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H5N1亚型禽流感病毒NS1基因截短体的克隆与原核表达
被引量：
3
1
作者
郑方亮
朱春玉
+7 位作者
商玲玲
马杰良
孙婷婷
艾海新
朱俊峰
段艳婷
朱应
刘宏生
《微生物学杂志》
CAS
CSCD
2012年第3期1-6,共6页
禽流感病毒H5N1 NS1蛋白是一种非结构蛋白,在病毒感染过程中发挥着重要的作用。构建基因截短的重组蛋白,可为进一步研究NS1不同结构域与宿主蛋白间的相互作用奠定基础。在成功克隆禽流感病毒H5N1全长NS1基因并测序的基础上,将部分截短...
禽流感病毒H5N1 NS1蛋白是一种非结构蛋白,在病毒感染过程中发挥着重要的作用。构建基因截短的重组蛋白,可为进一步研究NS1不同结构域与宿主蛋白间的相互作用奠定基础。在成功克隆禽流感病毒H5N1全长NS1基因并测序的基础上,将部分截短基因序列克隆到表达载体pET28a(+)上,构建基因截短的重组表达质粒pET28a-NS1-RBD和pET28a-NS1-ED,转化大肠埃希菌BL21(DE3),阳性重组质粒经IPTG诱导表达后进行SDS-PAGE检测,获得预期蛋白的表达,然后利用Ni-NTA树脂蛋白纯化系统对重组蛋白进行纯化,并通过Western Blotting进一步确认NS1及截短体蛋白的表达。结果表明,实验成功构建禽流感病毒H5N1亚型的NS1蛋白截短体,并在大肠埃希菌中高效表达,这为进一步研究NS1蛋白不同结构域与宿主蛋白的相互作用提供了实验材料,为深入研究NS1蛋白的生物学功能奠定了坚实基础。
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关键词
禽流感病毒H5N1
NS1
截短体
原核表达
纯化
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职称材料
禽流感病毒NS1蛋白亚细胞定位研究
被引量：
1
2
作者
朱春玉
孙婷婷
+5 位作者
郑方亮
艾海新
朱俊丰
王宁
商玲玲
刘宏生
《动物医学进展》
CSCD
北大核心
2011年第10期10-14,共5页
为深入研究NS1蛋白的生物学功能,了解NS1蛋白在哺乳动物细胞中的分布和亚细胞定位情况。采用RT-PCR扩增出禽流感病毒NS1基因片段,克隆至载体pEGFP-N1,经酶切和测序鉴定后,将构建的重组质粒pEGFP-N1-NS1经脂质体介导转染293T细胞和Hela细...
为深入研究NS1蛋白的生物学功能,了解NS1蛋白在哺乳动物细胞中的分布和亚细胞定位情况。采用RT-PCR扩增出禽流感病毒NS1基因片段,克隆至载体pEGFP-N1,经酶切和测序鉴定后,将构建的重组质粒pEGFP-N1-NS1经脂质体介导转染293T细胞和Hela细胞,在荧光显微镜和激光扫描共聚焦显微镜下观察NS1在细胞中的分布、亚细胞定位情况。成功构建了真核重组表达质粒pEGFP-N1-NS1,并在293T细胞及Hela细胞中得到高效表达。融合蛋白发出的绿色荧光表明NS1蛋白主要分布在细胞核,在胞浆中有少量表达。本研究成功在哺乳动物细胞中表达NS1蛋白,并对其进行亚细胞定位,为流感病毒的相关功能研究奠定了基础。
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关键词
禽流感病毒
NS1蛋白
亚细胞定位
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职称材料
题名
H5N1亚型禽流感病毒NS1基因截短体的克隆与原核表达
被引量：
3
1
作者
郑方亮
朱春玉
商玲玲
马杰良
孙婷婷
艾海新
朱俊峰
段艳婷
朱应
刘宏生
机构
辽宁大学生命科学院辽宁省高校动物资源与疫病防治重点实验室
辽宁省
生物大分子计算模拟与信息处理工程技术研究中心
出处
《微生物学杂志》
CAS
