高糖微环境下小鼠晶状体上皮细胞中赖氨酸乙酰化的蛋白质组学分析 被引量：1

1

作者 韩笑 阎启昌 王欣玲 《中国医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第8期694-700,共7页

目的探讨高糖微环境下小鼠晶状体上皮细胞中赖氨酸乙酰化生物学过程和功能。方法采用小鼠晶状体上皮细胞系α-TN4建立正常处理组(葡萄糖5.5 mmol/L)和高糖处理组(葡萄糖45 mmol/L)。利用稳定同位素标记氨基酸标记2组细胞,使用泛乙酰化... 目的探讨高糖微环境下小鼠晶状体上皮细胞中赖氨酸乙酰化生物学过程和功能。方法采用小鼠晶状体上皮细胞系α-TN4建立正常处理组(葡萄糖5.5 mmol/L)和高糖处理组(葡萄糖45 mmol/L)。利用稳定同位素标记氨基酸标记2组细胞,使用泛乙酰化抗体富集,高分辨率液相色谱串联质谱(LC-MS/MS)检测和生物信息学数据挖掘。基因本体(GO)、亚细胞定位、真核直系同源组(KOG)、GO富集、京都基因与基因组百科全书(KEGG)富集、结构域富集和复合物富集分析小鼠晶状体上皮细胞中的乙酰化生物学过程和功能。结果在高糖微环境下,晶状体上皮细胞中乙酰化分别在分子功能、细胞成分、生物学过程、KOG和亚细胞定位中存在上调或下调变化;功能富集显示乙酰化主要参与和影响物质和能量代谢以及线粒体生物学过程。结论高糖诱导的赖氨酸乙酰化参与和改变多种生物功能、通路、结构域和蛋白质复合物,进而改变众多蛋白的表达及其功能。 展开更多

关键词 蛋白质组学 乙酰化 生物信息学 糖尿病性白内障

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不同表面处理和设计的人工晶状体生物相容性的实验研究 被引量：3

2

作者 王丝雨 石栋 +2 位作者 陆博 韩琳 马立威 《中国医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第3期214-219,共6页

目的比较2种不同表面处理和设计的人工晶状体(IOL)植入兔眼后的生物相容性。方法取10只新西兰白兔(20眼)行晶状体超声乳化吸除联合IOL植入术,每只新西兰白兔随机选择左右眼分别植入不同的IOL,植入经紫外线/臭氧后表面处理、袢表面磨砂... 目的比较2种不同表面处理和设计的人工晶状体(IOL)植入兔眼后的生物相容性。方法取10只新西兰白兔(20眼)行晶状体超声乳化吸除联合IOL植入术,每只新西兰白兔随机选择左右眼分别植入不同的IOL,植入经紫外线/臭氧后表面处理、袢表面磨砂化处理的HOYA Vivinex XY1 IOL为A组,植入经聚乙二醇全表面处理、袢表面光滑的AMO Tecnis PCB00 IOL为B组。比较术后1、7、14、28 d前房闪辉评分、晶状体后囊膜混浊评分及IOL旋转角度,术后28 d HE染色观察后囊膜晶状体上皮细胞增殖移行情况。结果术后1 d、7 d,A组平均前房闪辉评分大于B组,差异有统计学意义(P<0.05)。术后7 d、14 d、28 d,A组平均后囊膜混浊评分小于B组,差异有统计学意义(P<0.05)。术后1 d、7 d、14 d、28 d,A组IOL平均旋转角度小于B组,差异有统计学意义(P<0.05)。术后28 d HE染色显示,A组后囊膜表面仅见散在分布的单个或簇状晶状体上皮细胞,B组可见排列密集的单层或双层晶状体上皮细胞。结论经聚乙二醇全表面处理的IOL能够排斥炎症细胞的吸附,减轻术后炎症反应,葡萄膜生物相容性较好。经紫外线/臭氧后表面处理的IOL能够增加表面的黏附力,抑制晶状体上皮细胞的增殖与迁移,延缓并减轻后囊膜混浊的发生,囊膜生物相容性较好。IOL袢经磨砂化处理,可以增加袢与囊袋间的摩擦力,IOL囊袋内旋转稳定性较好。 展开更多

关键词 人工晶状体 生物相容性 葡萄膜生物相容性 囊膜生物相容性 旋转稳定性

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年龄相关性白内障患者miR-138的表达及其对人晶状体上皮细胞凋亡的影响 被引量：10

