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题名通过定点突变提高纳豆激酶纤溶活性和热稳定性
被引量：2
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作者
于晓淼
赵允章
王锋超
孙悦
刘宏生
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机构
辽宁大学生命科学院
辽宁大学药学院
辽宁省生物大分子计算模拟与信息处理专业技术创新中心
辽宁省药物分子模拟与设计工程实验室
沈阳市生物大分子计算模拟与信息处理重点实验室
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出处
《微生物学杂志》
CAS
CSCD
2023年第2期21-27,共7页
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基金
辽宁省“兴辽英才计划”项目(XLYC2002045)
辽宁省教育厅面上项目(LJKZ0088)
沈阳市科技特派团项目(21-116-3-48)。
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文摘
纳豆激酶(Nattokinase, NK)是一种纤溶酶,可溶解血栓,常用于治疗心血管疾病(CVDs)。然而,野生型NK往往表现出很少的纤溶能力和较低的热稳定性,针对如何提高NK的热稳定性和活性开展研究。使用重叠延伸PCR法将NK中位于194位的Ser替换为Pro,为验证突变后的热稳定性,将野生型NK和突变体S194P均在不同温度下孵育相同时间,使用纤维蛋白板法测定二者酶活,验证热稳定性。成功构建了pET-26b-NK_(s194p),测量酶活结果显示,野生型NK和突变体S194P酶活分别达到101.30 IU/mL和123.23 IU/mL,结果表明突变体S194P的酶活比野生型NK高(18.10±2)%,将野生型NK和突变体S194P在60~65℃温度下孵育30 min后测量酶活,野生型NK在63℃时丧失酶活,突变体S194P在65℃时丧失酶活,耐热温度提高2℃。结果表明,突变体S194p的蛋白结构在突变后发生了改变,使NK提高了耐热温度。
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关键词
纳豆激酶
定点诱变
纤溶活性
热稳定性
分子动力学模拟
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Keywords
nattokinase
site-directed
mutagenesis
fibrinolytic activity
thermal stability
molecular dynamics simulation
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分类号
Q936
[生物学—微生物学]
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