抗菌肽的结构特点·作用机理及其应用前景 被引量：28

1

作者 岳昌武 莫宁萍 +2 位作者 刘坤祥 凌锌 曾霓 《安徽农业科学》 CAS 北大核心 2008年第5期1736-1739,共4页

抗菌肽是一种广泛存在于生物界的抵抗病原微生物入侵的重要防御分子,是生物先天免疫的重要防御物质,不仅具有广谱抗菌活性和抗病毒、抗真菌、抗寄生虫及抗肿瘤等生物活性,还具有随物种适应环境而产生的结构多样性以及区别于传统抗生素... 抗菌肽是一种广泛存在于生物界的抵抗病原微生物入侵的重要防御分子,是生物先天免疫的重要防御物质,不仅具有广谱抗菌活性和抗病毒、抗真菌、抗寄生虫及抗肿瘤等生物活性,还具有随物种适应环境而产生的结构多样性以及区别于传统抗生素杀菌机理的独特性,且不易产生耐药性,是一类极具潜力的肽类抗生素。抗菌肽对靶细胞表现出选择性,有助于设计出活性更高的新型肽类抗生素。从抗菌肽的作用机制、结构特点、新型抗菌肽分子设计、抗菌肽基因工程等方面阐述了抗菌肽研究的新进展。 展开更多

关键词 抗茵肽 作用机制 基因工程 分子设计 研究进展

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低温胁迫对甘薯s-腺苷甲硫氨酸合成酶mRNA表达水平的影响 被引量：13

2

作者 肖静 凌锌 +1 位作者 岳昌武 曾霓 《安徽农业科学》 CAS 北大核心 2008年第16期6633-6634,6637,共3页

[目的]为研究s-腺苷甲硫氨酸合成酶基因在冷胁迫条件下的表达情况。[方法]分别提取4℃胁迫处理0、12、24、48和72 h后的甘薯叶、茎和块根组织总RNA,通过反转录和实时定量PCR技术分析了该基因的mRNA表达情况。[结果]叶、茎和块根组织中... [目的]为研究s-腺苷甲硫氨酸合成酶基因在冷胁迫条件下的表达情况。[方法]分别提取4℃胁迫处理0、12、24、48和72 h后的甘薯叶、茎和块根组织总RNA,通过反转录和实时定量PCR技术分析了该基因的mRNA表达情况。[结果]叶、茎和块根组织中该基因表达量都明显升高,分别于胁迫后24、72和72 h达到表达高峰,其中块根组织表达量增加量最大。[结论]低温胁迫能够促进相关基因的mRNA表达水平升高。 展开更多

关键词 低温胁迫 甘薯 S-腺苷甲硫氨酸合成酶 实时定量PCR

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肝复康对肝纤维化大鼠肝组织JAK2和STAT3表达的影响 被引量：5

3

作者 李晋 姜妙娜 贾玉杰 《临床肝胆病杂志》 CAS 2010年第5期527-530,共4页

目的观察中药肝复康对肝纤维化大鼠肝组织Janus激酶2(JAK2)及信号转导子和转录激活子3(STAT3)表达的影响,并对其在JAK2/STAT3信号通路上治疗肝纤维化的作用机制进行初步探讨。方法采用10%四氯化碳皮下注射制备肝纤维化模型,于造模第9周... 目的观察中药肝复康对肝纤维化大鼠肝组织Janus激酶2(JAK2)及信号转导子和转录激活子3(STAT3)表达的影响,并对其在JAK2/STAT3信号通路上治疗肝纤维化的作用机制进行初步探讨。方法采用10%四氯化碳皮下注射制备肝纤维化模型,于造模第9周给予肝复康治疗12周。通过测定血清中ALT、AST活性及白蛋白和总蛋白的含量来反映肝脏功能,HE染色法观察肝组织病理学变化,RT-PCR观察JAK2和STAT3 mR-NA的表达。结果经肝复康治疗后,中剂量治疗组与模型组相比较,肝脏的组织学和血清学指标均明显改善,肝组织JAK2、STAT3 mRNA的表达显著减少(P<0.01)。结论 (1)JAK2/STAT3信号通路在肝纤维化的形成过程中起重要作用;(2)肝复康对肝纤维化有疗效,其作用机制可能与降低肝组织JAK2和STAT3的表达,阻断JAK2/STAT3信号通路有关。 展开更多

