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AlkB同源蛋白5去除前mRNA加工因子6的mRNA甲基化修饰调控肝细胞癌的细胞增殖
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作者 邹岩 李辉 +1 位作者 姜桂春 谢艳敏 《消化肿瘤杂志(电子版)》 2024年第1期67-75,共9页
目的探讨AlkB同源蛋白5(AlkBhomolog5,ALKBH5)在肝细胞癌(hepatocellularcarcinoma,HCC)的细胞增殖中的作用。方法通过癌症基因组图谱数据库分析ALKBH5和前mRNA加工因子6(pre-mRNA processing factor 6,PRPF6)在HCC组织中的表达水平。... 目的探讨AlkB同源蛋白5(AlkBhomolog5,ALKBH5)在肝细胞癌(hepatocellularcarcinoma,HCC)的细胞增殖中的作用。方法通过癌症基因组图谱数据库分析ALKBH5和前mRNA加工因子6(pre-mRNA processing factor 6,PRPF6)在HCC组织中的表达水平。采用实时荧光定量聚合酶链反应和蛋白质印迹法检测ALKBH5和PRPF6在HCC细胞系(Huh7和Hep3B)中的mRNA和蛋白表达水平。荧光原位杂交确定ALKBH5和PRPF6在HCC细胞系(Huh7和Hep3B)中的亚细胞定位。在免疫沉淀复合物中检测PRPF6的N6-甲基腺苷甲基化水平。通过过表达和敲低基因表达的方法,将Huh7细胞和Hep3B细胞分别进行转染,分组为sh-NC组(阴性对照转染细胞)、sh-ALKBH5实验组(ALKBH5干扰序列转染细胞)、sh-ALKBH5+ex-PRPF6实验组(ALKBH5干扰序列转染+PRPF6 pcDNA 3.1过表达质粒转染细胞),并采用CCK-8和染色增殖试验检测各组细胞的增殖情况。裸鼠异种移植瘤实验验证ALKBH5和PRPF6在体内的生物学功能。蛋白质印迹法检测各组细胞中AKT/mTOR通路相关蛋白的表达水平。结果HCC细胞中ALKBH5的表达上调,可以去除PRPF6的甲基化修饰。体外和体内实验结果显示,ALKBH5可通过调节PRPF6的表达参与HCC细胞的恶性增殖。此外,敲低ALKBH5会抑制丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶(serine-threonine kinase,AKT)和哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mammalian target of rapamycin,mTOR)的磷酸化,而PRPF6的过表达则有助于AKT和mTOR的磷酸化。结论ALKBH5能促进HCC细胞的增殖,相关机制是通过ALKBH5/PRPF6/AKT/mTOR轴实现的。 展开更多
关键词 Alk B同源蛋白5 前mRNA加工因子6 N6-甲基腺苷 肝细胞癌 增殖
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骨甘蛋白在胃癌细胞干性维持及对化疗敏感性中的作用
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作者 邹岩 姜桂春 +1 位作者 李辉 谢艳敏 《消化肿瘤杂志(电子版)》 2022年第4期431-436,共6页
目的探究骨甘蛋白(OGN)对胃癌(GC)细胞干性与化疗耐药性的影响。方法实时荧光聚合酶链反应(RT-PCR)、蛋白质印迹法、免疫组织化学(IHC)联合癌症基因组图谱(The Cancer Genome Atlas,TCGA)数据库分析OGN在胃癌细胞和组织中的表达。CCK-8... 目的探究骨甘蛋白(OGN)对胃癌(GC)细胞干性与化疗耐药性的影响。方法实时荧光聚合酶链反应(RT-PCR)、蛋白质印迹法、免疫组织化学(IHC)联合癌症基因组图谱(The Cancer Genome Atlas,TCGA)数据库分析OGN在胃癌细胞和组织中的表达。CCK-8和克隆形成评估细胞增殖能力变化,通过流式细胞术对细胞凋亡进行测定,CCK-8检测OGN在GC细胞化疗抵抗中的作用。蛋白质印迹法检测细胞干性相关分子标志物表达变化。结果OGN在GC细胞表达低于其在胃黏膜细胞中表达(P<0.05);过表达OGN的GC细胞侵袭能力减弱(P<0.05),凋亡增加(P<0.05)。在铂类和氟尿嘧啶处理后,细胞存活比例下降,化疗抵抗减轻(P<0.05),OGN诱导了化疗耐药。过表达OGN抑制了干性标志物的表达。结论OGN在GC组织中低表达,过表达的OGN能够抑制细胞干性,影响化疗耐药。 展开更多
关键词 胃癌 骨甘蛋白 增殖 凋亡 干性 化疗耐药
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