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犬黑皮质素受体4真核表达载体的构建及在COS-7细胞中的表达
被引量：
2
1
作者
聂茹
巴彩凤
+3 位作者
李会
张轶博
佟伟
苏荣健
《安徽农业科学》
CAS
北大核心
2007年第33期10608-10610,共3页
[目的]构建犬黑皮质素受体4真核表达载体并在COS-7细胞中进行瞬间表达。[方法]以犬MC4R线性DNA为模板,进行引物设计,PCR特异性扩增,扩增产物连接到pMD18-T载体上,酶切鉴定后测序。将该片段亚克隆到真核表达载体pcDNA3.1(+)。重组体pcD-N...
[目的]构建犬黑皮质素受体4真核表达载体并在COS-7细胞中进行瞬间表达。[方法]以犬MC4R线性DNA为模板,进行引物设计,PCR特异性扩增,扩增产物连接到pMD18-T载体上,酶切鉴定后测序。将该片段亚克隆到真核表达载体pcDNA3.1(+)。重组体pcD-NA3.1(+)-MC4R经过酶切和测序鉴定。采用FuGENE HD介导转染技术将pcDNA3.1(+)-MC4R导入COS-7细胞,提取细胞内总RNA,RT-PCR扩增犬MC4R基因的全长cDNA编码序列。[结果]克隆犬MC4R基因的全长cDNA序列,并以pcDNA3.1(+)表达载体为骨架,构建真核表达载体,测序的扩增片段与GenBank公布的模板序列经Blast比对相似性为99%。采用G418筛选,获得带有pcDNA3.1(+)-MC4R的COS-7细胞。[结论]成功构建犬真核表达载体pcDNA3.1(+)-MC4R,重组体能在真核细胞中表达。
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关键词
犬
黑皮质素受体4
pcDNA3.1(+)质粒
真核表达载体
COS-7细胞
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职称材料
犬黑皮质素受体4真核表达载体的构建及表达
被引量：
3
2
作者
王光川
巴彩凤
+4 位作者
苏荣健
张轶博
赵微
宋慧娟
武洁
《安徽农业科学》
CAS
北大核心
2008年第31期13564-13567,共4页
[目的]构建带myc和His标签的犬黑皮质素受体4真核表达载体并在MDCK细胞中进行表达。[方法]以犬MC4R基因组DNA为模板PCR扩增目的基因编码区,将扩增产物进行T-A克隆;酶切、测序鉴定成功后将目的基因亚克隆到真核表达载体pcDNA3.1-myc-His/...
[目的]构建带myc和His标签的犬黑皮质素受体4真核表达载体并在MDCK细胞中进行表达。[方法]以犬MC4R基因组DNA为模板PCR扩增目的基因编码区,将扩增产物进行T-A克隆;酶切、测序鉴定成功后将目的基因亚克隆到真核表达载体pcDNA3.1-myc-His/A。重组体pcDNA3.1-myc-His/A-cMC4R经酶切和测序鉴定;采用FuGENE HD介导转染技术将重组体导入MDCK细胞;转染后继续培养72 h,提取细胞内总RNA,RT-PCR鉴定目的基因的表达;提取细胞总蛋白,Western Blot检测蛋白表达。[结果]构建带标签的pcDNA3.1-myc-His/A-cMC4R重组真核表达载体,测序结果与GenBank公布的序列相似性为99%。RT-PCR和Western Blot检测到目的基因表达。[结论]成功构建犬真核表达载体pcDNA3.1-myc-His/A-MC4R,重组体能在MDCK细胞中表达。
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关键词
犬
黑皮质素受体4
真核表达载体
MDCK细胞
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职称材料
犬黑素皮质素受体-4裸质粒注射促进小鼠肥胖的研究
被引量：
1
3
作者
吕金钢
李久纯
+3 位作者
巴彩凤
王光川
苏荣健
张轶博
《安徽农业科学》
CAS
北大核心
2009年第15期7032-7034,7042,共4页
[目的]探讨犬黑素皮质素受体-4(MC4R)cDNA的重组真核表达质粒对小鼠肥胖的影响。[方法]3次尾静脉高压注射pcDNA3.1-myc-His/A-MC4R质粒,RT-PCR成功验证小鼠体内犬MC4R表达后,适时监测每只小鼠的体重,同窝小鼠相互对照,利用两两比较的秩...
