且高表达CD44,低表达CD62L;过继转输实验结果显示,miR-126KD小鼠CD4^+T细胞转输组结肠组织损伤加重;同时,CFSE+细胞高表达CD44,低表达CD62L。结论 miR-126基因敲减加重葡聚糖硫酸钠所致肠炎的病变程度。 展开更多
关键词 微小RNA-126 CD4+T细胞 IBD 肠炎模型 活化
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自身免疫模型小鼠T细胞受体可变区β链(TCR Vβ)偏向取用研究进展
10
作者 张滕 姚新生 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第9期1292-1294,共3页
T细胞是机体的主要免疫细胞,且在适应性免疫中起到主要作用。而T细胞受体(TCR)是T细胞表面特异性受体,是识别抗原的主要部位;TCR具有多样性和特异性,其中,最具多样性的是T细胞受体β链可变区(TCR Vβ),TCR Vβ的研究可为临床疾病的诊断... T细胞是机体的主要免疫细胞,且在适应性免疫中起到主要作用。而T细胞受体(TCR)是T细胞表面特异性受体,是识别抗原的主要部位;TCR具有多样性和特异性,其中,最具多样性的是T细胞受体β链可变区(TCR Vβ),TCR Vβ的研究可为临床疾病的诊断和治疗提供新的思路和方向。TCR Vβ家族在各种疾病的动物模型的研究中具有重要的意义和应用价值,本文将对Vβ亚家族偏向取用在小鼠模型中的研究进展进行综述。 展开更多
关键词 T细胞受体(TCR) β链可变区(Vβ)亚家族 小鼠模型 自身免疫性疾病 综述
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过表达microRNA-7通过下调CGG结合蛋白1的表达抑制人肺癌细胞生长 被引量：16
11
作者 胡燕 廖珍媛 +7 位作者 陈超 秦娜琳 郑静 田丹 李永菊 朱顺飞 罗军敏 徐林 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2014年第2期125-130,共6页
目的探讨过表达microRNA-7(miR-7)对人肺癌细胞体内外生长的作用和可能机制。方法利用真核表达载体pcDNA3.1(-)-pri-miR-7(p-miR-7),体外瞬时转染95D人肺癌细胞,MTT法和克隆形成实验检测95D细胞的增殖变化;免疫荧光技术检测95D细胞Ki-67... 目的探讨过表达microRNA-7(miR-7)对人肺癌细胞体内外生长的作用和可能机制。方法利用真核表达载体pcDNA3.1(-)-pri-miR-7(p-miR-7),体外瞬时转染95D人肺癌细胞,MTT法和克隆形成实验检测95D细胞的增殖变化;免疫荧光技术检测95D细胞Ki-67和CGG结合蛋白(CGGBP1)的表达;建立人肺癌裸鼠肿瘤模型,肿瘤局部注射p-miR-7真核表达载体,测量肿瘤大小并观察小鼠生存时间;实时PCR检测肿瘤组织中miR-7表达水平;免疫组织化学技术检测组织中Ki-67和CGGBP1蛋白的表达。结果过表达miR-7可明显抑制肺癌细胞的体外增殖(P<0.05),Ki-67和CGGBP1的表达显著减少(P<0.05);体内实验结果显示,局部注射p-miR-7组中miR-7表达水平明显增加,同时荷瘤裸鼠的肿瘤生长缓慢,生存时间明显延长(P<0.05)。肿瘤组织中Ki-67和CGGBP1蛋白的表达量均显著减少(P<0.05)。结论过表达miR-7可显著抑制人肺癌细胞的体内外生长,可能与其下调肿瘤生长相关蛋白CGGBP1的表达有关。 展开更多
关键词 肺癌 miR-7 人肺癌95D细胞 细胞生长 CGG结合蛋白1
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重组hIL-10在毕赤酵母X-33的表达及其生物活性鉴定 被引量：17
12
作者 陈富超 孙万邦 +4 位作者 封建凯 杜联峰 黄俊琼 罗军敏 宋明英 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第8期691-695,共5页
