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纳豆激酶的原核表达、纯化及其特性分析(英文) 被引量:2
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作者 艾海新 张力 +7 位作者 张新刚 陈思瑶 胡桓 魏洪运 蒙新睿 王天琦 赵健 刘宏生 《微生物学杂志》 CAS CSCD 2017年第1期20-27,共8页
纳豆激酶(Nattokinase)作为一种新型溶解血栓的纤维蛋白溶解酶,有着广阔的市场前景和巨大的产业化潜力。本研究从枯草芽胞杆菌(Bacillus subtilis natto)发酵液中提取、纯化纳豆激酶,依次通过硫酸铵盐析、凝胶过滤层析和疏水层析方法纯... 纳豆激酶(Nattokinase)作为一种新型溶解血栓的纤维蛋白溶解酶,有着广阔的市场前景和巨大的产业化潜力。本研究从枯草芽胞杆菌(Bacillus subtilis natto)发酵液中提取、纯化纳豆激酶,依次通过硫酸铵盐析、凝胶过滤层析和疏水层析方法纯化纳豆激酶,纯化倍数为5.2,纯化率为46.3%。纯化后的纳豆激酶经SDS-PAGE电泳显示相对分子量约为28 kD a,纤维蛋白平板法显示活性为4 580 IU/mg。但纳豆激酶在枯草芽胞杆菌发酵液中的含量较低,因此在原核表达载体大肠埃希菌(Escherichia coli)BL21(DE3)中克隆并高效表达了纳豆激酶基因,其纳豆激酶产量显著提高,但酶活相对降低。 展开更多
关键词 纳豆激酶 纯化 原核表达
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通过定点突变提高纳豆激酶纤溶活性和热稳定性 被引量:2
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作者 于晓淼 赵允章 +2 位作者 王锋超 孙悦 刘宏生 《微生物学杂志》 CAS CSCD 2023年第2期21-27,共7页
纳豆激酶(Nattokinase, NK)是一种纤溶酶,可溶解血栓,常用于治疗心血管疾病(CVDs)。然而,野生型NK往往表现出很少的纤溶能力和较低的热稳定性,针对如何提高NK的热稳定性和活性开展研究。使用重叠延伸PCR法将NK中位于194位的Ser替换为Pro... 纳豆激酶(Nattokinase, NK)是一种纤溶酶,可溶解血栓,常用于治疗心血管疾病(CVDs)。然而,野生型NK往往表现出很少的纤溶能力和较低的热稳定性,针对如何提高NK的热稳定性和活性开展研究。使用重叠延伸PCR法将NK中位于194位的Ser替换为Pro,为验证突变后的热稳定性,将野生型NK和突变体S194P均在不同温度下孵育相同时间,使用纤维蛋白板法测定二者酶活,验证热稳定性。成功构建了pET-26b-NK_(s194p),测量酶活结果显示,野生型NK和突变体S194P酶活分别达到101.30 IU/mL和123.23 IU/mL,结果表明突变体S194P的酶活比野生型NK高(18.10±2)%,将野生型NK和突变体S194P在60~65℃温度下孵育30 min后测量酶活,野生型NK在63℃时丧失酶活,突变体S194P在65℃时丧失酶活,耐热温度提高2℃。结果表明,突变体S194p的蛋白结构在突变后发生了改变,使NK提高了耐热温度。 展开更多
关键词 纳豆激酶 定点诱变 纤溶活性 热稳定性 分子动力学模拟
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