关键词 肝硬化 肝复康 反式激活因子类 蛋白酪氨酸激酶类 信号传导 JAK2/STAT3

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不同固定液对细胞骨架荧光染色标记效果的影响 被引量：4

4

作者 罗果 保玉心 李晋 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第7期753-755,共3页

目的比较不同固定液对细胞骨架荧光染色的差异,选择最佳固定方法。方法分别采用4%甲醛、2%戊二醛、95%乙醇和4%多聚甲醛/MES 4种固定液,对人肺腺癌细胞H1299进行固定,对其微管和微丝荧光标记后,在共聚焦显微镜下观察其形态结构。结果 4... 目的比较不同固定液对细胞骨架荧光染色的差异,选择最佳固定方法。方法分别采用4%甲醛、2%戊二醛、95%乙醇和4%多聚甲醛/MES 4种固定液,对人肺腺癌细胞H1299进行固定,对其微管和微丝荧光标记后,在共聚焦显微镜下观察其形态结构。结果 4%多聚甲醛/MES对细胞的微管和微丝都有很好的固定作用。4%甲醛、2%戊二醛、95%乙醇对细胞的微丝基本能起到固定作用,而4%甲醛对微管的固定效果略差,2%戊二醛、95%乙醇固定的细胞看不到微管的具体形态结构。结论细胞骨架的固定中需加入骨架稳定剂,且根据实验目的,选择适当的固定液获得最佳标记效果。 展开更多

关键词 细胞骨架 激光共聚焦显微镜 H1299细胞 荧光染色

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人白介素-12转基因马铃薯中hIL-12的表达 被引量：7

5

作者 陈佳瑜 罗果 葛正龙 《安徽农业科学》 CAS 北大核心 2010年第15期7767-7768,共2页

[目的]研究人白介素-12转基因马铃薯中hIL-12的表达。[方法]采用ELISA和WesternBlot,检测转基因马铃薯中hIL-12的表达情况。[结果]转基因马铃薯叶与块茎中均能被hIL-12p70二聚体特异性的抗体识别的蛋白表达,与野生对照组相比均有0.01水... [目的]研究人白介素-12转基因马铃薯中hIL-12的表达。[方法]采用ELISA和WesternBlot,检测转基因马铃薯中hIL-12的表达情况。[结果]转基因马铃薯叶与块茎中均能被hIL-12p70二聚体特异性的抗体识别的蛋白表达,与野生对照组相比均有0.01水平显著差异。WesternBlot分析结果显示,在40kD处有特异性的蛋白条带出现。[结论]所建立的人白介素-12转基因马铃薯表达体系能正确、有效表达hIL-12二聚体。 展开更多

关键词 人白介素-12 表达 马铃薯 转基因植物

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绝对定量PCR快速检测豆豉沙门菌 被引量：4

6

作者 岳昌武 吕玉红 陈泽会 《中国酿造》 CAS 北大核心 2009年第10期127-129,共3页

根据沙门氏菌16srDNA序列设计PCR引物,通过比较3种不同的基因组DNA提取方法,提取待检样品总DNA,进行多基因定量PCR检测。结果表明,该方法简单快速且灵敏度高,在豆豉中的检测灵敏度可达10cfu/g,整个检测时间在4h以内。说明本方法对检测... 根据沙门氏菌16srDNA序列设计PCR引物,通过比较3种不同的基因组DNA提取方法,提取待检样品总DNA,进行多基因定量PCR检测。结果表明,该方法简单快速且灵敏度高,在豆豉中的检测灵敏度可达10cfu/g,整个检测时间在4h以内。说明本方法对检测豆豉中沙门氏菌具有特异性高、灵敏、快速等特点,适用于快速、准确地检测豆豉中沙门氏菌的需要。 展开更多