目的:用毕赤酵母表达hIL-10并探索合适的表达条件,为IL-10生物制品研发及临床应用奠定基础。方法:以0.5%甲醇诱导酵母X-33表达rhIL-10,用SDS-PAGE和Western blot分析鉴定rhIL-10,比较不同温度、不同pH值和有无PMSF条件下rhIL-10的表达... 目的:用毕赤酵母表达hIL-10并探索合适的表达条件,为IL-10生物制品研发及临床应用奠定基础。方法:以0.5%甲醇诱导酵母X-33表达rhIL-10,用SDS-PAGE和Western blot分析鉴定rhIL-10,比较不同温度、不同pH值和有无PMSF条件下rhIL-10的表达水平。用ELISA法测定培养液rhIL-10含量,用Bradford法测定培养液总蛋白含量,计算rhIL-10占总蛋白的比例。以淋巴细胞转化试验分析rhIL-10的生物学活性。结果:SDS-PAGE后可见42 kD左右蛋白条带;Western blot也检测到42kD左右特异性蛋白质条带。pH值为6.0、温度在28℃并加入抑制剂时rhIL-10表达量最高值为20 mg/L,同时段培养液中总蛋白质含量为50 mg/L,rhIL-10占总蛋白比例为40%。在外周血淋巴细胞转化试验中,rhIL-10抑制了淋巴细胞的增殖。结论:hIL-10能在毕赤酵母高效表达,表达产物有较好生物活性;发酵条件对rhIL-10的表达水平影响大,改善发酵条件能促进rhIL-10的表达。 展开更多
关键词 人白细胞介素10 毕赤酵母 细胞增殖 淋巴细胞转化试验
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结核性胸膜炎患者胸水和外周血Treg细胞及DC细胞亚群的检测 被引量：14
13
作者 陈松林 罗军敏 +2 位作者 汤贤英 姚新生 孙万邦 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2013年第9期965-968,共4页
目的:探讨CD4+CD25+CD127-调节性T细胞及DC细胞亚群在结核性胸膜炎患者外周血及胸腔积液中的表达变化及其临床意义。方法:采集30例健康正常者的外周血以及30例结核性胸膜炎患者的外周血和胸水,应用流式细胞术检测各标本中DC1、DC2亚群、... 目的:探讨CD4+CD25+CD127-调节性T细胞及DC细胞亚群在结核性胸膜炎患者外周血及胸腔积液中的表达变化及其临床意义。方法:采集30例健康正常者的外周血以及30例结核性胸膜炎患者的外周血和胸水,应用流式细胞术检测各标本中DC1、DC2亚群、CD4+CD25+CD127-调节性T细胞数量的变化。结果:患者外周血的DC1/PBMC、DC2/PBMC明显低于健康正常外周血(P<0.05);患者胸水中检测到DC细胞,与患者外周血间具有正相关(r=0.503及0.437,P<0.05);患者PBMC中的Treg细胞值明显高于健康正常PBMC(P<0.05);患者胸水中检测到Treg细胞,与患者外周血间具有正相关(r=0.672,P<0.05)。结论:结核性胸膜炎患者外周血中树突状细胞数量比正常对照组低,而Treg的数量较正常对照组高,与正常对照组相比存在显著性差异,表明CD4+CD25+CD127-调节性T细胞和DC细胞亚群可能在结核性胸膜炎中发挥着重要的作用。 展开更多
关键词 CD4＋CD25＋CD127-调节性T淋巴细胞 树突状细胞 结核性胸膜炎
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重组hIL-10质粒构建及其在毕赤酵母SMD1168中的表达和纯化 被引量：9
14
作者 封建凯 孙万邦 +5 位作者 陈富超 黄俊琼 罗军敏 杜联峰 姚新生 王胜香 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第3期168-172,共5页