3

作者 陆博 马立威 +5 位作者 王欣玲 冯莉 江陵峰 王春霞 张劲松 阎启昌 《眼科新进展》 CAS 北大核心 2018年第2期111-115,共5页

目的检测miR-138在年龄相关性白内障晶状体组织中的表达情况,并探讨miR-138对人晶状体上皮细胞增殖和凋亡的影响及其可能的靶基因。方法采用实时荧光定量PCR(real-time quantitative polymerase chain reaction,RT-qP CR)检测年龄相关... 目的检测miR-138在年龄相关性白内障晶状体组织中的表达情况,并探讨miR-138对人晶状体上皮细胞增殖和凋亡的影响及其可能的靶基因。方法采用实时荧光定量PCR(real-time quantitative polymerase chain reaction,RT-qP CR)检测年龄相关性白内障患者(白内障组)与正常对照组中miR-138和预测靶基因沉默信息调节因子1(silent in-formation regulator 1,SIRT1)氉的表达水平。向人晶状体上皮细胞系(SRA01/04)细胞中分别转染miR-138模拟物、模拟物阴性对照物、miR-138抑制物、抑制物阴性对照物,采用RT-qP CR检测SIRT1的mR NA表达,Western blotting检测SIRT1的蛋白表达水平;转染72 h后细胞暴露于200μmol·L-1H2O21 h,Caspase-3活性检测试剂盒检测Caspase-3活性。双荧光素酶报告基因检测验证miR-138与SIRT1的靶向关系。结果与正常对照组相比,白内障组miR-138的表达(3.64±0.19)显著升高(P<0.001),SIRT1的mR NA表达(0.32±0.06)显著下降(P<0.001);相对于模拟物阴性对照组,miR-138模拟物组的SIRT1的mRNA(0.42±0.05)及蛋白(0.46±0.05)表达水平均明显降低,Caspase-3活性(3.24±0.17)明显升高(均为P<0.05);相对于抑制物阴性对照组,miR-138抑制物组的SIRT1的mR NA(2.95±0.13)及蛋白(1.98±0.12)表达水平均明显升高,Caspase-3活性(0.42±0.05)均明显下降(均为P<0.05);双荧光素酶报告基因检测确证SIRT1为miR-138的直接作用靶点。结论 miR-138在年龄相关性白内障患者晶状体囊膜中高表达,miR-138通过靶向性负性调控SIRT1表达,促进晶状体上皮细胞凋亡。 展开更多

关键词 miR-138 沉默信息调节因子1 年龄相关性白内障 凋亡 增殖

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microRNA let-7a对人晶状体上皮细胞凋亡的调控及其在白内障中的作用 被引量：7

4

作者 秦宇 赵江月 +6 位作者 闵晓洁 罗文婷 李晶 吴欣蔚 刘佳 阎启昌 张劲松 《中国医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第4期302-306,共5页

目的探讨micro RNA let-7a对人晶状体上皮细胞凋亡的调控作用及其在白内障中的作用。方法利用Real time q-PCR方法,检测年龄相关性白内障患者晶状体前囊膜和正常人眼晶状体前囊膜、人晶状体上皮细胞凋亡模型和正常人晶状体上皮细胞系let... 目的探讨micro RNA let-7a对人晶状体上皮细胞凋亡的调控作用及其在白内障中的作用。方法利用Real time q-PCR方法,检测年龄相关性白内障患者晶状体前囊膜和正常人眼晶状体前囊膜、人晶状体上皮细胞凋亡模型和正常人晶状体上皮细胞系let-7a的表达情况;利用Lipofectamine 2000瞬时转染let-7a mimic和let-7a inhibitor,分别上调和下调人晶状体上皮细胞中let-7a的表达,并利用Real time q-PCR方法验证转染效率,利用流式细胞仪检测细胞凋亡率的变化。结果年龄相关性白内障患者晶状体前囊膜组let-7a的表达显著低于正常对照组;人晶状体上皮细胞凋亡模型组let-7a的表达显著低于正常对照组;let-7a mimic转染组let-7a的表达显著高于对照组,let-7a inhibitor转染组let-7a的表达显著低于对照组;let-7a mimic转染组细胞凋亡率显著低于对照组,let-7a inhibitor转染组细胞凋亡率显著高于对照组,差异均有统计学意义(P<0.01)。结论 micro RNA let-7a能够调控人晶状体上皮细胞凋亡,从而在白内障发病过程中发挥重要作用,micro RNA let-7a可能成为白内障非手术治疗的新靶点。 展开更多

关键词 MICRO RNA let-7a 细胞凋亡 白内障

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三焦点衍射型人工晶状体植入术后视觉质量临床评价 被引量：6

5

作者 彭程 周星延 +1 位作者 赵江月 张劲松 《中国医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第5期385-389,共5页

目的比较三焦点衍射型人工晶状体(IOL)植入术后视力、屈光状态、视觉质量及满意度。方法选取在我院植入三焦点衍射型IOL (AT LISA tri839MP,Carl ZEISS)的患者40例(50只眼)。于术后1周、1个月、3个月时测试单眼裸眼远视力(UDVA)、裸眼... 目的比较三焦点衍射型人工晶状体(IOL)植入术后视力、屈光状态、视觉质量及满意度。方法选取在我院植入三焦点衍射型IOL (AT LISA tri839MP,Carl ZEISS)的患者40例(50只眼)。于术后1周、1个月、3个月时测试单眼裸眼远视力(UDVA)、裸眼中距离视力(UIVA)、裸眼近距离视力(UNVA)、离焦曲线、客观散射指数(OSI)、调制传递函数截止频率(MTF cutoff)、斯特列尔比(SR)、眼内散射光、高阶像差,采用主观调查问卷统计患者整体满意度、光晕发生率及脱镜率。应用重复测量的方差分析进行数据分析。结果患者术后1周、1个月、3个月的等效球镜均在目标度数±0.5 D范围内,与术前比较差异均有统计学意义(均P <0.001)。术后1周、1个月、3个月的UDVA、UIVA、UNVA均有明显提高,与术前比较差异均有统计学意义(均P <0.001),且均可到达0.3 logMAR或以上。术后3个月时,离焦曲线1.0 D～-2.5 D范围内,视力处于较高值,均>0.2 logMAR,且变化平缓。患者术后1周、1个月、3个月的log[s]与术前比较差异无统计学意义(F=0.460,P=0.710)。术后1周、1个月、3个月的OSI值较术前下降,且差异有统计学意义(F=16.813,P <0.001),术后1周、1个月、3个月的MTF cutoff、SR值较术前增大,差异有统计学意义(F=-1.469,P <0.001;F=3.405,P=0.019)。术后1周、1个月、3个月的球差较术前下降,且差异有统计学意义(F=18.913,P <0.001);术后各时间点的高阶像差、慧差、三叶草差、与术前比较,差异均无统计学意义(F=1.715 9,P=0.165;F=0.185 8,P=0.906;F=0.081,P=0.970;F=0.523,P=0.667)。术后整体满意度92%(46/50),日常生活舒适度94%(47/50),光晕发生率24%(12/25),脱镜率98%(49/50)。结论三焦点IOL可提供良好的全程视力,且患者主观满意度较高,术后视觉质量较好。 展开更多