关键词 豆豉 沙门菌 定量PCR DNA提取

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朽木来源纤维素分解细菌·真菌混合秸秆纤维发酵研究 被引量：3

7

作者 岳昌武 杨明理 刘坤祥 《安徽农业科学》 CAS 北大核心 2009年第3期988-989,共2页

[目的]为研究朽木生态小环境中各种微生物之间的相互作用和农业废弃秸秆的再利用奠定基础。[方法]利用分离的几株来源于云贵高原地区次生林朽木中具有较高纤维素分解活性的细菌(B2、Q1)、真菌(W9)与放线菌(H1)分别和混合发酵纤维素羧甲... [目的]为研究朽木生态小环境中各种微生物之间的相互作用和农业废弃秸秆的再利用奠定基础。[方法]利用分离的几株来源于云贵高原地区次生林朽木中具有较高纤维素分解活性的细菌(B2、Q1)、真菌(W9)与放线菌(H1)分别和混合发酵纤维素羧甲基纤维素钠和滤纸等底物,研究碳源种类、培养时间对纤维素分解酶活的影响。[结果]分离的4株菌及混合菌在4种碳源上均能良好生长,其中B2和H1在羧甲基纤维素钠为碳源培养72h的纤维素酶活性最高,分别为61.9 U和57.7U;混合菌在各种碳源中发酵活力均较低;混合发酵较不同菌株单独发酵产生还原糖总量略有降低;在以玉米秸秆为唯一碳源的培养基上各种菌的纤维素分解酶活性随培养时间的延长逐渐增加。[结论]混合菌的纤维素分解活性均低于各种菌单独发酵。 展开更多

关键词 纤维素分解菌 混合发酵 纤维素 还原糖

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卡托普利对高血压病患者红细胞钠和钙离子转运的影响 被引量：2

8

作者 石蓓 王丕荣 +1 位作者 周晓兰 马淑玉 《中国循环杂志》 CSCD 1993年第4期199-200,共2页

本文观察了高血压病(EH)患者红细胞膜钠泵、钙泵活性和红细胞内离子浓度的变化,以及卡托普利对其的影响。结果表明,59例EH患者钠泵和钙泵活性显著低于正常人,细胞内钠和钙离子浓度显著高于正常人。其中23例经卡托普利治疗后,钙泵活性升... 本文观察了高血压病(EH)患者红细胞膜钠泵、钙泵活性和红细胞内离子浓度的变化,以及卡托普利对其的影响。结果表明,59例EH患者钠泵和钙泵活性显著低于正常人,细胞内钠和钙离子浓度显著高于正常人。其中23例经卡托普利治疗后,钙泵活性升高,细胞内钙离子浓度下降,其升高或减少的程度与血压的下降之间有显著相关性。提示EH患者存在钠和钙离子转运障碍,卡托普利对其有一定影响。 展开更多

关键词 高血压 红细胞 钠泵 钙泵 卡托普利

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利用精子介导法建立hHT/hDAF双基因转移小鼠模型 被引量：1

9

作者 郭战军 马毅 +6 位作者 李三华 韩瑞发 李胜芝 孙光 乔宝民 马腾骧 陈永福 《华北农学报》 CSCD 北大核心 2010年第3期43-46,共4页

为探讨超急排斥反应(Hyperacute rejection,HAR)及延迟性异种排斥反应(Delayed xenograft rejection,DXR)的分子调控机制,采用优化的精子介导法(Sperm-mediated gene transfer,SMGT)对建立hHT/hDAF双基因转移小鼠模型进行了研究。结果表... 为探讨超急排斥反应(Hyperacute rejection,HAR)及延迟性异种排斥反应(Delayed xenograft rejection,DXR)的分子调控机制,采用优化的精子介导法(Sperm-mediated gene transfer,SMGT)对建立hHT/hDAF双基因转移小鼠模型进行了研究。结果表明,应用树枝状聚合物(Dendrimers)优化SMGT后,2细胞胚GFP+RFP的阳性率达到4.51%,同对照组相比差异极显著(P<0.01)。选取标记基因GFP+RFP双阳性的胚胎进行移植后获得36只仔鼠,PCR及Southern Blot检测结果表明,17只小鼠PCR结果呈hHT+hDAF双阳性,其中5只小鼠Southern Blot结果呈hHT+hDAF双阳性。上述结果表明,成功建立了Hht/hDAF双基因转移小鼠模型。 展开更多

