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柯萨奇病毒A组16型感染性克隆的构建及免疫原性评价
1
作者
李巨银
葛君
+4 位作者
马超
张建辉
闫伟
孙娇娇
李建强
《中国动物传染病学报》
北大核心
2025年第2期26-34,共9页
柯萨奇病毒A组16型(CVA16)是引发手足口病流行与暴发的重要病原体之一,给公共卫生领域带来了严峻挑战。本研究通过体外构建柯萨奇病毒CVA16的eDNA感染性克隆,进而对其感染能力、连续传代稳定性以及体内免疫原性展开深入探究,旨在为CVA1...
柯萨奇病毒A组16型(CVA16)是引发手足口病流行与暴发的重要病原体之一,给公共卫生领域带来了严峻挑战。本研究通过体外构建柯萨奇病毒CVA16的eDNA感染性克隆,进而对其感染能力、连续传代稳定性以及体内免疫原性展开深入探究,旨在为CVA16疫苗的研发提供科学依据。本研究利用eGFP报告基因构建CVA16微基因组平台,并通过反向遗传技术拯救出CVA16感染性克隆,对其生物学特性进行全面评估。结果显示:构建的CVA16全长cDNA质粒经限制性内切酶双酶切,获得7500 bp目的条带和3500 bp载体条带,全基因测序验证cDNA序列与理论序列完全一致;细胞形态学鉴定显示,CVA16组可见典型肠道病毒致细胞病变效应,连续传代后仍保持稳定感染性及正常噬斑形态;小鼠免疫实验表明,该克隆可诱导机体产生高滴度特异性抗体和中和抗体,超离浓缩后中和抗体滴度为原液免疫组的2倍。结果表明,通过反向遗传技术获得的CVA16感染性克隆在体外可稳定传代,并具有较强的免疫原性,可为病毒基因功能、感染机制及疫苗研发提供基础。
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关键词
柯萨奇病毒A组16型
反向遗传
感染性克隆
中和抗体
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职称材料
脂肪和肥胖相关基因调节谷胱甘肽过氧化物酶4 m^(6)A修饰抑制3T3-L1前脂肪细胞分化
2
作者
黄麟媛
高静
+1 位作者
孙一锦
冀厚静
《中国生物化学与分子生物学报》
北大核心
2025年第11期1687-1699,共13页
脂肪和肥胖相关基因(fat mass and obesity associated gene,FTO)作为一种重要的RNA N 6-甲基腺苷(N 6-methyladenosine,m^(6)A)去甲基化酶,被报道可通过调节m^(6)A修饰水平影响谷胱甘肽过氧化物酶4(glutathion peroxidase 4,GPX4)的表...
脂肪和肥胖相关基因(fat mass and obesity associated gene,FTO)作为一种重要的RNA N 6-甲基腺苷(N 6-methyladenosine,m^(6)A)去甲基化酶,被报道可通过调节m^(6)A修饰水平影响谷胱甘肽过氧化物酶4(glutathion peroxidase 4,GPX4)的表达。GPX4是抑制铁死亡(ferroptosis)的关键分子,而铁死亡信号的激活已被证实可显著减少小鼠原代脂肪细胞和高脂饮食喂养小鼠的脂质累积。然而,Gpx 4 mRNA中具体的m^(6)A修饰位点尚未明确,且Gpx 4在小鼠脂肪细胞分化过程中的调控作用亦不清楚。为此,本研究旨在明确小鼠Gpx 4 mRNA中的m^(6)A修饰位点,并深入探讨Gpx 4对3T3-L1脂肪细胞分化的调控作用。通过生物信息学分析结合MeRIP-qPCR和SELECT实验验证,本研究确定Gpx 4 mRNA的一个关键m^(6)A修饰位点位于距其转录起始位点303 bp处。利用CRISPR-Cas9技术在3T3-L1细胞中敲低GPX 4并进行成脂诱导分化,油红O结果显示,GPX 4敲低显著减少了胞内脂滴累积(P<0.001);RT-PCR和Western印迹分析进一步表明,关键成脂分化基因(C/ebpα、Pparγ、Lpl、Fabp 4)表达情况显著下降(P<0.001)。为探究Gpx 4调控作用的时间特异性,在成脂分化不同阶段给予GPX4抑制剂RSL3(100 nmol/L)。结果显示,在有丝分裂扩增期给予RSL3处理,能显著抑制成脂相关基因(Fabp4、Pparγ和Adipoq)表达并阻碍脂肪分化进程。综上所述,本研究不仅明确了小鼠Gpx 4 mRNA中一个关键的m^(6)A修饰位点(位于转录起始位点303 bp),更重要的是揭示了Gpx 4在3T3-L1脂肪细胞分化中扮演的关键调控角色。这些发现不仅将FTO-m^(6)A-GPX4-铁死亡调控轴与脂肪细胞分化联系起来,也为深入理解肥胖的病理机制提供了新的理论依据和潜在干预靶点。
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关键词
脂肪和肥胖相关基因
m^(6)A甲基化修饰
谷胱甘肽过氧化物酶4
有丝分裂扩增期
脂肪细胞分化
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职称材料
题名
柯萨奇病毒A组16型感染性克隆的构建及免疫原性评价
1
作者
李巨银
葛君
马超
张建辉
闫伟
孙娇娇
李建强
机构
江苏农牧科技职业学院动物医学院
远
大赛
威信
生命科学
(
南京
)
有限公司
出处
《中国动物传染病学报》
北大核心
2025年第2期26-34,共9页
基金