关键词 三焦点 人工晶状体 视觉质量 离焦曲线 视敏度

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SUMO蛋白在体外培养的人晶状体上皮细胞内的表达及对氧化应激的调控作用 被引量：2

6

作者 韩笑 王欣玲 +2 位作者 吴迪 张劲松 阎启昌 《中国医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第3期193-198,共6页

目的：观察小泛素相关修饰物（SUMO）在体外正常培养的人晶状体上皮细胞系（SRA01/04）内的表达以及由高糖诱导的氧化应激条件下SUMO的变化，探讨其对氧化应激的调控作用。方法通过免疫细胞化学染色法，检测SUMO1，2/3，4蛋白在正常培养... 目的：观察小泛素相关修饰物（SUMO）在体外正常培养的人晶状体上皮细胞系（SRA01/04）内的表达以及由高糖诱导的氧化应激条件下SUMO的变化，探讨其对氧化应激的调控作用。方法通过免疫细胞化学染色法，检测SUMO1，2/3，4蛋白在正常培养的SRA01/04内的表达及分布；通过RT-PCR法，观察不同浓度和时间高糖处理时SUMO 1-4 mRNA的表达变化。按浓度实验分组：葡萄糖浓度分别为5.5、12.5、25、50 mmol/L作用24 h。按时间实验分组：葡萄糖浓度50 mmol/L作用0、6、12、24 h。将GFP-SUMO2质粒转入细胞后通过CCK8检测法和AV/PI双染流式细胞仪检测高糖（50 mmol/L）处理后，转染与非转染组的细胞存活率和细胞凋亡率。结果免疫细胞化学染色结果，SUMO 1-4蛋白在SRA01/04细胞内主要分布于细胞核，SUMO 2/3同时少量分布于胞质；RT-PCR结果可见，与低糖组比较，高糖组随着糖浓度增加SUMO1-SUMO4 mRNA表达增加（P〈0.05）；与50 mmol/L高糖处理0 h比较，随着处理时间增加SUMO1-SUMO4 mRNA表达增加（P〈0.05）。与非转染组比较，转染GFP-SUMO2的SRA01/04经高糖处理后存活率增加，凋亡率降低（P〈0.05）。结论 SUMO蛋白在SRA01/04内阳性表达，一定程度高糖诱导的氧化应激影响SUMO mRNA表达。 展开更多

关键词 小泛素相关修饰物 人晶状体上皮细胞 白内障 高糖 氧化应激

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3种小鼠晶状体组织石蜡切片固定液的比较 被引量：2

7

作者 于紫燕 王春霞 +2 位作者 孙琦 赵江月 张劲松 《中国医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第12期1063-1065,共3页

目的比较3种固定液对小鼠晶状体组织石蜡切片的影响,优化小鼠晶状体组织石蜡切片固定方法。方法选取3种常用固定液(改良Davison’s固定液、传统Davison’s固定液和10%中性甲醛固定液),固定小鼠晶状体组织,并制成石蜡切片,经HE染色后在... 目的比较3种固定液对小鼠晶状体组织石蜡切片的影响,优化小鼠晶状体组织石蜡切片固定方法。方法选取3种常用固定液(改良Davison’s固定液、传统Davison’s固定液和10%中性甲醛固定液),固定小鼠晶状体组织,并制成石蜡切片,经HE染色后在显微镜下观察。结果传统Davison’s固定液固定的晶状体组织切片无碎裂,改良Davison’s固定液固定的晶状体组织中央区碎裂。改良Davison’s固定液和传统Davison’s固定液固定的小鼠眼球外形均无明显变形和收缩,未见明显的视网膜脱离,镜下视网膜组织结构完整清晰,各层细胞排列紧密,无明显裂隙,染色鲜艳。采用10%中性甲醛固定液固定的小鼠眼球壁组织发生严重皱缩,晶状体组织皱缩,空隙和空泡形成。结论传统Davison’s固定液固定的小鼠眼球晶状体组织石蜡切片质量效果优于改良Davison’s固定液和10%中性甲醛固定液。 展开更多

关键词 小鼠眼球 石蜡切片 固定液 晶状体

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波前像差对术后晶状体后囊膜混浊诊治的临床意义 被引量：2

8

作者 马立威 张小霞 +3 位作者 周文凯 石栋 徐静娴 张劲松 《中国医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第10期891-894,共4页

目的探讨波前像差在白内障超声乳化吸除联合人工晶状体植入术后晶状体后囊膜混浊患者视功能评价中的意义。方法收集于我院就诊的晶状体后囊膜混浊患者33例(38只眼),最佳矫正视力≥0.6,排除眼部合并有其他疾病史及i Trace视觉功能分析仪... 目的探讨波前像差在白内障超声乳化吸除联合人工晶状体植入术后晶状体后囊膜混浊患者视功能评价中的意义。方法收集于我院就诊的晶状体后囊膜混浊患者33例(38只眼),最佳矫正视力≥0.6,排除眼部合并有其他疾病史及i Trace视觉功能分析仪不能准确测量的患者,行Nd:YAG激光晶状体后囊膜切开术(晶状体后囊膜切开直径约为5 mm)。分别于手术前后进行波前像差检查,并进行统计学分析。结果术前与术后最佳矫正视力的差异无统计学意义(P>0.05),术后1 h眼压、房水荧光值与术前比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。术后球镜度、波前像差中总像差、总高阶像差均较术前明显下降(3.0和5.0 mm瞳孔下),差异有统计学意义(P<0.05)。术后3个月无视网膜脱离、黄斑囊样水肿和人工晶状体移位等并发症发生。结论波前像差可灵敏、客观地反映人工晶状体眼合并晶状体后囊膜混浊的视功能状态,可为Nd:YAG激光治疗人工晶状体眼后囊膜混浊手术时机的选择提供参考依据。 展开更多