构建重组hIL-10真核表达载体,探索在毕赤酵母中的表达,为进一步研究hIL-10生物学功能及临床应用奠定基础。PCR扩增目的基因hIL-10cDNA,经EcoRI/XbaI双酶切后,将其亚克隆至同样双酶切的载体pPICZaA中,构建表达质粒pPICZaA-hIL-10;电转化... 构建重组hIL-10真核表达载体,探索在毕赤酵母中的表达,为进一步研究hIL-10生物学功能及临床应用奠定基础。PCR扩增目的基因hIL-10cDNA,经EcoRI/XbaI双酶切后,将其亚克隆至同样双酶切的载体pPICZaA中,构建表达质粒pPICZaA-hIL-10;电转化法,将其转入毕赤酵母SMD1168,甲醇诱导Mut+型转化子基因表达;对目的蛋白进行检测及纯化。扩增出了目的基因hIL-10cDNA,重组质粒pPICZaA-hIL-10经酶切鉴定和序列测定正确;表达产物经SDS-PAGE分析在42.0kD处可见较浓染条带,Westernblotting分析可见特异条带;ELISA检测72h上清液中目的蛋白浓度可达1.973mg/L;纯化后目的蛋白纯度达67.0%。实现了重组hIL-10在毕赤酵母SMD1168中的成功表达和初步纯化。 展开更多
关键词 HIL-10 质粒构建 毕赤酵母 基因表达
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维持性血液透析患者IL-17水平及与CRP关系的探讨 被引量：6
15
作者 刘春梅 马锐 +2 位作者 姚新生 孙万邦 刘永 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第5期454-458,共5页
目的:通过观察维持性血液透析(Maintainance hemodialysis,MHD)患者白细胞介素17(Interleukin17,IL-17)、C反应蛋白(C-reactive protein,CRP)、白细胞介素6(Interleukin6,IL-6)、甘油三酯(Triglyceride,TG)水平、相互之间的相关性及其... 目的:通过观察维持性血液透析(Maintainance hemodialysis,MHD)患者白细胞介素17(Interleukin17,IL-17)、C反应蛋白(C-reactive protein,CRP)、白细胞介素6(Interleukin6,IL-6)、甘油三酯(Triglyceride,TG)水平、相互之间的相关性及其与透析年限的相关性,探讨IL-17与维持性血液透析患者免疫功能异常及微炎症状态的关系。方法:10例健康体检者作为正常对照组;29例透析超过3个月的不同透析年限的维持性透析(Maintainance hemodialysis,MHD)患者外周血。酶联免疫吸附试验(En-zyme linked immunosorbent assay,ELISA)夹心法检测所有血清样本的CRP、IL-6、IL-17水平及生化检查TG水平。结果:(1)患者CRP、IL-17、TG水平较正常对照组明显升高(P<0.01);IL-6水平较正常人无明显差异。(2)患者CRP、IL-6、IL-17及TG与透析年限均无相关性(P>0.05)。(3)IL-17与CRP、TG呈正相关,IL-6与其他指标均无相关性。结论:(1)MHD患者血浆的IL-17水平远远高于正常人,与公认的反应炎症状态的指标CRP有正相关性,但与透析年限无相关性,提示IL-17可能参与了MHD患者免疫功能异常和微炎症状态的免疫发病机制;(2)IL-17水平和IL-6无相关性,引起MHD患者IL-17升高的机制有待进一步探讨。 展开更多
关键词 终末期肾病 血液透析 微炎症 CRP IL-17
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乙型肝炎患者治疗前后外周血CD4^+CD25^+Tregs TCR CDR3谱系漂移特征分析 被引量：6
16
