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神经元抑制性沉默元件双链RNA慢病毒载体的构建与鉴定
被引量:
1
1
作者
李宏图
刘晓玉
庞希宁
《中国医学科学院学报》
CAS
CSCD
北大核心
2009年第6期760-764,803,共6页
目的构建神经元抑制性沉默元件(RE-1/NRSE)双链RNA的慢病毒载体。方法根据RE-1/NRSE序列合成靶序列的寡核苷酸序列,退火形成双链DNA,与经HpaⅠ和XhoⅠ双酶切后的pGC-LV载体连接产生L-smRE-1/NRSE慢病毒载体,采用PCR和测序对阳性克隆进...
目的构建神经元抑制性沉默元件(RE-1/NRSE)双链RNA的慢病毒载体。方法根据RE-1/NRSE序列合成靶序列的寡核苷酸序列,退火形成双链DNA,与经HpaⅠ和XhoⅠ双酶切后的pGC-LV载体连接产生L-smRE-1/NRSE慢病毒载体,采用PCR和测序对阳性克隆进行鉴定。用L-smRE-1/NRSE和包装质粒pHelper 1.0、pHelper2.0共转染293T细胞,包装产生慢病毒颗粒,在倒置荧光显微镜下观察293T细胞中绿色荧光蛋白的表达量,并计算病毒滴度,初步观察其对大鼠间充质干细胞的转染效率。结果PCR和测序证实,构建出了RE-1/NRSE双链RNA的慢病毒载体L-smNRSE/RE-1。包装慢病毒,浓缩病毒悬液的滴度为4×108TU/ml。慢病毒颗粒能稳定转染大鼠间充质干细胞,当感染复数为80时,感染效率达100%。结论成功构建了RE-1/NRSE dsRNA的慢病毒表达载体。
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关键词
神经元抑制性沉默元件
双链RNA
慢病毒载体
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职称材料
神经元限制性沉默因子与大鼠骨髓间充质干细胞向神经元诱导分化的关系
2
作者
刘斌
李宏图
+3 位作者
张涛
孟凡彪
刘晓玉
庞希宁
《中国医学科学院学报》
CAS
CSCD
北大核心
2009年第6期702-706,799,共6页
目的分析神经元限制性沉默因子(NRSF)以及NRSF调控的基因在β-巯基乙醇诱导大鼠骨髓间充质干细胞(MSCs)向神经元分化过程中表达的变化,探讨NRSF在大鼠MSCs向神经元分化的作用及MSCs向神经元分化的机制。方法采用β-巯基乙醇、无血清的D...
目的分析神经元限制性沉默因子(NRSF)以及NRSF调控的基因在β-巯基乙醇诱导大鼠骨髓间充质干细胞(MSCs)向神经元分化过程中表达的变化,探讨NRSF在大鼠MSCs向神经元分化的作用及MSCs向神经元分化的机制。方法采用β-巯基乙醇、无血清的DMEM培养液和二甲基亚砜诱导大鼠MSCs分化成神经元,再通过实时定量PCR分析NRSF以及NRSF调控的基因在诱导前后表达的变化。结果应用β-巯基乙醇、无血清DMEM培养液和二甲基亚砜的诱导方案可以将MSCs诱导分化成神经元样细胞,诱导后的细胞神经元标记物神经元特异性烯醇化酶呈阳性,实时定量PCR检测NRSF基因表达显著下调,NRSF的靶基因神经营养酪氨酸激酶三型受体、突触相关蛋白25、L1细胞黏附分子、神经元钙结合蛋白受体表达有不同程度的上调。结论MSCs的神经元分化与NRSF下调及其调控的神经元分化相关基因表达上调有关。NRSF很可能是MSCs向神经元方向分化的关键基因,抑制NRSF表达可能是促进MSCs向神经元分化的关键步骤。
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关键词
骨髓间充质干细胞
神经元限制性沉默因子
分化
神经元
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职称材料
题名
神经元抑制性沉默元件双链RNA慢病毒载体的构建与鉴定
被引量:
1
1
作者
李宏图
刘晓玉
庞希宁
机构
中国医科大学细胞生物学卫生部
重点
实验室
发育生物学教研室
辽宁省计划生育科学研究院辽宁省生殖医学重点实验室
出处
《中国医学科学院学报》
CAS
CSCD
北大核心
2009年第6期760-764,803,共6页