关键词 波前像差 ND:YAG 白内障 人工晶状体眼 后囊膜混浊

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液相色谱-线性离子阱串联质谱法检测人正常晶状体水溶性蛋白质 被引量：3

9

作者 姚志斌 宁远 +1 位作者 赵宇 张劲松 《眼科新进展》 CAS 北大核心 2011年第1期16-19,共4页

目的检测和分析人正常晶状体水溶性蛋白质的组成和功能。方法通过聚丙烯酰胺凝胶和液相色谱分离晶状体中的水溶性蛋白质,应用线性离子阱串联质谱仪鉴定蛋白质。运用基因本体论(geneontology,GO)对鉴定出的蛋白质的表达功能进行富集和缺... 目的检测和分析人正常晶状体水溶性蛋白质的组成和功能。方法通过聚丙烯酰胺凝胶和液相色谱分离晶状体中的水溶性蛋白质,应用线性离子阱串联质谱仪鉴定蛋白质。运用基因本体论(geneontology,GO)对鉴定出的蛋白质的表达功能进行富集和缺失分析。结果鉴定出人正常水溶性晶状体蛋白质242个,包括许多酶类等重要的功能性蛋白。鉴定出的晶状体水溶性蛋白质参与细胞组成显示富集结果有:眼晶状体结构组成、细胞质、细胞内、细胞内部件、细胞骨架;参与分子功能显示富集结果有:催化活性、结构分子活性、氧化还原酶活性、异构酶活性;参与生物过程显示富集结果有:糖酵解、戊糖磷酸旁路、细胞大分子分解代谢过程、NADP代谢过程、烟酰胺代谢过程、吡啶核苷酸代谢过程、NADPH再生、细胞成分结构和生物合成的调节、以微管为基础的过程。运用GO分析结果表明,鉴定出蛋白质的功能与晶状体正常的生理活动密切相关,进一步证实鉴定结果的可靠性。结论线性离子阱串联质谱仪在晶状体水溶性蛋白质鉴定方面显示独特的优势。采用基于GO的功能分析等生物信息学分析方法是对蛋白质组学研究的有益补充。 展开更多

关键词 人类 晶状体蛋白质类 高效液相色谱 生物质谱 生物信息学

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Doxycycline诱导表达Msx2-GFP的鼠晶状体上皮Alpha-TN4细胞株的建立 被引量：1

10

作者 张娇 于紫燕 赵江月 《中国医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第6期499-501,506,共4页

目的利用基因开关调节系统(Tet-on),拟建立由doxycycline调控表达的Msx2诱导细胞株,经与SWISS-2DPAGEDATA比对,发现差异蛋白点。方法向鼠晶状体上皮细胞(Alpha-TN4)中稳定转染质粒Msx2-GFP-M2和TAP-GFP-M2,转染后的细胞经过G418筛选,挑... 目的利用基因开关调节系统(Tet-on),拟建立由doxycycline调控表达的Msx2诱导细胞株,经与SWISS-2DPAGEDATA比对,发现差异蛋白点。方法向鼠晶状体上皮细胞(Alpha-TN4)中稳定转染质粒Msx2-GFP-M2和TAP-GFP-M2,转染后的细胞经过G418筛选,挑出doxycycline诱导Msx2-GFP表达且具有较低背景的诱导细胞株M8,将空载体细胞株T9作为阴性对照细胞株。并对2组细胞行二维凝胶电泳(2-DE)及基因表达微阵列进行分析。结果从二维凝胶电泳图谱上获得蛋白质斑点。对照组T9检测到5389个斑点,实验组M8检测到5460个斑点。经与SWISS-2DPAGEDATA比对,发现差异蛋白点。经基因表达微阵列分析发现,与晶状体及白内障疾病相关的差异基因为Col3α1,并在RNA水平进行了验证。结论Msx2基因过表达对Alpha-TN4蛋白质表达谱有影响,其中差异基因Col3α1与晶状体及白内障疾病相关。 展开更多

关键词 Msx2 Col3α1 Tet-on系统 晶状体上皮细胞 诱导细胞株

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Mfn2在TGF-β2诱导的晶状体上皮细胞上皮-间质转化中的作用 被引量：1

11

作者 于童 张劲松 《眼科新进展》 CAS 北大核心 2020年第3期206-210,共5页

目的研究线粒体融合蛋白基因2(mitofusin 2,Mfn2)在转化生长因子β2(transforming growth factorβ2,TGF-β2)诱导的人晶状体上皮细胞(human lens epithelial cells,HLECs)发生上皮-间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)过... 目的研究线粒体融合蛋白基因2(mitofusin 2,Mfn2)在转化生长因子β2(transforming growth factorβ2,TGF-β2)诱导的人晶状体上皮细胞(human lens epithelial cells,HLECs)发生上皮-间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)过程中的表达及作用。方法实时荧光定量PCR检测不同浓度(10 ng·mL-1、50 ng·mL-1、100 ng·mL-1)TGF-β2处理HLECs 24 h后,各TGF-β2处理组与对照组(0 ng·mL-1 TGF-β2)Mfn2 mRNA表达量差异。选取最佳作用浓度后,免疫荧光细胞化学检测TGF-β2处理组与对照组的Mfn2蛋白表达变化,实时荧光定量PCR和免疫荧光细胞化学检测分别验证TGF-β2处理组与对照组中E-钙黏蛋白(E-Cadherin)和波形蛋白(Vimentin)mRNA表达量和蛋白表达变化。Mfn2基因荧光表达载体(pEGFP-Mfn2)转染后实时荧光定量PCR和免疫荧光细胞化学检测分别验证转染组和对照组Mfn2、E-Cadherin和Vimentin mRNA表达量差异和蛋白表达变化。结果TGF-β2处理组与对照组相比,E-Cadherin mRNA表达量减少;Vimentin、Mfn2的mRNA表达量均增加,且差异均有统计学意义(均为P<0.001)。E-Cadherin蛋白表达降低,Vimentin、Mfn2的蛋白表达增加。成功转染Mfn2后转染组与对照组相比,E-Cadherin mRNA表达量下调,Vimentin mRNA表达量均增加,差异均有统计学意义(均为P<0.001)。E-Cadherin蛋白表达降低,Vimentin蛋白表达增加。结论HLECs在发生EMT时Mfn2表达量上调,过表达Mfn2可使HLECs发生EMT。Mfn2参与了TGF-β2诱导的HLECs的EMT过程。 展开更多