关键词 精子介导法 双基因 HHT hDAF 转基因 小鼠

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小鼠孤雌胚胎体外共培养体系的建立 被引量：1

10

作者 何志全 陈伟 +1 位作者 李三华 刘淑娟 《安徽农业科学》 CAS 北大核心 2011年第14期8643-8645,共3页

[目的]在输卵管上皮细胞和/或垂体细胞饲养层下培养小鼠孤雌胚胎,探讨促进小鼠孤雌胚发育突破2-cell阻滞的机制,建立完善的培养体系。[方法]复式激活小鼠卵母细胞后分别在不同饲养层的CZB培养液中进行培养,并观察、比较各培养条件下孤... [目的]在输卵管上皮细胞和/或垂体细胞饲养层下培养小鼠孤雌胚胎,探讨促进小鼠孤雌胚发育突破2-cell阻滞的机制,建立完善的培养体系。[方法]复式激活小鼠卵母细胞后分别在不同饲养层的CZB培养液中进行培养,并观察、比较各培养条件下孤雌胚胎的发育情况。[结果]培养至24 h,各组无显著差异,都有较高卵裂率。培养至48 h,2类饲养层细胞下的孤雌胚胎48-cell发育效果好,与单独一类饲养层细胞培养差异显著,与对照组比较差异极显著。培养至96 h,2类饲养层细胞下有49.4%（42/85）孤雌胚胎发育为桑囊胚,与其他各组比较差异极显著。[结论]含有输卵管上皮细胞＋垂体细胞的CZB培养液可有效促进小鼠孤雌胚胎发育突破2-cell阻滞,并进一步提高其发育率。 展开更多

关键词 共培养 输卵管上皮细胞 垂体细胞 孤雌胚胎

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人白细胞介素-12的纯化及鉴定 被引量：2

11

作者 黄进 罗果 葛正龙 《安徽农业科学》 CAS 北大核心 2009年第14期6353-6355,共3页

[目的]利用人白细胞介素-12(human interleukin 12,hIL-12)转基因马铃薯,探讨hIL-12的纯化条件。[方法]提取转基因马铃薯中的总蛋白,hIL-12的分离纯化步骤包括超滤、MKF-AIW阴离子交换层析、MKF-CIC阳离子交换层析。在阴离子交换层析吸... [目的]利用人白细胞介素-12(human interleukin 12,hIL-12)转基因马铃薯,探讨hIL-12的纯化条件。[方法]提取转基因马铃薯中的总蛋白,hIL-12的分离纯化步骤包括超滤、MKF-AIW阴离子交换层析、MKF-CIC阳离子交换层析。在阴离子交换层析吸附过程中采用试管法选择最佳吸附pH值,选择洗脱过程最佳洗脱pH值;选择阳离子交换层析洗脱过程最佳洗脱pH值;ELISA法测定各纯化阶段收集的上清液或洗脱峰中的hIL-12的含量;非还原SDS-PAGE电泳鉴定蛋白纯度;Western Blot检测纯化的hIL-12。[结果]阴离子交换层析吸附过程最佳吸附pH值为7.5,洗脱过程最佳洗脱pH值为7,阳离子交换层析洗脱过程最佳洗脱pH值为6.5。纯化的hIL-12经非还原SDS-PAGE分析蛋白纯度为91%。Western Blot分析结果表明,在40 kD处有特异的蛋白条带出现。[结论]hIL-12转基因马铃薯经总蛋白提取,超滤,阴离子交换层析,阳离子交换层析纯化,获得了高纯度的hIL-12。 展开更多