基金
辽宁省自然科学基金(20062090)
辽宁省教育厅科学技术研究项目(2004d227)~~
文摘
目的构建神经元抑制性沉默元件(RE-1/NRSE)双链RNA的慢病毒载体。方法根据RE-1/NRSE序列合成靶序列的寡核苷酸序列,退火形成双链DNA,与经HpaⅠ和XhoⅠ双酶切后的pGC-LV载体连接产生L-smRE-1/NRSE慢病毒载体,采用PCR和测序对阳性克隆进行鉴定。用L-smRE-1/NRSE和包装质粒pHelper 1.0、pHelper2.0共转染293T细胞,包装产生慢病毒颗粒,在倒置荧光显微镜下观察293T细胞中绿色荧光蛋白的表达量,并计算病毒滴度,初步观察其对大鼠间充质干细胞的转染效率。结果PCR和测序证实,构建出了RE-1/NRSE双链RNA的慢病毒载体L-smNRSE/RE-1。包装慢病毒,浓缩病毒悬液的滴度为4×108TU/ml。慢病毒颗粒能稳定转染大鼠间充质干细胞,当感染复数为80时,感染效率达100%。结论成功构建了RE-1/NRSE dsRNA的慢病毒表达载体。
关键词
神经元抑制性沉默元件
双链RNA
慢病毒载体
Keywords
repressor element-1/neuron-restrictive silencer element
double-stranded RNA
lentivirus vector
分类号
Q78 [生物学—分子生物学]
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职称材料
题名
神经元限制性沉默因子与大鼠骨髓间充质干细胞向神经元诱导分化的关系
2
作者
刘斌
李宏图
张涛
孟凡彪
刘晓玉
庞希宁
机构
中国医科大学细胞生物学卫生部
重点
实验室
发育生物学教研室
辽宁省计划生育科学研究院辽宁省生殖医学重点实验室
出处
《中国医学科学院学报》
CAS
CSCD
北大核心
2009年第6期702-706,799,共6页
基金
辽宁省自然科学基金研究项目(20062090)
辽宁省教育厅科学技术研究项目(2004d227)~~
文摘
目的分析神经元限制性沉默因子(NRSF)以及NRSF调控的基因在β-巯基乙醇诱导大鼠骨髓间充质干细胞(MSCs)向神经元分化过程中表达的变化,探讨NRSF在大鼠MSCs向神经元分化的作用及MSCs向神经元分化的机制。方法采用β-巯基乙醇、无血清的DMEM培养液和二甲基亚砜诱导大鼠MSCs分化成神经元,再通过实时定量PCR分析NRSF以及NRSF调控的基因在诱导前后表达的变化。结果应用β-巯基乙醇、无血清DMEM培养液和二甲基亚砜的诱导方案可以将MSCs诱导分化成神经元样细胞,诱导后的细胞神经元标记物神经元特异性烯醇化酶呈阳性,实时定量PCR检测NRSF基因表达显著下调,NRSF的靶基因神经营养酪氨酸激酶三型受体、突触相关蛋白25、L1细胞黏附分子、神经元钙结合蛋白受体表达有不同程度的上调。结论MSCs的神经元分化与NRSF下调及其调控的神经元分化相关基因表达上调有关。NRSF很可能是MSCs向神经元方向分化的关键基因,抑制NRSF表达可能是促进MSCs向神经元分化的关键步骤。
关键词
骨髓间充质干细胞
神经元限制性沉默因子
分化
神经元
Keywords
marrow mesenchyma stem cells
neuronal restricted silencing factor
differentiation
neuron
分类号
R329 [医药卫生—人体解剖和组织胚胎学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
神经元抑制性沉默元件双链RNA慢病毒载体的构建与鉴定
李宏图
刘晓玉
庞希宁
《中国医学科学院学报》
CAS
CSCD
北大核心
2009
1
在线阅读
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职称材料
2
神经元限制性沉默因子与大鼠骨髓间充质干细胞向神经元诱导分化的关系
刘斌
李宏图
张涛
孟凡彪
刘晓玉
庞希宁
《中国医学科学院学报》
CAS
CSCD
北大核心
2009
0
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