关键词 线粒体融合蛋白 转化生长因子Β2 晶状体上皮细胞 上皮-间质转化

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不同损伤条件下热休克蛋白27在人晶状体上皮细胞中的表达

12

作者 马立威 张雪岩 +1 位作者 许军 张劲松 《中国医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第9期795-797,共3页

目的观察不同损伤条件下热休克蛋白27(HSP27)在人晶状体上皮细胞系SRA01中的表达情况。方法体外培养人晶状体上皮细胞系SRA01,在添加香烟烟雾凝聚物(CSC,25 mg/mL)或过氧化氢(H2O2,50 mmol/L)条件下培养30 min后,恢复至正常培养条件。... 目的观察不同损伤条件下热休克蛋白27(HSP27)在人晶状体上皮细胞系SRA01中的表达情况。方法体外培养人晶状体上皮细胞系SRA01,在添加香烟烟雾凝聚物(CSC,25 mg/mL)或过氧化氢(H2O2,50 mmol/L)条件下培养30 min后,恢复至正常培养条件。分别于处理0,2,4,6,16,24 h时,采用免疫细胞化学、RT-PCR法检测细胞中HSP27的表达情况。结果在生理和应激情况下,人晶状体上皮细胞内均有HSP27的表达。应激损伤后4 h,HSP27 mRNA和蛋白的表达明显增加,8 h达最高峰,24 h仍维持在较高水平。CSC组细胞HSP27的表达较过氧化损伤组弱(P<0.05)。结论体外培养的人晶状体上皮细胞中存在HSP27的表达。不同损伤应激可诱导HSP27的表达增加,HSP27可能通过对抗应激作用保护晶状体上皮细胞。 展开更多

关键词 应激 热休克蛋白27 晶状体上皮细胞 过氧化损伤 香烟烟雾凝聚物

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微小RNA-133b对紫外线诱导的晶状体上皮细胞凋亡的抑制作用及其调控机制 被引量：12

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作者 李晓彤 秦宇 +2 位作者 赵江月 闵锐 张劲松 《中华实验眼科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2017年第11期977-983,共7页

背景 研究证实紫外线B照射是白内障发生的主要原因之一，其机制与晶状体上皮细胞（LECs）凋亡有关。微小RNA-133b（miR-133b）参与氧化应激诱导的LECs凋亡的调控过程，但其是否参与紫外线诱导白内障的发病过程及其机制尚未阐明。 目... 背景 研究证实紫外线B照射是白内障发生的主要原因之一，其机制与晶状体上皮细胞（LECs）凋亡有关。微小RNA-133b（miR-133b）参与氧化应激诱导的LECs凋亡的调控过程，但其是否参与紫外线诱导白内障的发病过程及其机制尚未阐明。 目的 观察miR-133b对紫外线诱导白内障LECs凋亡的抑制作用及其调控机制。 方法 将20只8周龄SPF级C57BL/6小鼠采用随机数字表法分为白内障模型组和正常对照组，其中白内障模型组小鼠用波长302 nm的紫外线直接照射眼部5 min，照射强度为300 W/cm2，每天照射1次，共照射1周；正常对照组小鼠不给于任何干预。于末次照射后24 h处死各组小鼠并摘出10只眼球以制备全眼球切片。取人LECs细胞系（SRA01/04）紫外线照射25 min，并继续培养4 h作为紫外线照射组，正常对照组细胞不作任何干预。取紫外线照射模型组细胞接种于96孔板并分为miR-133b模拟物组、模拟物阴性对照组、miR-133b抑制物组和抑制物对照组，分别用lipofectamine2000联合50 nmol/L miR-133b模拟物、miR-133b模拟物对照剂、100 nmol/L miR-133b抑制物或miR-133b抑制物对照剂瞬时转染细胞。采用实时荧光定量PCR法检测小鼠晶状体组织和不同转染组人LECs中miR-133b mRNA及其预测靶基因BCL2L2 mRNA的表达以评估转染效率；采用TUNEL凋亡检测试剂盒检测小鼠晶状体组织中LECs和不同转染组人LECs的凋亡情况。 结果 正常对照组小鼠晶状体前囊膜LECs排列规则，未发现TUNEL染色阳性细胞，白内障模型组小鼠LECs排列稀疏，可见凋亡细胞呈红色荧光。紫外线照射组细胞凋亡率为（43.90±9.30）%，明显高于正常对照组的（1.08±0.49）%，差异有统计学意义（t＝－7.963，P＝0.015）。白内障模型组小鼠晶状体组织和紫外线照射组细胞中miR-133b mRNA的相对表达量分别低于正常对照组小鼠和正常人LECs，差异均有统计学意义（t＝－2.958，P＝0.042；t＝－6.195，P＝0.003）。白内障模型组小鼠晶状体组织和紫外线照射组细胞中BCL2L2 mRNA的相对表达量分别高于正常对照组小鼠和正常人LECs，差异均有统计学意义（t＝3.761，P＝0.020；t＝12.437，P＝0.000）。miR-133b模拟物组人LECs中miR-133b mRNA的相对表达量明显高于miR-133b模拟物对照组，而BCL2L2 mRNA的相对表达量明显低于miR-133b模拟物对照组，差异均有统计学意义（t＝10.883、－5 927.617，均P〈0.01）；miR-133b抑制物组人LECs中miR-133b mRNA的相对表达量明显低于miR-133b抑制物对照组，而BCL2L2 mRNA的相对表达量明显高于miR-133b抑制物对照组，差异均有统计学意义（t＝－1 606.622、17.556，均P〈0.01）。miR-133b模拟物组LECs凋亡率明显低于miR-133b模拟物对照组[（17.55±4.24）%与（43.62±9.19）%]，miR-133b抑制物组LECs凋亡率为（78.23±12.42）%，明显高于miR-133b抑制物对照组的（48.01±9.68）%，差异均有统计学意义（t＝－4.462，P＝0.011；t＝3.324，P＝0.029）。 结论 miR-133b可防止紫外线照射所致的白内障的形成，其机制可能与靶向负性调控BCL2L2基因从而调控LECs的凋亡过程有关。 展开更多