[目的]探讨犬黑素皮质素受体-4(MC4R)cDNA的重组真核表达质粒对小鼠肥胖的影响。[方法]3次尾静脉高压注射pcDNA3.1-myc-His/A-MC4R质粒,RT-PCR成功验证小鼠体内犬MC4R表达后,适时监测每只小鼠的体重,同窝小鼠相互对照,利用两两比较的秩和检验进行统计学分析。另外,用脂肪组织病理切片分析小鼠皮下脂肪细胞变化。[结果]试验得出,小鼠体重变化有统计学意义;饲养时间相同、相互对照组的每一组小鼠脂肪细胞直径对比明显,且具有统计学意义。[结论]犬MC4R基因在小鼠体内表达,能促进小鼠体重增加,为犬MC4R调节肥胖机制的研究提供理论依据。
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关键词
犬
黑素皮质素受体-4
裸质粒注射
肥胖
基因转染
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职称材料
题名
犬黑皮质素受体4真核表达载体的构建及在COS-7细胞中的表达
被引量：
2
1
作者
聂茹
巴彩凤
李会
张轶博
佟伟
苏荣健
机构
辽宁医学院
实验
动物中心
辽宁医学院
免疫与病原
生物学
教研室
辽宁医学院省高校分子细胞生物学与新药开发重点实验室
出处
《安徽农业科学》
CAS
北大核心
2007年第33期10608-10610,共3页
基金
辽宁省科技基金项目(2004408003)
文摘
[目的]构建犬黑皮质素受体4真核表达载体并在COS-7细胞中进行瞬间表达。[方法]以犬MC4R线性DNA为模板,进行引物设计,PCR特异性扩增,扩增产物连接到pMD18-T载体上,酶切鉴定后测序。将该片段亚克隆到真核表达载体pcDNA3.1(+)。重组体pcD-NA3.1(+)-MC4R经过酶切和测序鉴定。采用FuGENE HD介导转染技术将pcDNA3.1(+)-MC4R导入COS-7细胞,提取细胞内总RNA,RT-PCR扩增犬MC4R基因的全长cDNA编码序列。[结果]克隆犬MC4R基因的全长cDNA序列,并以pcDNA3.1(+)表达载体为骨架,构建真核表达载体,测序的扩增片段与GenBank公布的模板序列经Blast比对相似性为99%。采用G418筛选,获得带有pcDNA3.1(+)-MC4R的COS-7细胞。[结论]成功构建犬真核表达载体pcDNA3.1(+)-MC4R,重组体能在真核细胞中表达。
关键词
犬
黑皮质素受体4
pcDNA3.1(+)质粒
真核表达载体
COS-7细胞
Keywords
Canis
Melanocortin receptor 4
Plasmid pcDNA3.1（＋）
Eukaryotic expressive vector
COS-7 cell
分类号
Q503.1 [生物学—生物化学]
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职称材料
题名
犬黑皮质素受体4真核表达载体的构建及表达
被引量：
3
2
作者
王光川
巴彩凤
苏荣健
张轶博
赵微
宋慧娟
武洁
机构
辽宁医学院
实验
动物中心
辽宁医学院省高校分子细胞生物学与新药开发重点实验室
辽宁医学院
免疫与病原
生物学
教研室
辽宁医学院
附属第一医院病理科
出处
《安徽农业科学》
CAS
北大核心
2008年第31期13564-13567,共4页
基金
辽宁省科技基金项目(2007408001-6)
文摘
[目的]构建带myc和His标签的犬黑皮质素受体4真核表达载体并在MDCK细胞中进行表达。[方法]以犬MC4R基因组DNA为模板PCR扩增目的基因编码区,将扩增产物进行T-A克隆;酶切、测序鉴定成功后将目的基因亚克隆到真核表达载体pcDNA3.1-myc-His/A。重组体pcDNA3.1-myc-His/A-cMC4R经酶切和测序鉴定;采用FuGENE HD介导转染技术将重组体导入MDCK细胞;转染后继续培养72 h,提取细胞内总RNA,RT-PCR鉴定目的基因的表达;提取细胞总蛋白,Western Blot检测蛋白表达。[结果]构建带标签的pcDNA3.1-myc-His/A-cMC4R重组真核表达载体,测序结果与GenBank公布的序列相似性为99%。RT-PCR和Western Blot检测到目的基因表达。[结论]成功构建犬真核表达载体pcDNA3.1-myc-His/A-MC4R,重组体能在MDCK细胞中表达。
关键词
犬
黑皮质素受体4
真核表达载体
MDCK细胞
Keywords
Canis
Melanocortin receptor 4
Eukaryotic expression vector
MDCK cell
分类号
Q782 [生物学—分子生物学]
在线阅读
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职称材料
题名
犬黑素皮质素受体-4裸质粒注射促进小鼠肥胖的研究
被引量：
1
3
作者
吕金钢
李久纯
巴彩凤
王光川
苏荣健
张轶博
机构
辽宁医学院
实验
动物中心
辽宁
省
锦州市动物防疫站
辽宁医学院省高校分子细胞生物学与新药开发重点实验室
辽宁医学院
免疫与病原微
生物学
教研室
出处
《安徽农业科学》
CAS
北大核心
2009年第15期7032-7034,7042,共4页
基金
辽宁省科技厅资金项目(2007408001-6)
文摘
[目的]探讨犬黑素皮质素受体-4(MC4R)cDNA的重组真核表达质粒对小鼠肥胖的影响。[方法]3次尾静脉高压注射pcDNA3.1-myc-His/A-MC4R质粒,RT-PCR成功验证小鼠体内犬MC4R表达后,适时监测每只小鼠的体重,同窝小鼠相互对照,利用两两比较的秩和检验进行统计学分析。另外,用脂肪组织病理切片分析小鼠皮下脂肪细胞变化。[结果]试验得出,小鼠体重变化有统计学意义;饲养时间相同、相互对照组的每一组小鼠脂肪细胞直径对比明显,且具有统计学意义。[结论]犬MC4R基因在小鼠体内表达,能促进小鼠体重增加,为犬MC4R调节肥胖机制的研究提供理论依据。
关键词
犬
黑素皮质素受体-4
裸质粒注射
肥胖
基因转染
Keywords
Canis
Melanocortin receptor-4
Naked plasmid injection
Obesity
Gene transfection
分类号
Q789 [生物学—分子生物学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
犬黑皮质素受体4真核表达载体的构建及在COS-7细胞中的表达
聂茹
巴彩凤
李会
张轶博
佟伟
苏荣健
《安徽农业科学》
CAS
北大核心
2007
2
在线阅读
下载PDF
职称材料
2
犬黑皮质素受体4真核表达载体的构建及表达
王光川
巴彩凤
苏荣健
张轶博
赵微
宋慧娟
武洁
《安徽农业科学》
CAS
北大核心
2008
3
在线阅读
下载PDF
职称材料
3
犬黑素皮质素受体-4裸质粒注射促进小鼠肥胖的研究
吕金钢
李久纯
巴彩凤
王光川
苏荣健
张轶博
《安徽农业科学》
CAS
北大核心
2009
1
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职称材料
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