泰州市科技支撑计划(农业)项目(TN202002,NSFZP202204)
江苏高校“青蓝工程”项目(苏教师函[2022]29号)。
文摘
柯萨奇病毒A组16型(CVA16)是引发手足口病流行与暴发的重要病原体之一,给公共卫生领域带来了严峻挑战。本研究通过体外构建柯萨奇病毒CVA16的eDNA感染性克隆,进而对其感染能力、连续传代稳定性以及体内免疫原性展开深入探究,旨在为CVA16疫苗的研发提供科学依据。本研究利用eGFP报告基因构建CVA16微基因组平台,并通过反向遗传技术拯救出CVA16感染性克隆,对其生物学特性进行全面评估。结果显示:构建的CVA16全长cDNA质粒经限制性内切酶双酶切,获得7500 bp目的条带和3500 bp载体条带,全基因测序验证cDNA序列与理论序列完全一致;细胞形态学鉴定显示,CVA16组可见典型肠道病毒致细胞病变效应,连续传代后仍保持稳定感染性及正常噬斑形态;小鼠免疫实验表明,该克隆可诱导机体产生高滴度特异性抗体和中和抗体,超离浓缩后中和抗体滴度为原液免疫组的2倍。结果表明,通过反向遗传技术获得的CVA16感染性克隆在体外可稳定传代,并具有较强的免疫原性,可为病毒基因功能、感染机制及疫苗研发提供基础。
关键词
柯萨奇病毒A组16型
反向遗传
感染性克隆
中和抗体
Keywords
Coxsackievirus A group 16
reverse genetics
infectious clone
neutralizing antibody
分类号
R392-33 [医药卫生—免疫学]
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职称材料
题名
脂肪和肥胖相关基因调节谷胱甘肽过氧化物酶4 m^(6)A修饰抑制3T3-L1前脂肪细胞分化
2
作者
黄麟媛
高静
孙一锦
冀厚静
机构
江苏卫生健康职业学院
远
大赛
威信
生命科学
(
南京
)
有限公司
出处
《中国生物化学与分子生物学报》
北大核心
2025年第11期1687-1699,共13页
基金
江苏省卫生健康委医学科研项目(No.H2023038)资助。
文摘
脂肪和肥胖相关基因(fat mass and obesity associated gene,FTO)作为一种重要的RNA N 6-甲基腺苷(N 6-methyladenosine,m^(6)A)去甲基化酶,被报道可通过调节m^(6)A修饰水平影响谷胱甘肽过氧化物酶4(glutathion peroxidase 4,GPX4)的表达。GPX4是抑制铁死亡(ferroptosis)的关键分子,而铁死亡信号的激活已被证实可显著减少小鼠原代脂肪细胞和高脂饮食喂养小鼠的脂质累积。然而,Gpx 4 mRNA中具体的m^(6)A修饰位点尚未明确,且Gpx 4在小鼠脂肪细胞分化过程中的调控作用亦不清楚。为此,本研究旨在明确小鼠Gpx 4 mRNA中的m^(6)A修饰位点,并深入探讨Gpx 4对3T3-L1脂肪细胞分化的调控作用。通过生物信息学分析结合MeRIP-qPCR和SELECT实验验证,本研究确定Gpx 4 mRNA的一个关键m^(6)A修饰位点位于距其转录起始位点303 bp处。利用CRISPR-Cas9技术在3T3-L1细胞中敲低GPX 4并进行成脂诱导分化,油红O结果显示,GPX 4敲低显著减少了胞内脂滴累积(P<0.001);RT-PCR和Western印迹分析进一步表明,关键成脂分化基因(C/ebpα、Pparγ、Lpl、Fabp 4)表达情况显著下降(P<0.001)。为探究Gpx 4调控作用的时间特异性,在成脂分化不同阶段给予GPX4抑制剂RSL3(100 nmol/L)。结果显示,在有丝分裂扩增期给予RSL3处理,能显著抑制成脂相关基因(Fabp4、Pparγ和Adipoq)表达并阻碍脂肪分化进程。综上所述,本研究不仅明确了小鼠Gpx 4 mRNA中一个关键的m^(6)A修饰位点(位于转录起始位点303 bp),更重要的是揭示了Gpx 4在3T3-L1脂肪细胞分化中扮演的关键调控角色。这些发现不仅将FTO-m^(6)A-GPX4-铁死亡调控轴与脂肪细胞分化联系起来,也为深入理解肥胖的病理机制提供了新的理论依据和潜在干预靶点。
关键词
脂肪和肥胖相关基因
m^(6)A甲基化修饰
谷胱甘肽过氧化物酶4
有丝分裂扩增期
脂肪细胞分化
Keywords
fat mass and obesity associated gene(FTO)
m^(6)A modification
glutathione peroxidase 4(GPX4)
mitotic clonal expansion
adipogenesis
分类号
Q591.5 [生物学—生物化学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
柯萨奇病毒A组16型感染性克隆的构建及免疫原性评价
李巨银
葛君
马超
张建辉
闫伟
孙娇娇
李建强
《中国动物传染病学报》
北大核心
2025
0
在线阅读
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职称材料
2
脂肪和肥胖相关基因调节谷胱甘肽过氧化物酶4 m^(6)A修饰抑制3T3-L1前脂肪细胞分化
黄麟媛
高静
孙一锦
冀厚静
《中国生物化学与分子生物学报》
北大核心
2025
0
在线阅读
下载PDF
职称材料
已选择
0
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