关键词 微小RNA 紫外线/不良作用 辐射损伤/病理 白内障/防控 晶状体上皮细胞 近交系 C57BL小鼠 微小RNA-133b

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miR-125b在小鼠白内障模型与人晶状体上皮细胞凋亡模型中的调控作用 被引量：3

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作者 李阳 姜凌峰 +3 位作者 廉飞玥 樊保良 邵雨双 秦宇 《中国医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第9期769-775,共7页

目的研究在紫外线诱导的小鼠白内障模型与人晶状体上皮细胞凋亡模型中微小RNA-125b(miR-125b)靶向调控BAK1的作用机制。方法利用LipofectamineTM RNAiMAX分别转染miR-125b模拟物(mimic)、模拟物阴性对照(mimic control)、miR-125b抑制物... 目的研究在紫外线诱导的小鼠白内障模型与人晶状体上皮细胞凋亡模型中微小RNA-125b(miR-125b)靶向调控BAK1的作用机制。方法利用LipofectamineTM RNAiMAX分别转染miR-125b模拟物(mimic)、模拟物阴性对照(mimic control)、miR-125b抑制物(inhibitor)、抑制物阴性对照(inhibitor control)至人晶状体上皮细胞系SRA01/04,分别上调和下调细胞中miR-125b的表达,48 h后用紫外线UVB(360μW/cm2)照射25 min,构建细胞凋亡模型。用UVB(360μW/cm2)照射小鼠左眼,制作白内障模型,收集小鼠晶状体囊膜。用实时qPCR验证转染效率,并检测miR-125b及其预测靶基因BAK1 mRNA的表达。用Western blotting检测BAK1蛋白的表达,用TUNEL凋亡检测法检测人晶状体上皮细胞凋亡率。结果与正常人晶状体上皮细胞比较,人晶状体上皮细胞凋亡模型中miR-125b的表达显著降低,BAK1表达显著升高,细胞凋亡增加;与转染miR-125b mimic control组相比,转染miR-125b mimic组miR-125b的表达显著增高,BAK1表达显著降低,细胞凋亡减少;与转染miR-125b inhibitor control组相比,转染miR-125b inhibitor组miR-125b的表达显著降低,BAK1表达显著升高,细胞凋亡增加。与未照射组相比,紫外线UVB照射组小鼠晶状体囊膜组织中miR-125b的表达显著降低,BAK1表达显著升高,细胞凋亡增加。结论miRNA-125b可能通过靶向调控BAK1影响人晶状体上皮细胞凋亡,从而调控白内障发病,可能成为非手术靶向治疗白内障的新方法。 展开更多

关键词 微小RNA-125b BAK1 凋亡 白内障

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过表达ATG4A对晶状体上皮细胞上皮-间质转化的影响 被引量：2

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作者 闫楚凡 王静 张劲松 《中国医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第5期391-395,共5页

目的探讨自噬相关基因4A(ATG4A)过表达对晶状体上皮细胞中上皮-间质转化水平的影响。方法用细胞转染的方法在晶状体上皮细胞中过表达ATG4A并设为过表达ATG4A组(OE-ATG4A组),转染进空载体的细胞设为阴性对照组(NC组),通过实时q PCR和West... 目的探讨自噬相关基因4A(ATG4A)过表达对晶状体上皮细胞中上皮-间质转化水平的影响。方法用细胞转染的方法在晶状体上皮细胞中过表达ATG4A并设为过表达ATG4A组(OE-ATG4A组),转染进空载体的细胞设为阴性对照组(NC组),通过实时q PCR和Western blotting方法分别检测2组细胞上皮-间质转化水平,并测定2组活性氧(ROS)水平。结果与NC组比较,OE-ATG4A组晶状体上皮细胞上皮-间质转化水平明显升高(P<0.05),但ROS水平无统计学差异(P>0.05),说明ATG4A能够促进上皮-间质转化水平,但不影响ROS水平。结论ATG4A能够促进晶状体上皮细胞中上皮-间质转化。 展开更多

关键词 自噬相关基因4A 晶状体 上皮-间质转化 活性氧

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基于体外分区囊袋模型的不同类型人工晶状体对晶状体上皮细胞迁移的抑制作用