作者 潘宗琴 吕红 +2 位作者 庄勤建 姚新生 邱隆敏 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2017年第6期889-894,899,共7页
目的:探讨AHB患者急性期及恢复期、CHB患者恩替卡韦治疗前后外周血PBMC中CD4^+CD25^+Tregs TCR CDR3谱系漂移特征的变化。方法:采集4例正常人、3例AHB患者(急性期和恢复期)及4例CHB患者恩替卡韦治疗前后外周抗凝静脉血,分离外周血PBMC;... 目的:探讨AHB患者急性期及恢复期、CHB患者恩替卡韦治疗前后外周血PBMC中CD4^+CD25^+Tregs TCR CDR3谱系漂移特征的变化。方法:采集4例正常人、3例AHB患者(急性期和恢复期)及4例CHB患者恩替卡韦治疗前后外周抗凝静脉血,分离外周血PBMC;磁珠分选法分选CD4^+CD25^+Tregs,提取总RNA,逆转录合成c DNA;根据TCRβ链24个可变区基因(TRBV)家族设计相应的上游引物,并在β链恒定区(BC)设计一条共用的FAM荧光标记下游引物及对照引物。PCR扩增出24个包含完整CDR3区的TRBV家族的PCR产物,电泳鉴定目的片段;PCR产物送上海基康用毛细管电泳法进行基因扫描;用Peak Scanner Software v1.0软件分析研究对象TRBV家族CDR3谱系特征;采用配对t检验(paired-sample t test)检测AHB患者急性期及恢复期、CHB患者恩替卡韦治疗前后TRBV家族谱系漂移率差异。结果:3例AHB患者急性期呈现普遍谱系漂移的TRBV4、10、14、16、19家族在恢复期多转变为正态的多峰谱型,AHB患者恢复期外周血CD4^+CD25^+Tregs TRBV家族CDR3谱型漂移率显著低于急性期(t=9.456,P=0.011);TRBV8、11、13.2、15、16、18、20在3例CHB患者抗HBV治疗前出现克隆增生,TRBV1、5.2、6、12、14、24在3例CHB患者抗HBV治疗后出现克隆增生。CHB患者抗病毒治疗后TRBV家族CDR3谱型漂移率高于治疗前(t=-0.666,P=0.553)。结论:AHB患者急性期呈现谱系漂移的TRBV4、10、14、16、19家族在恢复期多转变为正态的多峰谱型,推测这种转变可能与HBsAg、HBeAg转阴相关。CHB患者在治疗前TRBV8、11、13.2、15、16、18、20家族克隆增生的Tregs可能通过下调机体的细胞免疫应答,阻碍病毒清除;随着药物导致病毒载量的显著下降,TRBV1、5.2、6、12、14、24家族克隆增生的Tregs可能更有助于诱导机体出现免疫耐受,导致HBV不能彻底清除。 展开更多
关键词 慢性乙型肝炎 急性乙型肝炎 T淋巴细胞受体 互补决定区3 调节性T细胞 恩替卡韦
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miR-126敲减增强小鼠CD4^+T细胞体内活性并促进其向Th1细胞分化 被引量：7
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作者 崔盼盼 胡燕 +5 位作者 陶弋婧 陈超 赵娟娟 郭萌萌 周涯 徐林 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第3期347-351,共5页
目的观察miR-126基因敲减(KD)小鼠体内CD4+T细胞活性的变化并探讨其意义。方法利用磁珠活化细胞分选技术(MACS)分选miR-126KD小鼠脾脏CD4+CD62L+T细胞,实时定量PCR检测细胞内miR-126成熟体的表达水平;荧光激活细胞分选术(FACS)检测CD4+... 目的观察miR-126基因敲减(KD)小鼠体内CD4+T细胞活性的变化并探讨其意义。