CSCD
2012年第3期1-6,共6页
基金
病毒学国家重点实验室开放研究基金(2010009)
辽宁省教育厅重点实验室项目(2009S043)
辽宁大学青年科研基金(LDQN-2011-06)
文摘
禽流感病毒H5N1 NS1蛋白是一种非结构蛋白,在病毒感染过程中发挥着重要的作用。构建基因截短的重组蛋白,可为进一步研究NS1不同结构域与宿主蛋白间的相互作用奠定基础。在成功克隆禽流感病毒H5N1全长NS1基因并测序的基础上,将部分截短基因序列克隆到表达载体pET28a(+)上,构建基因截短的重组表达质粒pET28a-NS1-RBD和pET28a-NS1-ED,转化大肠埃希菌BL21(DE3),阳性重组质粒经IPTG诱导表达后进行SDS-PAGE检测,获得预期蛋白的表达,然后利用Ni-NTA树脂蛋白纯化系统对重组蛋白进行纯化,并通过Western Blotting进一步确认NS1及截短体蛋白的表达。结果表明,实验成功构建禽流感病毒H5N1亚型的NS1蛋白截短体,并在大肠埃希菌中高效表达,这为进一步研究NS1蛋白不同结构域与宿主蛋白的相互作用提供了实验材料,为深入研究NS1蛋白的生物学功能奠定了坚实基础。
关键词
禽流感病毒H5N1
NS1
截短体
原核表达
纯化
Keywords
avian influenza virus H5N1
NS1
truncated body
prokaryotic expression
purification
分类号
Q93 [生物学—微生物学]
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职称材料
题名
禽流感病毒NS1蛋白亚细胞定位研究
被引量：
1
2
作者
朱春玉
孙婷婷
郑方亮
艾海新
朱俊丰
王宁
商玲玲
刘宏生
机构
辽宁大学生命科学院辽宁省高校动物资源与疫病防治重点实验室
出处
《动物医学进展》
CSCD
北大核心
2011年第10期10-14,共5页
基金
国家自然科学基金项目(30671852)
病毒学国家重点实验室开放研究基金项目(2010009)
+2 种基金
辽宁省百千万人才工程项目(022064)
辽宁省教育厅重点实验室项目(2009S043)
辽宁大学青年科研基金项目(488020)
文摘
为深入研究NS1蛋白的生物学功能,了解NS1蛋白在哺乳动物细胞中的分布和亚细胞定位情况。采用RT-PCR扩增出禽流感病毒NS1基因片段,克隆至载体pEGFP-N1,经酶切和测序鉴定后,将构建的重组质粒pEGFP-N1-NS1经脂质体介导转染293T细胞和Hela细胞,在荧光显微镜和激光扫描共聚焦显微镜下观察NS1在细胞中的分布、亚细胞定位情况。成功构建了真核重组表达质粒pEGFP-N1-NS1,并在293T细胞及Hela细胞中得到高效表达。融合蛋白发出的绿色荧光表明NS1蛋白主要分布在细胞核,在胞浆中有少量表达。本研究成功在哺乳动物细胞中表达NS1蛋白,并对其进行亚细胞定位,为流感病毒的相关功能研究奠定了基础。
关键词
禽流感病毒
NS1蛋白
亚细胞定位
Keywords
Avian influenza virus
NS1 protein
subcellular localization
分类号
S852.659 [农业科学—基础兽医学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
H5N1亚型禽流感病毒NS1基因截短体的克隆与原核表达
郑方亮
朱春玉
商玲玲
马杰良
孙婷婷
艾海新
朱俊峰
段艳婷
朱应
刘宏生
《微生物学杂志》
CAS
CSCD
2012
3
在线阅读
下载PDF
职称材料
2
禽流感病毒NS1蛋白亚细胞定位研究
朱春玉
孙婷婷
郑方亮
艾海新
朱俊丰
王宁
商玲玲
刘宏生
《动物医学进展》
CSCD
北大核心
2011
1
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