关键词 人白细胞介素-12 纯化 转基因马铃薯

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从转基因马铃薯中纯化的人白细胞介素-12的生物学活性分析 被引量：1

12

作者 黄进 罗果 葛正龙 《安徽农业科学》 CAS 北大核心 2009年第16期7334-7334,7347,共2页

[目的]研究从转人白细胞介素-12(hIL-12)基因马铃薯中纯化的hIL-12的生物学活性。[方法]MTT法检测纯化的hIL-12体外抗肿瘤作用。[结果]纯化的hIL-12在体外对NK敏感肿瘤细胞K562有杀伤作用,而野生对照组无作用。[结论]试验中从转hIL-12... [目的]研究从转人白细胞介素-12(hIL-12)基因马铃薯中纯化的hIL-12的生物学活性。[方法]MTT法检测纯化的hIL-12体外抗肿瘤作用。[结果]纯化的hIL-12在体外对NK敏感肿瘤细胞K562有杀伤作用,而野生对照组无作用。[结论]试验中从转hIL-12基因马铃薯中纯化的hIL-12具有生物学活性。 展开更多

关键词 人白细胞介素-12 纯化 生物学活性 转基因马铃薯

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D140型大孔树脂纯化荷叶总黄酮的研究 被引量：1

13

作者 刘云 刘良燚 朱欣婷 《安徽农业科学》 CAS 北大核心 2009年第32期16163-16164,16184,共3页

[目的]为荷叶总黄酮的开发利用提供依据。[方法]先采用静态吸附法对5种不同型号的大孔树脂进行筛选,再利用动态吸附法对筛选出的大孔树脂进行进一步考察。[结果]D140型大孔树脂能更有效地纯化荷叶黄酮。当上样浓度为1.012～4.048mg/ml,... [目的]为荷叶总黄酮的开发利用提供依据。[方法]先采用静态吸附法对5种不同型号的大孔树脂进行筛选,再利用动态吸附法对筛选出的大孔树脂进行进一步考察。[结果]D140型大孔树脂能更有效地纯化荷叶黄酮。当上样浓度为1.012～4.048mg/ml,上样速率为3BV/h时,荷叶黄酮的回收率较高。上样体积为5.5BV时,树脂基本达到动态饱和吸附。当乙醇浓度为60%、洗脱速率为2BV/h时,洗脱率最大,产物纯度最高。[结论]D140型大孔树脂纯化荷叶总黄酮的最佳工艺:以浓度为4.048mg/ml的荷叶总黄酮上样,上样速率控制在3BV/h左右,上样体积为5.5BV,再用3BV60%乙醇以2BV/h的速率洗脱,获得的荷叶总黄酮纯度为49.4%。 展开更多

关键词 荷叶 大孔树脂 总黄酮

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一株产糖纤维素分解青霉的分离及发酵条件优化

14

作者 岳昌武 吕玉红 +2 位作者 莫宁萍 刘坤祥 凌锌 《中国酿造》 CAS 北大核心 2009年第4期43-45,共3页

从云贵高原地区次生林朽木中分离得到1株具有较高纤维素分解活性的青霉,PCR扩增18srDNA结果显示该菌属青霉。2%纤维素羧甲基纤维素钠、滤纸、脱脂棉、玉米叶等底物发酵结果表明该酶系具有较强的分解纤维素能力,不同温度下培养,粗酶活变... 从云贵高原地区次生林朽木中分离得到1株具有较高纤维素分解活性的青霉,PCR扩增18srDNA结果显示该菌属青霉。2%纤维素羧甲基纤维素钠、滤纸、脱脂棉、玉米叶等底物发酵结果表明该酶系具有较强的分解纤维素能力,不同温度下培养,粗酶活变化较大,以29℃最佳。 展开更多

关键词 纤维素分解青霉 18srDNA 菌种鉴定

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hHT/GFP融合基因表达载体的构建及在小鼠成纤维细胞中的表达