方法利用磁珠活化细胞分选技术(MACS)分选miR-126KD小鼠脾脏CD4+CD62L+T细胞,实时定量PCR检测细胞内miR-126成熟体的表达水平;荧光激活细胞分选术(FACS)检测CD4+T细胞表面活化标志CD69、CD62L和CD44分子以及Ki-67的表达变化;膜联素Ⅴ/碘化丙啶(annexinⅤ/PI)双染色法结合流式细胞术检测CD4+T细胞的凋亡情况;实时定量PCR检测CD4+T细胞功能相关细胞因子白细胞介素4(IL-4)、IL-10、IL-12、转化生长因子β(TGF-β)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、γ干扰素(IFN-γ)的mRNA水平变化。结果与野生型(WT)小鼠组相比,miR-126KD小鼠组CD4+T细胞内miR-126成熟体的表达显著下调;FACS结果显示miR-126KD小鼠CD4+T细胞表达CD62L的比例明显减少,而表达CD69、CD44以及Ki-67细胞的比例显著增加,CD4+T细胞的体内凋亡比例显著减少;CD4+T细胞中IL-4、IL-10的mRNA水平明显降低,而IL-12、TGF-β、TNF-α以及IFN-γ的mRNA水平显著增加。结论 miR-126KD小鼠体内CD4+T细胞的活性显著增强并促进其向Th1细胞分化。 展开更多
关键词 微小RNA-126 基因敲减 CD4+T细胞 活性 细胞因子
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miRNA-126基因敲减小鼠肠系膜淋巴结T淋巴细胞比例的变化 被引量：8
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作者 张忆雄 胡燕 +6 位作者 郭萌萌 朱顺飞 陶弋婧 赵娟娟 周涯 郑静 徐林 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2014年第9期1157-1160,共4页
目的:研究miRNA-126基因敲减小鼠肠系膜淋巴结T及B淋巴细胞数量的变化。方法:检测miRNA-126基因敲减(KD)小鼠肠系膜淋巴结的体积、重量和淋巴结细胞总数;HE染色检测小鼠肠系膜淋巴结的病理形态学变化;流式细胞术(FACS)检测淋巴结中T及B... 目的:研究miRNA-126基因敲减小鼠肠系膜淋巴结T及B淋巴细胞数量的变化。方法:检测miRNA-126基因敲减(KD)小鼠肠系膜淋巴结的体积、重量和淋巴结细胞总数;HE染色检测小鼠肠系膜淋巴结的病理形态学变化;流式细胞术(FACS)检测淋巴结中T及B淋巴细胞数量的变化。结果:与野生型(WT)小鼠相比,miR-126KD小鼠肠系膜淋巴结体积、重量和淋巴结细胞总数均显著增加(P<0.05),且病理形态学发生异常;肠系膜淋巴结中B淋巴细胞比例和数量无变化(P>0.05),CD4+T细胞数量无变化,而CD4+T细胞百分数明显减少(P<0.05),CD8+T细胞百分数和绝对数量均显著增加(P<0.05)。结论:miRNA-126敲减后可显著影响肠系膜淋巴结中T淋巴细胞的数量,提示miRNA-126可能影响肠系膜淋巴结的免疫功能。 展开更多
关键词 miRNA-126基因敲减 肠系膜淋巴结 B细胞 T细胞
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基因沉默PRDX1表达对人结直肠癌SW480细胞侵袭迁移的影响 被引量：9
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作者 冯继红 张红 +3 位作者 李龙梅 罗军敏 臧春宝 周航 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2017年第7期1048-1052,共5页