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作者 廉飞玥 李阳 +5 位作者 姜凌峰 沈皓月 赵江月 严肖啸 于佳明 秦宇 《中华实验眼科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2022年第5期395-402,共8页

目的构建体外分区囊袋模型,探讨不同类型360°连续直角边缘人工晶状体(IOL)对晶状体上皮细胞(LECs)迁移的抑制作用。方法使用Transwell小室、细胞爬片、人源Ⅳ型胶原、IOL建立后发性白内障(PCO)体外分区囊袋模型作为模型组,并设置... 目的构建体外分区囊袋模型,探讨不同类型360°连续直角边缘人工晶状体(IOL)对晶状体上皮细胞(LECs)迁移的抑制作用。方法使用Transwell小室、细胞爬片、人源Ⅳ型胶原、IOL建立后发性白内障(PCO)体外分区囊袋模型作为模型组,并设置一个空白处理的Transwell小室作为对照组。人LECs细胞系SRA01/04培养于各组Transwell小室中,应用倒置显微镜观察各组中PCO早期病理表现;采用苏木精-伊红染色观察各组细胞形态改变。根据体外分区囊袋模型植入的IOL类型分为平台板式袢HydroSmart组、C型袢HydroSmart组、C型补偿袢Hydrophobic组,并设置不植入IOL为空白对照组。应用Transwell法检测各组IOL前囊膜区迁移细胞数目并计算前囊膜细胞迁移抑制率;应用细胞排斥区分析法检测各组IOL后囊膜区细胞迁移数目并计算后囊膜细胞迁移抑制率。结果模型组细胞培养48 h后体外分区囊袋模型后囊膜区可见细胞形成类似早期Soemmering环和小型Elschnig珍珠样小体等PCO特征性病理表现;苏木精-伊红染色显示模型组迁移的细胞呈纤维状。对照组中均未见类似细胞分布及形态改变。平台板式袢HydroSmart组、C型袢HydroSmart组、C型补偿袢Hydrophobic组前囊膜区域单位面积迁移细胞计数分别为18.80±5.53、24.67±9.80和34.47±10.80,后囊膜袢光学部移行区迁移细胞计数分别为56.43±9.00、162.20±16.38和121.30±12.01,IOL前囊膜细胞迁移抑制率分别为(92.02±1.94)%、(89.76±3.10)%和(86.27±4.54)%;后囊膜细胞迁移抑制率分别为(91.60±3.65)%、(70.14±5.35)%和(78.43±3.48)%。平台板式袢HydroSmart组前囊膜区迁移细胞数目明显少于C型补偿袢Hydrophobic组,细胞迁移抑制率明显高于C型补偿袢Hydrophobic组,差异均有统计学意义(均P<0.05);平台板式袢HydroSmart组后囊膜袢光学部移行区迁移细胞数、细胞迁移抑制率明显高于C型袢HydroSmart组和C型补偿袢Hydrophobic组,差异均有统计学意义(均P<0.001)。结论成功构建体外分区囊袋模型。与C型袢HydroSmart IOL、C型补偿袢Hydrophobic IOL相比,HydroSmart平台板式袢IOL能更有效抑制LECs的迁移。 展开更多

关键词 白内障 后囊膜混浊 细胞迁移抑制 人工晶状体 晶状体上皮细胞 体外囊袋模型

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不同设计疏水性丙烯酸酯人工晶状体襻黏性对比研究 被引量：3

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作者 胡艺平 王静 +3 位作者 李史序 刘彧琦 李博文 张劲松 《中国医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第6期537-540,共4页

目的比较不同设计的疏水性丙烯酸酯人工晶状体襻与光学区的黏性。方法选取4种人工晶状体(HOYA iSert■251,Lucia 601P,Tecnis ZCB00,IQ SN60WF),在添加及不添加粘弹剂状态下将襻折叠于光学区中央,并施加0.02~0.7 N的作用力,观察并记录... 目的比较不同设计的疏水性丙烯酸酯人工晶状体襻与光学区的黏性。方法选取4种人工晶状体(HOYA iSert■251,Lucia 601P,Tecnis ZCB00,IQ SN60WF),在添加及不添加粘弹剂状态下将襻折叠于光学区中央,并施加0.02~0.7 N的作用力,观察并记录襻与光学区的分离时间,即黏附分离时间。对各组的黏附分离时间和力进行线性回归分析,并对黏性进行比较。结果无粘弹剂时,Lucia 601P、Tecnis ZCB00、IQ SN60WF的黏附分离时间均>200 s,而相同外力条件下,HOYA iSert■251的黏附分离时间明显低于其他3组;添加粘弹剂时,4种IOL均可产生襻黏附现象,且黏附分离时间随力的增大而延长。线性回归结果显示,黏附分离时间均与力存在线性关系(P<0.01),黏性大小关系(斜率)为HOYA iSert■251﹤Tecnis ZCB00﹤IQ SN60WF﹤Lucia601P。结论疏水性丙烯酸酯IOL会出现襻与光学区的黏附分离现象,添加粘弹剂时黏附时间缩短,HOYA iSert■251的聚甲基丙烯酸甲酯(PMMA)支撑部前端设计减少了粘襻现象的发生。 展开更多

关键词 白内障 人工晶状体 疏水性丙烯酸酯 粘襻现象

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糖尿病视网膜病变基因相关研究热点的文献计量学分析 被引量：2

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作者 赵芳坤 张劲松 +2 位作者 施蓓 宋雨凌 许军 《中国医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第12期1067-1071,1076,共6页

