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微波结合紫外诱变选育辅酶Q_(10)高产菌株 被引量:6
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作者 朱俊丰 郑方亮 +8 位作者 艾海新 朱春玉 季士坤 丁国伟 白婷婷 王加友 李雪娇 朱光宇 刘宏生 《微生物学杂志》 CAS CSCD 2010年第2期57-62,共6页
以根瘤土壤杆菌LNUB335为出发菌株,以维生素K3和NaN3双抗性为筛选标记,在根瘤土壤杆菌中首次利用紫外线及微波联合诱变处理,获得1株生产性能比LNUB335显著提高的突变株ARN007,其CoQ10产量为12.01mg/L,较出发菌株提高68.67%,每克干细胞含... 以根瘤土壤杆菌LNUB335为出发菌株,以维生素K3和NaN3双抗性为筛选标记,在根瘤土壤杆菌中首次利用紫外线及微波联合诱变处理,获得1株生产性能比LNUB335显著提高的突变株ARN007,其CoQ10产量为12.01mg/L,较出发菌株提高68.67%,每克干细胞含CoQ102.46mg,较出发菌株提高38.20%。通过传代实验证明该突变株的遗传性稳定,可作为进一步研究的实验菌株。 展开更多
关键词 辅酶Q10 诱变育种 微波
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H5N1亚型禽流感病毒NS1基因截短体的克隆与原核表达 被引量:3
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作者 郑方亮 朱春玉 +7 位作者 商玲玲 马杰良 孙婷婷 艾海新 朱俊峰 段艳婷 朱应 刘宏生 《微生物学杂志》 CAS CSCD 2012年第3期1-6,共6页
禽流感病毒H5N1 NS1蛋白是一种非结构蛋白,在病毒感染过程中发挥着重要的作用。构建基因截短的重组蛋白,可为进一步研究NS1不同结构域与宿主蛋白间的相互作用奠定基础。在成功克隆禽流感病毒H5N1全长NS1基因并测序的基础上,将部分截短... 禽流感病毒H5N1 NS1蛋白是一种非结构蛋白,在病毒感染过程中发挥着重要的作用。构建基因截短的重组蛋白,可为进一步研究NS1不同结构域与宿主蛋白间的相互作用奠定基础。在成功克隆禽流感病毒H5N1全长NS1基因并测序的基础上,将部分截短基因序列克隆到表达载体pET28a(+)上,构建基因截短的重组表达质粒pET28a-NS1-RBD和pET28a-NS1-ED,转化大肠埃希菌BL21(DE3),阳性重组质粒经IPTG诱导表达后进行SDS-PAGE检测,获得预期蛋白的表达,然后利用Ni-NTA树脂蛋白纯化系统对重组蛋白进行纯化,并通过Western Blotting进一步确认NS1及截短体蛋白的表达。结果表明,实验成功构建禽流感病毒H5N1亚型的NS1蛋白截短体,并在大肠埃希菌中高效表达,这为进一步研究NS1蛋白不同结构域与宿主蛋白的相互作用提供了实验材料,为深入研究NS1蛋白的生物学功能奠定了坚实基础。 展开更多
关键词 禽流感病毒H5N1 NS1 截短体 原核表达 纯化
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禽流感病毒NS1蛋白亚细胞定位研究 被引量:1
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作者 朱春玉 孙婷婷 +5 位作者 郑方亮 艾海新 朱俊丰 王宁 商玲玲 刘宏生 《动物医学进展》 CSCD 北大核心 2011年第10期10-14,共5页
为深入研究NS1蛋白的生物学功能,了解NS1蛋白在哺乳动物细胞中的分布和亚细胞定位情况。采用RT-PCR扩增出禽流感病毒NS1基因片段,克隆至载体pEGFP-N1,经酶切和测序鉴定后,将构建的重组质粒pEGFP-N1-NS1经脂质体介导转染293T细胞和Hela细... 为深入研究NS1蛋白的生物学功能,了解NS1蛋白在哺乳动物细胞中的分布和亚细胞定位情况。采用RT-PCR扩增出禽流感病毒NS1基因片段,克隆至载体pEGFP-N1,经酶切和测序鉴定后,将构建的重组质粒pEGFP-N1-NS1经脂质体介导转染293T细胞和Hela细胞,在荧光显微镜和激光扫描共聚焦显微镜下观察NS1在细胞中的分布、亚细胞定位情况。成功构建了真核重组表达质粒pEGFP-N1-NS1,并在293T细胞及Hela细胞中得到高效表达。融合蛋白发出的绿色荧光表明NS1蛋白主要分布在细胞核,在胞浆中有少量表达。本研究成功在哺乳动物细胞中表达NS1蛋白,并对其进行亚细胞定位,为流感病毒的相关功能研究奠定了基础。 展开更多
关键词 禽流感病毒 NS1蛋白 亚细胞定位
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