目的:探讨RNA干扰过氧化还原酶1(Peroxiredoxin 1,PRDX1)表达对人结直肠癌SW480细胞侵袭转移能力的影响。方法:筛选RNA干扰PRDX1的慢病毒质粒,与阴性对照慢病毒质粒分组转染结直肠癌SW480细胞,转染后的SW480细胞可分为PRDX1基因沉默组(s... 目的:探讨RNA干扰过氧化还原酶1(Peroxiredoxin 1,PRDX1)表达对人结直肠癌SW480细胞侵袭转移能力的影响。方法:筛选RNA干扰PRDX1的慢病毒质粒,与阴性对照慢病毒质粒分组转染结直肠癌SW480细胞,转染后的SW480细胞可分为PRDX1基因沉默组(si-PRDX1)和阴性对照组(Vector)。实时荧光定量PCR(qRT-PCR)和免疫印迹法(Western blot)分别检测两组细胞中PRDX1 mRNA和蛋白表达;采用Transwell侵袭和迁移实验检测基因沉默PRDX1表达对结直肠癌细胞侵袭及迁移能力的影响;通过Western blot检测两组细胞中基质金属蛋白酶(MMP)家族部分蛋白表达水平。结果:基因沉默PRDX1表达可有效抑制结直肠癌SW480细胞中PRDX1 mRNA和蛋白水平的表达,与阴性对照组相比(Vector),差异均具有统计学意义(P<0.01),说明基因沉默PRDX1的SW480细胞系构建成功;Transwell侵袭和迁移实验显示si-PRDX1组细胞的侵袭及迁移能力较对照组均明显降低(P<0.01);Western blot结果显示,与Vector组相比,si-PRDX1组细胞中组织基质金属蛋白酶抑制剂2(TIMP-2)的表达明显增加,而MMP-2及MMP-9的表达显著下降,且差异均具有统计学意义(P<0.05)。结论:基因沉默人结直肠癌SW480细胞的PRDX1表达可有效抑制细胞的侵袭、迁移及转移能力,其机制可能会通过调控TIMP-2、MMP-2及MMP-9的表达介导。 展开更多
关键词 过氧化还原酶1 结直肠癌 侵袭迁移 基质金属蛋白酶 SW480
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MicroRNA-155对人肺癌95D细胞生长的影响 被引量：6
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作者 秦安东 周涯 +3 位作者 盛美霞 费广茹 任涛 徐林 《中国肺癌杂志》 CAS 2011年第7期575-580,共6页
背景与目的近年来的研究发现miRNAs(microRNAs)家族成员miR-155与肺癌的发生相关,然而具体机制不明。本研究拟探讨上调miR-155表达对人肺癌95D细胞体外生长的影响及其可能的作用机制,为后续深入研究miR-155在肺癌发生、发展中的作用提... 背景与目的近年来的研究发现miRNAs(microRNAs)家族成员miR-155与肺癌的发生相关,然而具体机制不明。本研究拟探讨上调miR-155表达对人肺癌95D细胞体外生长的影响及其可能的作用机制,为后续深入研究miR-155在肺癌发生、发展中的作用提供新的实验依据。方法人肺癌95D细胞分为空白对照组、miR-155阴性对照组和miR-155转染组,分别作加入转染试剂、转染miR-155阴性对照和转染miR-155处理。Real-time PCR特异性探针法检测转染后95D细胞中miR-155的表达水平;应用MTT法检测miR-155对95D细胞增殖的抑制作用;流式细胞术检测95D细胞周期的分布;Western blot检测95D细胞SOS1蛋白的表达变化。结果 Real-time PCR结果显示,与对照组相比,转染组95D细胞miR-155的表达水平明显增加(P<0.05);镜下可见转染miR-155的95D细胞生长减缓,形态发生改变;M结果表明miR-155转染后,95D细胞增殖受到抑制,转染组和对照组存在明显差异(P<0.05);流式细胞术分析显示,与对照组相比,转染miR-155的95D细胞周期发生改变,G0/G1期细胞明显增多,而S期则明显减少(P<0.05);Western blot结果显示转染组95D细胞SOS1蛋白的表达明显降低(P<0.05)。结论 miR-155能明显抑制人肺癌95D细胞的体外生长,这可能与miR-155下调SOS1表达及诱导95D细胞G0/G1期阻滞相关。 展开更多
关键词 MicroRNA-155 肺肿瘤 细胞增殖 细胞周期阻滞 SOS1
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