15

作者 郭战军 马毅 +5 位作者 张钥 李三华 王广友 杨慧祥 孙光 乔宝民 《西北农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第9期25-28,共4页

为探讨超急排斥反应(hyperacute rejection,HAR)及延迟性异种排斥反应(delayed xenograft rejec-tion,DXR)分子调控机制,进行-α1,2岩藻糖苷转移酶基因(hHT)与绿色荧光蛋白基因(green fluorescent protein,GFP)融合表达载体pEGFP-C1-hH... 为探讨超急排斥反应(hyperacute rejection,HAR)及延迟性异种排斥反应(delayed xenograft rejec-tion,DXR)分子调控机制,进行-α1,2岩藻糖苷转移酶基因(hHT)与绿色荧光蛋白基因(green fluorescent protein,GFP)融合表达载体pEGFP-C1-hHT的构建及在小鼠成纤维细胞表达的研究。采用脂质体法转染小鼠成纤维细胞48 h后观察到GFP阳性细胞。同时对GFP阳性小鼠成纤维细胞进行PCR及Western blot,检测hHT基因的整合及表达情况。PCR结果表明hHT基因整合入小鼠基因组,Western blot检测到hHT基因的表达。研究结果表明,成功克隆hHT基因并构建了融合表达载体pEGFP-C1-hHT,可应用于进一步转基因研究。 展开更多

关键词 hHT基因 GFP基因 融合表达 小鼠 成纤维细胞

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连接方法对重组效率影响的比较研究

16

作者 莫宁萍 岳昌武 +1 位作者 刘坤祥 凌锌 《安徽农业科学》 CAS 北大核心 2008年第8期3155-3156,共2页

[目的]为探索一种适于连接PCR产物和不同粘端的新方法。[方法]分别采用冻融法、割胶法、试剂盒法和牙签法连接PCR产物与质粒DNA以及酶切产物与质粒DNA,比较不同连接方法对重组效率的影响。[结果]采用冻融法和割胶法连接PCR产物与pMD18-T... [目的]为探索一种适于连接PCR产物和不同粘端的新方法。[方法]分别采用冻融法、割胶法、试剂盒法和牙签法连接PCR产物与质粒DNA以及酶切产物与质粒DNA,比较不同连接方法对重组效率的影响。[结果]采用冻融法和割胶法连接PCR产物与pMD18-T,其连接效率分别为94.00%和93.00%,略高于试剂盒法和牙签法。采用冻融法和割胶法连接酶切产物的重组效率分别为86.67%和88.00%,略高于试剂盒法和牙签法。牙签法简化了连接前DNA相关操作,具有较高的连接效率,完全能够满足普通连接反应,特别是粘端连接反应要求。[结论]割胶法具有很高的重组效率和转化效率,可以满足普通连接反应、文库构建对连接效率和转化效率的要求,具有一定的应用前景。 展开更多

关键词 重组效率 转化 分子克隆 体外连接

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转基因马铃薯中纯化人白介素-12的生物学活性分析

17

作者 罗果 黄进 葛正龙 《安徽农业科学》 CAS 北大核心 2010年第3期1173-1176,共4页

分析了转基因马铃薯中纯化人白介素-12(hIL-12)的生物学活性。结果表明,hIL-12纯化品在体外能刺激植物凝集素(PHA)活化的外周血单个核细胞(PBMC)增殖;hIL-12纯化品对人肝癌细胞HepG2.2.15的生长具有抑制作用,且其抑制效果随hIL-12浓度... 分析了转基因马铃薯中纯化人白介素-12(hIL-12)的生物学活性。结果表明,hIL-12纯化品在体外能刺激植物凝集素(PHA)活化的外周血单个核细胞(PBMC)增殖;hIL-12纯化品对人肝癌细胞HepG2.2.15的生长具有抑制作用,且其抑制效果随hIL-12浓度的升高而增强;hIL-12纯化品在体外对乙肝病毒DNA的复制和表面抗原、e抗原的分泌产生抑制作用。 展开更多

关键词 转基因马铃薯 人白介素-12 生物活性

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