目的从文献计量学的角度系统分析近7年糖尿病视网膜病变(DR)基因相关文献的分布规律及研究热点,为开展DR相关基础研究提供参考依据。方法以PubMed数据库为数据源,对2010年1月至2017年12月所收录的DR基因相关文献采用书目信息共现挖掘系... 目的从文献计量学的角度系统分析近7年糖尿病视网膜病变(DR)基因相关文献的分布规律及研究热点,为开展DR相关基础研究提供参考依据。方法以PubMed数据库为数据源,对2010年1月至2017年12月所收录的DR基因相关文献采用书目信息共现挖掘系统(BICOMS)进行统计分析,对高频主题词共现矩阵进行聚类分析、绘制战略坐标图。结果共检出DR基因相关文献1 193篇。通过对44个高频主题词及副主题词进行聚类分析,结果显示当前的热点主要集中在以下5个方面:(1) DR相关基因单核苷酸多态性的遗传学研究;(2)视网膜新生血管相关病理学、动物模型及遗传学研究;(3) DR相关腺病毒及信使RNA基因研究;氧化应激所致视网膜色素上皮细胞病变的研究;(4) DR药物治疗相关基因研究;(5)高糖血症所致视网膜血管内皮细胞凋亡的代谢性研究。战略坐标图显示:第一类、第五类研究密度及向心度均较高,其中DR相关基因单核苷酸多态性的遗传学研究处于核心地位,该类主题可以在一定程度上带动其余各主题的发展;第二类、第四类研究处于边缘,该方面研究较为薄弱,有可能成为未来发展的方向;第三类研究内在研究较差,需要加强自身研究,丰富主题内容。结论多元统计直观展示了近年来DR基因相关的研究现状、热点和趋势,为科研提供了参考信息。 展开更多

关键词 糖尿病视网膜病变 文献计量学 共词分析

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原发性视网膜脱离患者玻璃体切割术前后球后血流动力学的研究 被引量：6

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作者 时佼佼 马立威 +3 位作者 韩琳 于飞鸿 肖宇婷 石栋 《中国医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第6期495-498,共4页

目的探讨原发性视网膜脱离(RD)患者玻璃体切割术前后球后血流动力学的变化,以及硅油填充、视网膜激光光凝对血流的影响。方法本研究为前瞻性对照研究。17例RD患者(17眼)均行玻璃体切割术治疗,对侧眼为对照眼,分别于玻璃体切割术前、取... 目的探讨原发性视网膜脱离(RD)患者玻璃体切割术前后球后血流动力学的变化,以及硅油填充、视网膜激光光凝对血流的影响。方法本研究为前瞻性对照研究。17例RD患者(17眼)均行玻璃体切割术治疗,对侧眼为对照眼,分别于玻璃体切割术前、取油术后采用彩色多普勒超声仪检测眼动脉(OA)、视网膜中央动脉(CRA)以及睫状后动脉(PCA)的收缩期血流峰值速度(PSV)、舒张末期血流速度(EDV)、阻力指数(RI)。同时观察视网膜复位及视功能恢复情况。结果玻璃体切割术前RD眼的OA、CRA的PSV较对照眼显著降低,差异有统计学意义(P<0.05)。RD眼在硅油取出术后1周OA的PSV较术前显著增加,RI明显降低,差异有统计学意义(P<0.05)。硅油取出术后RD眼OA的RI与激光点数、硅油填充时间呈负相关,差异有统计学意义(P<0.05)。结论玻璃体切割术、术中光凝及硅油填充有助于视网膜复位,能够改善眼球血液供应。 展开更多

关键词 经睫状体平部玻璃体切除术 彩色多普勒超声血流显像 球后血流参数

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基于网络药理学探究银杏叶治疗非动脉炎性前部缺血性视神经病变的机制 被引量：7

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作者 张梦 王欣玲 《眼科新进展》 CAS 北大核心 2021年第11期1037-1042,共6页

目的基于网络药理学研究银杏叶相关药物成分治疗非动脉炎性前部缺血性视神经病变(NAION)的潜在生物学机制。方法利用传统中药网络数据库收集银杏叶的主要化学成分以及潜在的蛋白靶点,使用OMIM等数据库检索NAION疾病相关靶点。将上述靶... 目的基于网络药理学研究银杏叶相关药物成分治疗非动脉炎性前部缺血性视神经病变(NAION)的潜在生物学机制。方法利用传统中药网络数据库收集银杏叶的主要化学成分以及潜在的蛋白靶点,使用OMIM等数据库检索NAION疾病相关靶点。将上述靶点导入Venn软件获得二者的交集靶点。导入String数据库进行蛋白相互作用分析,并将数据结果导入Cytoscape-v3.8.2软件构建药材-化合物-靶点-通路网络图。利用Cytoscape-v3.8.2软件中插件筛选出核心靶点。运用David数据库进行生物富集以及信号通路转导分析,利用R语言对其进行可视化。利用分子对接软件进行分子对接模拟,验证药物和靶点分子连接程度。结果经筛选显示,银杏叶用于治疗的主要活性成分有20个,其主要为槲皮素、山奈酚、毛地黄黄酮,以及对应521个蛋白靶点,NAION的靶点有756个,二者交集靶点有26个。经过Cytoscape-v3.8.2软件中插件分别得到靶点数Hub集8个、MCC集12个、MCODE集24个,3个数据集的靶点取交集共筛选出8个核心靶点,分别为VEGFA、JUN、EGF、RELA、APP、ESR1、FOS、MYS。涉及通路有肿瘤通路、T细胞受体信号通路、PI3K-Akt信号通路、MAPK信号通路等,主要发挥抗炎、抗氧化、调节免疫以及神经保护等作用。结论基于网络药理学的综合分析,得到银杏叶有效成分治疗NAION的主要作用靶点及对应的信号通路,为后期实验验证提供了新的思路和生物信息学基础。 展开更多

关键词 银杏叶 非动脉炎性前部缺血性视神经病变 网络药理学 富集分析

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